辽宁省自然科学基金(20092084)
- 作品数:5 被引量:5H指数:2
- 相关作者:邱广斌刘政刘佳梅旭由田更多>>
- 相关机构:中国人民解放军解放军第202医院中国医科大学更多>>
- 发文基金:辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- MYCT-1基因真核表达载体的构建及鉴定被引量:2
- 2010年
- 目的构建MYCT-1(myc target)基因真核表达载体,观察其转染胃粘膜GES-1细胞系后的表达。方法用RT-PCR法合成MYCT-1 cDNA,克隆至表达载体pcDNA3.1上,测序验证无突变发生。将表达载体转染GES-1细胞,用RT-PCR和Western blot检测MYCT-1基因的表达。结果限制性内切酶酶切和DNA测序证实成功克隆了MYCT-1 cD-NA全长并正确插入了表达载体,在GES-1细胞中检测到MYCT-1 mRNA和蛋白。结论成功构建了MYCT-1真核表达载体,可在GES-1细胞中稳定表达。
- 梅旭刘政邱广斌
- 关键词:转染
- MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡,增殖及细胞周期的影响被引量:2
- 2010年
- 目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞增殖率降低(P<0.05),细胞周期检测表明细胞停滞于S期(P<0.05)。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。
- 刘政刘佳邱广斌
- 关键词:SIRNA细胞凋亡细胞增殖细胞周期
- 抗MYCT-1单克隆抗体的制备及鉴定
- 2010年
- 邱广斌刘政
- 关键词:单克隆抗体候选抑癌基因恶性肿瘤组织表达下调
- 实时荧光定量PCR法检测RNA干扰后的GES-1细胞中MYCT-1基因的表达被引量:1
- 2011年
- 目的建立MYCT-1基因的实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测方法,检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后GES-1细胞中MYCT-1mRNA的表达水平,探讨不同剂量siRNA对MYCT-1基因的沉默效果。方法取5×104对数生长期GES-1细胞,分别转染1μg、2μg、4μg siRNA。转染第4天分别收集细胞提取总RNA,合成cDNA并进行RFQ-PCR检测,以未转染组作为对照。结果加入1μg、2μg组MYCT-1表达量分别降低19.4%和55.2%,加入4μg siRNA组细胞死亡。结论成功建立了MYCT-1基因的RFQ-PCR检测方法。加入2μg siRNA,脂质体与siRNA比例为4:1时,可使GES-1细胞中MYCT-1表达降低55.2%,为最佳实验条件。
- 刘政刘佳邱广斌
- 关键词:RNA干涉实时荧光定量PCR
- 高分辨率熔解曲线分析技术在检测非小细胞肺癌组织EGFR基因突变中的应用被引量:1
- 2010年
- 目的:探索高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析技术在检测肺癌组织表皮生长因子受体(epidermal grouthfactor receptor,EGFR)基因突变中的应用。方法:利用HRM技术,进行人肺癌组织EGFR基因外显子19和21突变筛查,并做测序验证。结果:外显子19的HRM分型结果显示,52例样品中有3种类型熔解曲线,45例样品为A型,5例为B型,2例为C型。外显子21的分析结果显示有2种熔解曲线,49例样品为N型,3例样品为M型。测序结果显示,外显子19 A型熔解曲线代表外显子19的野生型,B型熔解曲线代表杂合性缺失delE746-A750(c.2235-2249del),C型熔解曲线代表杂合性缺失delL747-S752(c.2240-2257del)。外显子21 N型熔解曲线代表野生型,M型熔解曲线代表杂合性L858R(c.2573T-G),HRM分析结果与测序结果完全一致。结论:本研究表明HRM分析技术能准确检测EGFR基因突变,是一种适合肺癌组织中EGFR基因突变筛查的方法。
- 由田刘政邱广斌
- 关键词:非小细胞肺癌表皮生长因子受体高分辨率熔解曲线