江苏省自然科学基金(SBK2010151)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
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- 相关机构：郴州市疾病预防控制中心江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省卫生厅医学科研项目国家质检总局科技计划项目江苏省自然科学基金更多>>
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- 荧光定量PCR用于按蚊体内疟原虫子孢子检测的研究被引量：3
- 2012年
- 目的建立一种用于按蚊体内疟原虫子孢子定量检测和虫种鉴别的荧光定量PCR方法。方法采用针对4种人体疟原虫18S rRNA基因属特异性保守区的1对引物,以疟原虫18S rRNA基因重组质粒与按蚊DNA的混合物为模板,进行反应体系和反应条件优化,验证方法的特异性,并通过熔解曲线分析进行虫种鉴别。应用阴性按蚊DNA稀释的间日疟原虫18S rRNA基因重组质粒为模板制作标准曲线,并分别以质粒DNA和实验室子孢子感染阳性的按蚊DNA为模板分析建立的荧光定量PCR方法的敏感性。在反应体系中加入不同部位、不同用量按蚊DNA,以探讨按蚊DNA对检测效果的影响。结果该方法对按蚊、人血DNA均无扩增,对4种疟原虫DNA均有特异性扩增且扩增产物的熔解温度(Tm)易于区分,三日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫和间日疟原虫的Tm值分别为71.0、72.7、73.9℃和75.9℃。标准曲线中循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的相关性(相关系数r=-0.99)。最低可以检出含50拷贝的质粒DNA或32倍稀释的子孢子阳性按蚊DNA样本。按蚊DNA对荧光定量PCR反应具有抑制作用。荧光定量PCR的Ct值在实验内和实验间均具有良好的重现性。结论新建立的SYBR Green I染料荧光定量PCR方法具有较高的敏感性和特异性,可用于按蚊体内疟原虫子孢子的检测,并可同时对4种人体疟原虫进行鉴别。
- 刘耀宝周华云汪圣强李菊林朱韩武朱国鼎顾亚萍王伟明曹俊高琪
- 关键词：荧光定量PCR按蚊疟原虫子孢子
