国家自然科学基金(30700584)
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 相关作者：郝海生杜卫华朱化彬王栋沈彦军更多>>
- 相关机构：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所甘肃农业大学中国农业科学院特产研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 基因打靶与体细胞克隆技术制备乳腺生物反应器的研究进展被引量：3
- 2009年
- 在动物乳腺生物反应器研究中,传统方法不可避免地造成基因表达调控元件的人工拼接和外源基因在动物基因组中随机整合所带来的"位置效应",致使转基因动物外源基因的表达水平不高且差异较大。而基因打靶在外源基因定点整合、消除位点效应方面具有明显优势。体细胞核移植技术可以提前在细胞水平对转基因动物进行筛选,不但可以节省时间,更降低了制备乳腺生物反应器的成本。作者简述了基因打靶与体细胞核移植技术结合制备乳腺生物反应器的优越性、存在问题、解决办法及其应用前景和展望。
- 袁天杰杜卫华郝海生朱化彬
- 关键词：基因打靶核移植转基因动物乳腺生物反应器
- 核重编程机制的影响因素
- 2010年
- 哺乳动物体细胞核移植技术在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法。但是核重编程仍是核移植技术的关键因素,制约了重构胚胎干细胞的研究。只有供核发生完全重编程,重构胚胎才能正常发育。核重编程与供核者的年龄,供核细胞的组织来源、分化状态、细胞周期、传代次数,供核细胞的表观遗传标记以及供卵者的年龄、卵子的成熟度等因素有关。创造各种适于核重编程的条件有利于从更高的起点开展核移植胚胎干细胞的研究,提高重构胚胎干细胞建系效率。
- 李海燕杜卫华郝海生赵学明洪志平李敏
- 关键词：核移植核重编程供核细胞
- 体细胞核移植与中心体遗传被引量：7
- 2008年
- 体细胞克隆虽然在多种哺乳动物中成功获得后代,但仍存在一系列的问题需要解决。克隆胚胎的发育能力由核移植后几小时内的细胞和分子过程决定,包括染色体分离和纺锤体的重新组装。中心体的正常组成和分布能保证染色体分离的准确性及新生和出生后克隆动物发育过程中的基因组稳定性。文章在分析哺乳动物体细胞克隆存在的问题和简介中心体结构功能的基础上,综述了中心体在配子和受精卵发育过程中的遗传机制,同时阐述了体细胞克隆胚胎中心体及其相关蛋白的研究现状。
- 杜卫华朱化彬郝海生王栋
- 关键词：体细胞核移植胚胎发育中心体
- 马-牛无透明带卵异种克隆的研究
- 2011年
- 【目的】开展异种克隆,为濒危动物的保护、细胞核重编程与核质互作研究提供新途径。【方法】以马耳成纤维细胞为供体,牛卵母细胞为受体,采用无透明带手工克隆方法构建异种胚胎,比较不同的激活液、培养液、体细胞同期方式、核移植方法对马-牛异种克隆胚胎体外发育的影响。【结果】(1)A23187+6-DMAP联合激活获得的克隆胚胎发育较好,囊胚率2.60%;(2)克隆胚胎于mCR1aa中的卵裂率和桑葚率显著高于CR1aa和SOF(83.65%vs 77.49%,74.87%;22.36%vs19.37%,18.98%,P<0.05),且发育到囊胚(2.72%),CR1aa与SOF间无显著差异;(3)供体细胞经血清饥饿或接触抑制处理后,获得的异种克隆胚的融合率、卵裂率、桑葚率和囊胚率无显著差异;(4)无透明带手工克隆法的融合率显著高于显微注射法(90.33%vs 72.94%),卵裂率、桑葚率和囊胚率无显著差异;(5)马-牛异种克隆胚与牛同种克隆胚比较,融合率和卵裂率无差别,桑葚率和囊胚率有显著差异(21.78%vs63.52%;2.71%vs37.48%)。【结论】牛卵母细胞能支持马体细胞去分化,进行核重编程。但由于二者的物种距离较远,异种克隆胚胎的发育能力远低于同种克隆胚胎。
- 朱化彬沈彦军杜卫华鞠光伟庞云渭郝海生赵学明王栋王宗礼
- 关键词：异种克隆
- 不同因素对奶牛分离精子ICSI效率的影响
- 2010年
- 本研究旨在探讨不同的联合激活处理、精子预处理方法和单精子注射方式对奶牛分离精子ICSI效率的影响。借助显微操作仪将经不同预处理的奶牛分离X精子直接注入体外成熟22～24h的牛卵母细胞胞质内,注射过程采用回吸胞质和不回吸胞质2种处理,最后分别用3种激活方案对注射卵进行激活。结果表明:用CR1aa+Ionomycin+6-DMAP对ICSI注射卵进行激活后,卵裂率和囊胚率都高于A23187+CHX和7%ET+CHX两种联合激活组(63.74%vs61.09%、53.75%;28.54%vs17.68%、22.00%,P<0.05);采用percoll密度梯度离心法处理精子,卵裂率(77.10%vs62.19%,P<0.05)与囊胚率(26.95%vs22.82%,P>0.05)均高于上游法处理组;ICSI时回吸胞质获得的注射卵,其卵裂率和囊胚率均显著高于不回吸胞质处理组(63.10%,25.35%vs41.56%,19.40%,P<0.05)。结果表明,用percoll密度梯度离心法处理精子、注射时回吸胞质、用CR1aa+Iono-mycin+6-DMAP激活ICSI注射卵,可显著提高奶牛分离精子ICSI的效率。
- 朱化彬庞云渭杜卫华郝海生李海燕沈彦军赵学明王栋王宗礼
- 关键词：分离精子卵母细胞ICSI
- 哺乳动物体细胞核移植的DNA甲基化重编程研究进展被引量：2
- 2009年
- DNA甲基化是基因组主要的表观遗传修饰方式之一。核移植重构胚在对供体细胞基因组进行甲基化重编程过程中会出现异常的甲基化模式,而异常的甲基化重编程是导致克隆胚早期死亡及克隆动物发育畸形的主要原因。论文针对体细胞克隆动物基因组DNA的甲基化模式、造成克隆胚胎甲基化异常的原因及异常甲基化对重构胚胎发育的影响等进行了综述。深入研究核移植重构胚甲基化重编程的机制,有助于完善核移植技术,提高克隆效率,使其更好地应用于基础研究和生产实践。
- 沈彦军杨福合杜卫华朱化彬郝海生
- 关键词：核移植重编程DNA甲基化
