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温州市科技局资助项目(2009Y260)

作品数：1 被引量：2H指数：1
相关作者：潘乙怀刘建国亓庆国于晓光何奎芳更多>>
相关机构：温州医学院附属口腔医院遵义医学院山东大学更多>>
发文基金：温州市科技局资助项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇真核
  • 1篇真核载体
  • 1篇球菌
  • 1篇细胞
  • 1篇N1
  • 1篇PEGFP
  • 1篇SRV
  • 1篇293T细胞
  • 1篇变形链球菌

机构

  • 1篇山东大学
  • 1篇遵义医学院
  • 1篇温州医学院附...

作者

  • 1篇何奎芳
  • 1篇于晓光
  • 1篇亓庆国
  • 1篇刘建国
  • 1篇潘乙怀

传媒

  • 1篇中华微生物学...

年份

  • 1篇2011
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
变形链球菌表面蛋白可变区真核载体质粒pEGFP—N1-SrV＋的构建及在293T细胞的表达被引量：2
2011年
目的构建变形链球菌（变链菌）表面蛋白可变区（extended-v）真核表达质粒pEGFP—N1-SrV＋，并转架哺乳动物细胞293T，为进一步研究该区功能奠定基础。方法根据已报道变链菌OMZl75的srv＋基因序列，化学合成SrV＋的编码基因srv＋，将真核载体质粒pEGFP—N1和srv＋基因片段分别用KpnⅠ／XhoⅠ双酶切，连接获取重组质粒pEGFP-N1-Srv＋，并对其进行PCR、酶切和测序鉴定。通过H旨质体法瞬时转染哺乳动物细胞293T。运用荧光显微镜观察、Westernblot及real-timePCR法橙。目的蛋白在293T细胞中的表达情况。结果通过基因化学合成技术，获得1136bp的目的基因srv＋，经测序鉴定与模板目的基因序列一致；成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-SrV＋；PCR扩增检测可获得1．33kb目的基因片段；KpnI／XhoI双酶切可见4．7kb和1．1kb两条电泳条带，证实重组质粒pEGFP-N1-SrV＋携带目的基因；通过荧光显微镜观察到重组质粒pEGFP．N1-SrV＋融合GFP后的表达，目的细胞的转染效率达到80％以上；Westernblot检测到相对分子质量（Mr）为72×10^3处有特征条带，其大小和Srv＋融合蛋白（42×10^3＋28×10^3=70×10^3）相吻合；real-timePCR数值分析显示：在293T细胞中，s邢＋基因的过表达效果显著。结论成功构建了真核表达载体质粒pEGFP-N1-SrV＋，并能够在哺乳动物细胞293T中表达。
何奎芳于晓光潘乙怀刘建国亓庆国
关键词：变形链球菌293T细胞
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