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长大二元杂交猪胎儿成纤维细胞的生物学特性被引量：6: 2012年; 【目的】研究长大二元杂交猪胎儿成纤维细胞的生物学特性。【方法】采用室温消化法从妊娠30d的长大二元杂母猪胚胎中分离胎儿成纤维细胞,利用MTT法检测第5、10、15、25、35、45、60、70代胎儿成纤维细胞的增殖能力,通过倒置显微镜观察不同代数的细胞形态,流式细胞仪分析细胞周期变化,DAPI染色观察细胞核染色质的形态以及衰老相关β-葡糖苷酶活性的染色测定等方法来判断细胞的衰老程度。【结果】①采用消化液室温消化法成功分离到猪胎儿成纤维细胞,细胞具有典型的成纤维细胞形态。②猪胎儿成纤维细胞于生长初期1～6d呈对数增长,此后进入平台期。【结论】随着细胞代数的增加,细胞的增殖能力虽有所下降,但仍然呈稳定的增长状态,各代次猪胎儿成纤维细胞生长良好。; 李仕新陈松玲李加琪张豪臧莹安; 关键词：体外分离培养生物学特性

猪载脂蛋白E基因的组织表达谱分析被引量：4: 2011年; 载脂蛋白E在胆固醇和其他脂质的代谢中起着至关重要的作用,对猪APOE基因的组织表达谱分析是研究该基因功能的重要基础工作。研究采用RT-PCR的方法对APOE在长白猪的13个组织中的表达进行了研究,结果显示APOE基因主要在肝和脑组织表达,其他外周组织如脾、肺、肾、大肠、小肠也有不同程度的表达,而在心、胃、背肌和淋巴中几乎不表达。; 李仕新高萍李加琪陈赞谋臧莹安; 关键词：载脂蛋白E 组织表达谱

猪骨桥蛋白基因的组织差异表达被引量：1: 2013年; 为了研究猪骨桥蛋白基因(Osteopontin,OPN)组织特异性的表达规律,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)分析方法,以β-actin基因为内参,对猪OPN基因在心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑、垂体、下丘脑和子宫内膜等10种组织中的mRNA表达水平进行了检测.结果表明,OPN基因在子宫内膜的表达量为最高,其次是在小脑,在心、肝、脾和肺也有不同程度的表达,而在肾、下丘脑和垂体的表达量很少,从而提示OPN基因在子宫内膜中可发挥重要作用.; 李仕新李加琪田允波陈赞谋古飞霞唐军; 关键词：组织特异性表达实时荧光定量PCR MRNA

猪胎儿成纤维细胞SOD1基因差异表达研究被引量：1: 2012年; 在研究模式生物衰老机制的过程中,发现衰老受某些特定基因的调控。为研究细胞内铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD,SOD1)在不同代数的猪胎儿成纤维细胞的差异表达,本试验收集正常传代生长的5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70代的猪胎儿成纤维细胞,分别提取细胞总RNA;采用RT-PCR技术,检测不同代数猪胎儿成纤维细胞SOD1的表达。结果表明猪SOD1在第5代猪胎儿成纤维细胞中表达水平最高,随着细胞代数的增加,表达量逐渐下降,到第70代表达量为最低。结果将为进一步揭示细胞衰老的分子机制提供有价值的参考,同时为丰富猪的分子生物学提供新素材。; 李仕新陈松玲高萍张爱玲张豪王翀李加琪; 关键词：胎儿成纤维细胞衰老 SOD1 基因表达

猪IGF-1R基因差异表达、5'调控区的克隆及遗传多态性被引量：4: 2013年; 采用实时荧光定量PCR分析中外猪种各11个组织mRNA的差异表达,为进一步研究该基因差异表达的机制,根据人、鼠类胰岛素生长因子1受体(IGF-1R)基因的5'调控区的保守序列设计引物扩增猪的5'调控区序列,并利用PCR-直接测序方法分析大花白及长大二元杂猪种的5'调控区的遗传多态性;生物信息学分析5'调控区的CpG岛。结果表明猪IGF1-R的mRNA表达量在中外猪种的心脏中表达量均为最高,其次是肾脏,在肝脏的表达量差异不显著,在长大二元杂猪的心、肺、背肌、大脑、小脑、垂体表达量均极显著高于大花白猪,分别为6.06、52.56、7.70、2.43、3.63和41.38倍,而在胃、脾、肺的表达量极显著低于大花白猪;获得了1 355 bp的IGF1-R 5'调控区序列,测序结果表明该区域在两猪种当中未发现遗传变异;CpG岛预测发现5'调控区存在长度分别是353 bp、603 bp及264 bp的3个CpG岛。; 李仕新李加琪田允波陈赞谋黄运茂唐军; 关键词：IGF1R 遗传多态性 CPG岛

猪肌肉组织中ApoE基因5′调控区甲基化的研究被引量：1: 2013年; 【目的】研究猪肌肉组织中猪载脂蛋白E(Apolipoprotein E,ApoE)基因5′调控区的DNA甲基化状况。【方法】以180日龄长白母猪为试验动物,采集其肌肉组织,提取其DNA,经亚硫酸氢盐修饰后用作PCR反应模板;通过生物信息学预测猪ApoE5′调控区潜在的CpG岛,根据预测结果选用甲基化特异性引物对CpG岛进行PCR扩增,对回收、纯化的PCR产物进行克隆和测序,并与GenBank中的ApoE5′调控区序列进行比对,分析CpG岛的甲基化水平。【结果】生物信息学预测发现,猪ApoE基因5′调控区有2个CpG岛,第1个CpG岛有10个CpG位点,第2个CpG岛有12个CpG位点;PCR扩增获得长度分别为233bp的CpG岛1和288bp的CpG岛2序列,这2个CpG岛均存在着9个甲基化CpG位点。【结论】猪ApoE基因5′调控区是CpG位点的富集区域,2个CpG岛存在不同程度的甲基化。; 李仕新李加琪田允波陈赞谋古飞霞; 关键词：肌肉组织 APOE基因 DNA甲基化 CPG岛

人类PGAM基因的电子克隆及生物信息学分析被引量：2: 2012年; 采用生物信息学的方法,从UniGene簇Hs.632918中选择1条人磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycerate mu-tase,PGAM)的表达序列标签(Expressed sequence tag,EST)AY007118.1作为种子序列进行电子步移,得到一长为2 750 bp的cDNA序列.对其进行开放阅读框(Open reading frame,ORF)分析,发现该cDNA序列具有完整的ORF框架,ORF长度765 bp,共编码254个氨基酸.cDNA 5'端具有Kozak序列、TATA盒和CAAT框,3'端具有加尾信号和Poly A尾巴.对该序列进行限制性酶切位点、CpG岛、基因定位分析,结果发现了81个酶切位点,一个长度为627 bp、GC含量为55%、Y值为0.695的CpG岛,最后将该基因定位于第12号染色体的长臂上.同时对PGAM蛋白的二级结构和特殊结构进行了初步预测.结果显示,PGAM蛋白中存在α螺旋、β-折叠片和无规卷曲结构,没有跨膜结构的片段,无信号肽,蛋白定位于细胞质或细胞核.; 唐军邓武军李仕新; 关键词：生物信息学表达序列标签 UNIGENE

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广东省自然科学基金(10451022501005709)