贵州省科技基础条件平台项目([2009]4005)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：何志旭舒莉萍马健娟姚冬静杨小燕更多>>
- 相关机构：贵阳医学院贵州医科大学更多>>
- 发文基金：贵州省科技基础条件平台项目国家自然科学基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pCS^(2+)-FLASH重组质粒的构建及斑马鱼FLASH基因反义mRNA探针的制备被引量：2
- 2010年
- 目的构建斑马鱼pCS2+-FLASH重组质粒,制备斑马鱼FLASH反义mRNA探针。方法提取斑马鱼胚胎总RNA后经RT-PCR克隆斑马鱼FLASH基因片段,将得到的FLASH片段和pCS2+质粒用BamHⅠ及HindⅢ双酶切后插入pCS2+质粒,通过对重组质粒进行双酶切及插入片段序列测序鉴定后,经T3RNA体外转录体系合成DIG-FLASH基因反义mRNA探针。结果RT-PCR法扩增出长度为533bp的特异性产物,构建的pCS2+-FLASH重组质粒经酶切鉴定和测序结果与预期相符;用FLASH反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观察到FLASH在野生型斑马鱼神经系统中存在表达。结论成功构建了pCS2+-FLASH重组质粒及FLASH基因反义mRNA探针。
- 丁可军何志旭舒莉萍许威姬牧远杨小燕
- 关键词：斑马鱼FLASH
- HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达被引量：1
- 2013年
- 目的探讨HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的作用机制,从而为进一步研究其在造血发育中的功能奠定基础。方法提取斑马鱼总RNA,利用RT-PCR克隆得到HOXC4基因片段,将克隆得到的基因片段和载体pCS2+用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,把基因片段插入pCS2+中,重组质粒经双酶切及测序鉴定后,采用T3RNA聚合酶体外转录体系制备地高辛标记的HOXC4基因反义mRNA探针,然后行全胚胎原位杂交。结果构建HOXC4-pCS2+重组质粒,获得地高辛标记的反义mRNA探针并且完成其在野生型斑马鱼中的全胚胎原位杂交,显示HOXC4基因在Tuebingen野生型斑马鱼神经系统高表达。结论得到HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的基本表达情况,为进一步研究该基因在造血发育过程中的功能奠定了基础。
- 马健娟何志旭舒莉萍姚冬静李莉李燕
- 关键词：斑马鱼原位杂交
- Rap1基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中的时空表达谱研究
- 2016年
- 目的选择斑马鱼作为实验动物模型，研究Rap1基因在胚胎早期发育过程中的时空表达规律。方法从斑马鱼胚胎cDNA中克隆Rap1基因片段，将Rap1基因片段和pCS2＋质粒进行体外连接重组，重组质粒经双酶切、菌落聚合酶链反应（PCR）及测序鉴定正确后，经T3RNA体外转录体系合成DIG标记的Rap1基因反义mRNA探针，采用整胚原位杂交方法检测Rap1在斑马鱼胚胎早期发育过程的表达情况。结果在斑马鱼胚胎0．75hpf的细胞分裂连接处、3．70hpf和6．00hpf的动物极、12．00～72．00hpf的脊索神经部位均可见Rap1基因的阳性杂交信号。结论Rap1基因在斑马鱼脊索神经系统的早期发育过程中可能起到重要的调控作用。
- 杨小燕何志旭舒莉萍金皎黄璟吴莎莎马健娟
- 关键词：斑马鱼原位杂交
- 野生型斑马鱼胚胎中hoxd3基因mRNA的表达谱被引量：3
- 2012年
- 目的:为探讨hoxd3基因在斑马鱼发育过程中与血管形成可能的作用机制,用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交,观测hoxd3基因在野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达情况。方法:提取斑马鱼胚胎总RNA,经RT-PCR扩增斑马鱼hoxd3基因片段,将得到的hoxd3基因片段和pCS2+质粒经EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切后插入pCS2+质粒中,挑选阳性克隆,通过双酶切、菌落PCR以及测序鉴定;将pCS2+-hoxd3重组子经EcoRⅠ酶切线性化,经T3RNA体外转录体系合成地高辛标记的hoxd3基因的反义mRNA探针。用hoxd3基因的反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了pCS2+-hoxd3重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测hoxd3基因的表达,发现在Tuebingen野生型斑马鱼受精后24 h～72 h胚胎的中脑后脑交界处以及后脑中可以观察到hoxd3基因的表达。结论:hoxd3基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统高表达,未发现在血管生成区域的表达。
- 舒莉萍何志旭姚冬静马健娟李涛叶芝旭
- 关键词：寡核苷酸类斑马鱼
