重庆市自然科学基金(2006BB5098)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：郑宏庭邓华聪周恒宇蒋文陈丹燕更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院第三军医大学新桥医院重庆市中医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 葡萄糖对βHC9细胞内磷脂酶C及钙离子浓度的影响被引量：1
- 2007年
- 目的观察葡萄糖浓度对胰岛B细胞(βHC9)内磷脂酶C(phospholipaseC,PLC)活性及钙离子浓度的影响,探讨PLC在B细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulatedinsulinsecretion,GSIS)信息传递中的作用。方法以不同浓度的葡萄糖预处理βHC9细胞,采用[3H]肌醇法测定PLC活性,Fura-2荧光负荷技术测定[Ca2+]i。结果葡萄糖浓度可显著影响βHC9细胞内的PLC活性及[Ca2+]i,并且[Ca2+]i变化与PLC活性改变相关葡萄糖浓度为1、5、10、15、20mmol/L时的PLC活性依次为8.1、11.0、16.7、19.8、26.4Bq/ml,各组间均有显著性差异(P<0.05);[Ca2+]i依次为82、95、128、150、161nmol/L,除1、2组,4、5组之外,其余各组间均有显著性差异(P<0.05);PLC活性与[Ca2+]i之间存在线性相关关系(P<0.01)。结论葡萄糖浓度可改变胰岛B细胞内的PLC活性及[Ca2+]i,提示该途径可能参与B细胞GSIS信息传递。
- 郑宏庭李丙蓉方芳刘理冯晓丽徐梓辉徐静
- 关键词：磷脂酶C钙离子
- PLCζ在INS-1细胞中的表达及功能初步分析
- 2009年
- 目的:探讨磷脂酶Cζ(PhospholipaseCζ,PLCζ)在INS-1细胞中的表达,并初步分析PLCζ对葡萄糖刺激胰岛素分泌(Glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响。方法:(1)设计6类PLC的引物,RT-PCR检测INS-1细胞中各类PLC的表达。(2)设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100 mmol/L,分别刺激INS-1细胞40 min,ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素的含量,确定最适葡萄糖刺激浓度,设定时间梯度:20、40、60、80、120 min,以最适葡萄糖浓度刺激后ELISA检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适刺激时间。(3)用最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,半定量RT-PCR、Western Blot检测PLCζ的表达变化。结果:(1)6类PLC中PLCβ、PLCγ、PLCδ、PLCζ、PLCη在INS-1细胞中表达,PLCε不表达。(2)用40 mmol/L葡萄糖刺激60 min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大,半定量RT-PCR、Western Blot检测葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达上调。结论:(1)先前发现在精子中特异表达的PLCζ在INS-1细胞中有表达。(2)葡萄糖刺激INS-1细胞后PLCζ的表达明显增加,提示PLCζ可能参与GSIS信号转导。
- 周恒宇邓华聪吴明罗娟
- 关键词：RT-PCR葡萄糖刺激胰岛素分泌
- 磷脂酶Cβ1过表达对葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响被引量：2
- 2009年
- 目的观察过表达磷脂酶Cβ1(phospholipase Cβ1,PLCβ1)对葡萄糖刺激胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)的影响。方法设定葡萄糖浓度梯度:10、20、40、80、100mmol/L,分别刺激INS-1细胞40min,检测细胞培养上清液中胰岛素含量,确定最适的葡萄糖刺激浓度;设定时间梯度:20、40、60、80、120min,以最适葡萄糖浓度刺激,检测胰岛素含量,确定最适的刺激时间。②以最适葡萄糖浓度刺激INS-1细胞适当时间后,RT-PCR检测PLCβ1表达变化。③构建PLCβ1真核表达载体(PCMV-HA-PLCβ1),转染INS-1细胞,Western blot检测INS-1细胞中PLCβ1蛋白的表达。④收集转染后INS-1细胞培养上清液,检测胰岛素含量。结果用40mmol/L葡萄糖刺激60min,INS-1细胞的胰岛素分泌量最大;RT-PCR观察刺激后PLCβ1表达显著升高;过表达PLCβ1的INS-1细胞培养上清液中胰岛素含量为(1.906±0.080)ng/ml,较转染PCMV-HA载体的对照组(0.740±0.091)ng/ml显著升高(P<0.01)。结论过表达PLCβ1显著增加INS-1细胞的胰岛素分泌,提示PLCβ1可能参与GSIS信息传递。
- 周恒宇邓华聪郑宏庭蒋文南静陈丹燕
- 关键词：葡萄糖刺激胰岛素分泌过表达胰岛素瞬时转染
- 磷脂酶C与葡萄糖刺激的胰岛素分泌被引量：1
- 2009年
- 磷脂酶C（phospholipase C，PLC）是磷脂酰肌醇信号通路的关键酶，在体内分布极为广泛。许多细胞外信息分子，如激素、神经递质、免疫球蛋白、细胞因子、生长因子等都可以激活磷脂酰肌醇特异性PLCs。至今已鉴定出15种PLCs亚型。而每种PLCs亚型的特异分布和独特生理作用使得近年来对PLCs亚型的结构、功能、活化机制的研究成为热点。
- 周恒宇邓华聪蹇锐阮艳袁媛郑宏庭
- 关键词：磷脂酶C胰岛素分泌磷脂酰肌醇免疫球蛋白信号通路信息分子
- 糖尿病的胰岛素基因治疗
- 2007年
- 糖尿病有着复杂的遗传背景，基因治疗可能成为其最终治疗手段。糖尿病基因治疗以胰岛素基因治疗为主，通过胰岛素基因导人，获得内源胰岛素替代。胰岛素基因可通过载体直接导入，也可通过体外构建的基因工程细胞输入体内；在胰岛素基因治疗中，病毒载体较为常用，但人工染色体等新型载体亦已出现；而寻找理想的胰岛素基因表达调控方案，是目前胰岛素基因治疗的主要研究方向。
- 郑宏庭邓华聪
- 关键词：糖尿病基因治疗胰岛素
