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白纹伊蚊唾液腺34 ku-2基因克隆与原核表达被引量：4: 2015年; 目的克隆并表达白纹伊蚊唾液腺Aalb_34ku-2蛋白。方法根据白纹伊蚊(罗马株)34ku-2开放读码框序列(Aalb_34ku-2)(GenBank:AY826118.1)设计特异引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊广州株雌蚊体内扩增获得Aalb_34ku-2基因。利用瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具,结合其他生物信息学分析软件包,分析预测该蛋白质的结构功能;将该基因克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,重组质粒在大肠埃希菌BL21/DE3中经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用SDS-PAGE电泳鉴定。结果 RT-PCR扩增获得Aalb_34ku-2 2个转录本。Aalb_34ku-2_1序列长度为954bp,编码318个氨基酸,等电点为5.84;Aalb_34ku-2_2的ORF为882bp,编码294个氨基酸,等电点为6.09。两者相差24个氨基酸;构建Pet28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组表达载体并转入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导后得到的重组蛋白与目的蛋白分子质量(34ku)相符,经鉴定为包涵体蛋白。结论成功构建pET28a(+)-Aalb_34ku-2_1重组原核表达质粒并表达出融合蛋白,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。; 李方站程金芝王涛牟小会颜凤翟慧吴家红; 关键词：白纹伊蚊唾液腺原核表达

蚊虫唾液组分的抗凝血活性及其对宿主的免疫调控作用被引量：13: 2008年; 蚊虫是重要的医学昆虫,其唾液组分具有抗凝血、抗炎及调控宿主免疫反应的功能,在蚊虫吸血与传播疾病过程中具有重要作用。现就目前从蚊虫唾液腺内鉴定出的唾液组分活性分子及其功能进行探讨,同时也对唾液组分调控宿主免疫功能的机制及其影响病原传播的研究做一进展性介绍。; 吴家红; 关键词：蚊虫抗凝血活性免疫调控

腺苷脱氨酶、C型凝集素及丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达被引量：8: 2010年; 目的了解腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)基因、C型凝集素(C-lectin)基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin)基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达情况。方法分别制备未吸血雌蚊唾液腺(SG组)和吸血雌蚊唾液腺(BSG组)、雌蚊躯体(无头无唾液腺,C组)和雄蚊组织(无头含唾液腺,M组)的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术,以β肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,根据GenBank公布的ADA、C-lectin和Serpin基因序列设计特异性引物进行RT-PCR,分析以上基因在不同组织中的表达情况。结果与雌蚊躯体和雄蚊组织中相对表达量相比,ADA基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了545倍和123倍(P<0.01);C-lectin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了3929倍和4973倍(P<0.01);Serpin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了1911倍和2978倍(P<0.01)。吸血前后雌蚊唾液腺中ADA、C-lectin和Serpin等3个基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADA在蚊虫组织中均有表达,在雌蚊唾液腺中高表达;C-lectin和serpin基因在雌蚊唾液腺中特异高表达。; 吴家红程金芝陈璐孙宇; 关键词：白纹伊蚊实时荧光定量RT-PCR 腺苷脱氨酶 C型凝集素丝氨酸蛋白酶抑制剂

白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立被引量：5: 2010年; 目的建立白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR法。方法根据GenBank上白纹伊蚊β-actin基因的序列（GenBank accession number：DQ657949）,利用Primer Express3.0软件设计并合成一对引物,采用SYBRGreen I作为染料建立实时荧光定量RT-PCR法。以Ct值为纵坐标,以稀释倍数的对数为横坐标,建立标准曲线,并进行溶解曲线分析。结果标准曲线Ct值检测范围为15~30,扩增效率为97.9%,相关系数为0.996,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为86.4℃。结论成功建立白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR法,为β-actin基因作为内参基因进行白纹伊蚊功能基因表达差异研究奠定基础。; 吴家红程金芝陈璐孙宇; 关键词：白纹伊蚊 Β-ACTIN基因实时荧光定量PCR

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国家自然科学基金(30600515)