广东省自然科学基金(S2012040007658)
- 作品数：12 被引量：7H指数：1
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- 快速高效从石蜡包埋肿瘤组织中提取micro-RNA方法的研究
- 2014年
- 目的探索一种从石蜡包埋组织标本中快速、便捷、低成本的提取miRNAs的方法。方法收集2年内石蜡包埋的人乳腺癌组织和保存6个月的MMTV基因工程小鼠乳腺癌组织石蜡样本，同时选用进口A公司生产的提取石蜡组织miRNAs试剂盒作为对照；通过2种方法提取人和鼠的石蜡切片中miRNAs做对比分析，包括采用凝胶电泳验证，检测miRNA纯度、浓度分析。为了进一步验证其提取效果，采用定量PCR对所提取的总miRNAs进行miRNA-375和miR-218检测。结果①采用本实验方法从石蜡包埋乳腺癌组织中提取的miRNAs其纯度在1．86—2．210D之间，其浓度可以满足常规实验要求（最低38．50mg／L）；②荧光定量PCR能够检测到miRNA-375和miRNA-218，其拷贝数与对照组比较，2种方法差异无统计学意义（P〉0．05）。③该方法提取时间短、成本低，成本是试剂盒法的1／10，提取时间至少节省1／3。结论从石蜡包埋组织标本中提取miRNAs方法切实可行，为从石蜡组织样本提取miRNA进行分子诊断和肿瘤相关的研究提供了便利，对采用回顾性石蜡标本研究miRNAs提供了有力的帮助。
- 李江超杨扬郝卓芳周晓明章倩倩王丽京
- 关键词：石蜡包埋组织MICRORNAS
- Cyclin D1调控U87胶质瘤细胞周期研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBIGenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1/S期转换。结论 U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0/G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。
- 章倩倩周惠屈良鹄王丽京
- 关键词：CYCLIND1U87细胞周期
- 外源基因转染血管内皮细胞条件优化
- 2013年
- 目的探讨阳离子脂质体及电穿孔法介导外源基因转染血管内皮细胞的转染效率并进行条件优化。方法采用绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectamine^(TM)2000阳离子脂质体为载体以及电穿孔方法,转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。培养48 h后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在HUVEC内的表达及转染效率。结果 Lipofectamine^(TM)2000阳离子脂质体介导组有少量细胞可见弱荧光信号,而电穿孔法转染组可见较强荧光信号,其中以电击条件为电场强度1100 V、脉冲时间20 ms、电击2次的转染效率最好。结论电穿孔法介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,可作为血管内皮细胞的外源基因转染的方法。
- 章倩倩丁一刘红英刘翼龙陈胜霞胡曦文王丽京
- 关键词：人脐静脉血管内皮细胞基因转染阳离子脂质体电穿孔
- cyclin D3调控LN308胶质瘤细胞迁移研究被引量：1
- 2013年
- 目的探讨细胞周期蛋白D3(CCND3)在LN308胶质瘤细胞中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D3序列设计双链siRNA,利用western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND3对LN308胶质瘤细胞周期进程的影响;通过transwell检测CCND3对LN308细胞迁移的影响。结果经western blotting检测,成功抑制了CCND3的表达。并且发现与对照组相比较,抑制CCND3表达对LN308细胞周期无影响,但是可以显著抑制LN308细胞的迁移。结论 LN308细胞中CCND3并不发挥调控细胞周期的功能,而是影响细胞的迁移,促进肿瘤的发展。本研究为临床上靶向治疗胶质瘤提供了理论基础。
- 章倩倩周惠屈良鹄王丽京
- 关键词：胶质瘤细胞迁移
- U87胶质瘤细胞p53基因全场cDNA克隆及序列分析
- 2013年
- 目的克隆U87胶质瘤细胞p53基因编码序列,并对其序列进行分析。方法根据NCBI GenBank中p53 cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从U87胶质瘤细胞总RNA中对p53基因编码序列进行克隆;并通过DNAMAN软件将克隆序列与NCBI GenBank中序列进行比对,分析U87细胞中p53基因编码序列特点。结果经测序验证,成功克隆了p53基因编码序列,通过序列比对发现U87细胞中p53基因72位密码子为精氨酸残基。结论成功克隆了U87细胞中p53基因编码序列,分析发现U87细胞中p53基因表达产生的是72位密码子为含精氨酸残基的p53野生型蛋白,为进一步研究U87细胞中p53基因功能特性及其与胶质瘤的相关性奠定了基础。
- 章倩倩丁一亓翠玲兰天李江超王丽京
- 关键词：P53基因克隆技术
- p110δ突变失活的Apc^(Min/+)结直肠癌癌前病变小鼠模型的建立被引量：1
- 2014年
- 目的:建立p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型,为研究p110δ在小鼠结直肠癌癌前病变中的作用提供实验模型。方法:将C57BL/6J背景的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠与p110δ突变失活小鼠(p110δD910A/D910A)进行杂交建系,通过PCR技术鉴定子代小鼠基因型,获得p110δ突变失活的ApcMin/+小鼠。对适龄小鼠进行肠道取材,亚甲蓝染色后,观察肠道结构,对腺瘤和微腺瘤进行统计。肠道组织进行石蜡包埋、切片,做HE染色进行进一步观察。结果:获得p110δ突变失活的ApcMin/+杂交鼠(ApcMin/+;p110δD910A/D910A)并得以稳定传代。ApcMin/+;p110δD910A/D910A杂交小鼠的肠道组织中,腺瘤数目和体积比ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠均有减少。结论:成功建立p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型,并得到小鼠肠道肿瘤的初步表型,为进一步研究p110δ在肠道肿瘤发生发展中的作用提供重要的工具动物。
- 胡曦文章倩倩雷岩刘红英周大磊陈佳园王丽京
- 关键词：转基因小鼠
- 穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制被引量：2
- 2013年
- 目的:观察穿心莲内酯(Andro)对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法:取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组,MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25μmol.L-1)DMSO、4H-Andro及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度(IC50);Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果:通过浓度筛选,Andro平均IC50为8μmol.L-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8μmol.L-1 Andro处理24h后U87细胞增殖活性降低(P<0.01),增殖抑制率达到50%;Andro处理96h时,U87细胞增殖活性进一步降低(P<0.01),增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8μmol.L-1 Andro处理48h后,U87细胞中NF-κB(即磷酸化p65)蛋白表达强度下降(P<0.01)。结论:Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。
- 章倩倩丁一亓翠玲兰天李江超何晓东王丽京
- 关键词：穿心莲内酯胶质瘤细胞细胞增殖
- Robo1基因miR-218靶位点序列克隆及其突变体构建
- 2013年
- 目的克隆Robo1基因3'UTR的miR-218靶位点区域序列并构建"seed"区位点突变体,以便进一步研究miR-218对Robo1基因的调控作用。方法通过targetscan 6.2对Robo1 3'UTR进行分析找出miR-218靶位点,根据NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从人类细胞总RNA中对包含miR-218靶位点的序列进行克隆;并设计一对突变引物,通过重叠PCR法获得"seed"区点突变基因序列;通过双荧光报告基因检测miR-218对Robo1基因的调控。结果经测序验证,成功克隆了目的基因序列,并成功构建了"seed"区点突变体,并且通过报告基因检测发现miR-218对Robo1表达有显著抑制(P<0.05)。结论成功克隆了含有miR-218靶位点的Robo1 3'UTR基因序列及构建了"seed"区点突变体,并阐明miR-218直接作用于Robo1基因3'UTR区,为进一步研究miR-218对Robo1基因的转录后调控机制奠定了基础。
- 章倩倩丁一王丽京
- 关键词：ROBO1MIR-218靶位点突变体
- p27^(kip1)蛋白在胶质瘤细胞中的表达及定位研究
- 2013年
- 目的:探讨胶质瘤细胞中p27kip1蛋白的表达、定位,为进一步研究p27kip1在胶质瘤发生、发展过程中的功能奠定理论基础。方法:用免疫荧光方法检测U87、LN308细胞p27kip1蛋白的定位情况;进一步分离两种细胞的细胞质与细胞核,在显微镜下观察细胞核形态并用DAPI染色分析细胞核完整性,提取蛋白用western blotting。方法检测分离的细胞质与细胞核蛋白的纯度,并检测p27kip1在细胞中的表达情况。结果:成功分离了细胞的细胞浆与细胞核,并得到纯度较好的细胞浆蛋白与细胞核蛋白。确定了p27kip1蛋白主要表达于U87和LN308细胞的细胞质中。结论:p27kip1蛋白在恶性胶质瘤中可能主要表达在细胞质中,并且其亚细胞定位可能与胶质瘤的恶性程度相关。
- 章倩倩周惠屈良鹄王丽京
- 关键词：P27KIP1胶质瘤
