贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目(ZY[2013]3001) 作品数:6 被引量:46 H指数:4 相关作者: 周涛 江维克 赵丹 肖承鸿 袁媛 更多>> 相关机构: 贵阳中医学院 中国中医科学院 内蒙古科技大学 更多>> 发文基金: 贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目 中医药行业科研专项 公安部部级科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 农业科学 生物学 更多>>
杜仲药材特异性PCR的鉴定方法研究 被引量:4 2015年 目的:利用杜仲药材及其混伪品的rDNA-ITS序列差异设计DNA特异引物,实现杜仲药材的快速分子标记鉴定。方法:从NCBI数据库下载杜仲药材及其混伪品的rDNA-ITS序列,比对获得差异DNA片段,设计特异性引物,优化PCR扩增条件和检测方法。结果:扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和荧光反应检测,杜仲药材能扩增400bp的鉴定条带,加入SYBR GreenⅠ染料后在紫外光下有绿色荧光,而其混伪品不具特异条带和绿色荧光。结论:特异性PCR能有效鉴别杜仲药材及其混伪品,通过条件优化显著缩短PCR扩增时间,荧光染料检测能更直观显示鉴定结果,为杜仲药材的快速鉴定提供了新的思路和方法。 丁铃 赵丹 周涛 江维克 肖承鸿关键词:RDNA-ITS 荧光检测 分子鉴定 基于ITS2序列SNP位点鉴定白及药材及其混伪品 被引量:15 2015年 为建立白及药材的分子标记鉴定方法,该文提取白及及其混伪品药材的基因组DNA,利用PCR技术扩增r DNA ITS2片段,片段经双向测序、排序、比对,构建邻接树,查找SNP位点。结果显示,ITS2序列不仅能够有效地区分白及与其混伪品,而且存在可用作白及、黄花白及与其混伪药材鉴别的SNP位点。针对标记白及药材的SNP位点设计引物,通过筛选引物和优化特异性扩增条件后,获取引物BJ59-412F,BJ59-412R,HHBJ-225R在同一扩增条件下,可有效扩增白及、黄花白及,其产物长度分别约为350,520 bp,而混伪品则无PCR条带产生。该文所述引物和建立的反应条件可成功将白及、黄花白及与其混伪品药材进行同步鉴定,操作快速、简捷,结果可靠,可作为白及药材的快速分子鉴定方法。 赵丹 周涛 江维克 肖承鸿 康传志关键词:RDNA ITS2 SNP位点 断肠草与金银花类药材水提液特异性PCR鉴定方法研究 被引量:7 2013年 目的:研究断肠草与金银花类药材水提液的DNA分子鉴别方法。方法:采集不同产地的断肠草药材13份、金银花32份、山银花21份和水银花5份,所有样品提取总DNA,并对断肠草、金银花、山银花的水提液进行DNA提取。通过对断肠草ps-bA-trnH片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的中金银花类药材基原植物psbA-trnH序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物。结果:通过使用特异性引物对所有样品进行PCR扩增,发现断肠草可扩增出97 bp片段,而金银花类药材则不能扩增出条带。结论:通过特异性PCR的方法实现了断肠草与金银花类药材水提液的快速、准确鉴别。 崔占虎 蒋超 黄璐琦 李旻辉 周涛 周立社 袁媛关键词:断肠草 水提液 分子鉴定 太子参类胡萝卜素双加氧裂解酶家族4成员的克隆及表达特性分析 被引量:7 2016年 为探讨太子参环肽成分与品质形成的分子机制,利用生物信息学方法从太子参转录组数据库中筛选出太子参类胡萝卜素双加氧裂解酶(carotenoid cleavage dioxygenases,CCDs)新基因,并设计引物对其进行全长扩增及克隆、生物信息学分析和基因表达分析。克隆得到的4条CCDs序列全长分别为1 617,1 461,1 746,1 875 bp,并根据其功能依次命名为Ph CCD1,Ph NCED2,Ph NCED3,Ph CCD4。序列分析结果表明,4个基因均含有REP65结构域,且均含有与亚铁离子结合的位点。系统进化分析表明,Ph NCED2,Ph NCED3聚为NCEDs一支,Ph CCD1,Ph CCD4聚为CCDs一支,且与拟南芥Arabidopsis thaliana的At CCDs家族相比,Ph CCD1与At CDD1同源性最高,Ph CCD4与At CCD4同源性最高,Ph NCED2,Ph NCED3与At NCED3同源性最高。实时荧光定量分析显示Ph CCD1和Ph CCD4 2个基因的表达主要在地上部分,其中Ph CCD1在叶中的表达量最高,Ph CCD4在茎叶具有高表达,可能参与太子参类胡萝卜素的生物合成;Ph NCED2和Ph NCED3 2个基因的表达主要在地下部分,其中Ph NCED2在须根中表达量最高,Ph NCED3在块根木部和皮部表达量较高,可能是脱落酸生物合成的关键酶基因。研究首次得到太子参CCDs基因,为进一步阐明太子参植株对于外界胁迫的应答机制,进而探讨太子参品质形成的生物途径奠定基础。 龙登凯 李军 周涛 郑伟 丁铃 江维克关键词:太子参 生物信息学分析 基于特异性PCR和荧光检测技术快速鉴定艾纳香 被引量:1 2015年 为建立快速准确的艾纳香分子鉴定方法。采取筛选艾纳香及其混伪品基因组DNA的提取方法,针对艾纳香特异性位点设计引物,优化PCR扩增条件,荧光检测扩增产物。结果表明碱裂解法更适于艾纳香基因组DNA的提取;叶绿体基因(t DNA)特异引物能特异性扩增艾纳香DNA,其扩增产物荧光检测呈绿色,混伪品无反应发生。试验结果显示该法简化了分子鉴定过程,省时节力,且结果准确可靠,可作为艾纳香植物和药材的鉴定方法。 赵丹 周涛 袁媛 肖承鸿 江维克 康传志关键词:艾纳香 荧光检测 太子参药材的快速分子鉴定 被引量:13 2014年 为建立一种简便快捷的太子参分子鉴定方法,对太子参药材及其混伪品的rDNA—ITS片段进行比对分析,找出特异性片段,设计太子参鉴别引物,并优选扩增条件,扩增产物经100×SYBR GreenI染色后紫外光下观察。结果显示,PCR扩增反应液(包括DNATaq聚合酶预混液5.5μ,Tzs-2F,Tzs-2R各10pmol,DNA模板20~80ng,双重灭菌蒸馏水加至25μL)经95℃预变性1min,95℃变性5s,56℃退火延伸15s,30个循环,72℃后延伸30s后,在扩增产物中加入l曲100×SYBRGreenI混匀后于紫外光下呈绿色荧光的为太子参,混伪品无绿色荧光出现。40min内即可完成DNA提取、扩增等整个鉴定过程。该方法能特异性扩增太子参DNA,紫外光下肉眼观察即可鉴定药材的真伪,且操作简捷、结果准确、利于推广,可为快速鉴定中药材的真伪提供参考。 赵丹 周涛 江维克 袁媛 肖承鸿 郑伟关键词:太子参 分子鉴定 SYBR I