深圳市科技计划项目(JH200505260325A)
- 作品数：6 被引量：18H指数：4
- 相关作者：肖德明徐忠世卢小虎李冉林博文更多>>
- 相关机构：深圳市人民医院深圳市第二人民医院华中科技大学更多>>
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- SOX-9转染骨髓基质细胞与聚乳酸-羟基乙酸共聚物的生物相容性被引量：1
- 2010年
- 背景:Sox基因家族是一个新发现的基因家族,在胚胎发育、性别分化、神经系统及骨骼系统发育过程中起着重要的作用。目的:观察SOX-9基因转染骨髓基质干细胞后在聚乳酸-羟基乙酸共聚物培养生长的生物相容性,以及其复合材料修复软骨缺损动物模型的可行性。方法:将SOX-9基因转染成功后的骨髓基质细胞在聚乳酸-羟基乙酸共聚物培养生长,制备软骨缺损动物模型,将复合物植入软骨缺损,通过大体标本观察、组织学观察及Ⅱ型胶原免疫组织化学及RT-PCR检测对软骨缺损模型的修复效果。结果与结论:SOX-9基因转染骨髓基质干细胞后可以在聚乳酸-羟基乙酸共聚物上正常生长,并有Ⅱ型胶原的高表达,将复合物植入软骨缺损后,可以修复软骨缺损动物模型。聚乳酸-羟基乙酸共聚物与转染后的骨髓基质细胞具有良好的生物相容性,可以修复兔软骨缺损动物模型。
- 徐忠世林博文卢小虎李冉潘晓华张晓明吕猛
- 关键词：聚乳酸-羟基乙酸共聚物骨髓基质细胞软骨缺损
- bFGF转染骨髓基质细胞培养及修复软骨缺损的动物试验被引量：5
- 2009年
- 目的探讨bFGF基因转染骨髓基质干细胞后在PLGA培养生长的生物相容性,以及采用组织工程方法培养的骨髓基质细胞-PLGA复合物修复软骨缺损动物模型的可行性。方法将bFGF基因转染成功后的骨髓基质细胞在PLGA培养生长,制备软骨缺损动物模型,将复合物植入软骨缺损,通过大体标本观察、组织学观察及Ⅱ型胶原免疫组化及RT-PCR检测对软骨缺损模型的修复效果。结果bFGF基因转染骨髓基质干细胞后可以在PLGA上正常生长,并有Ⅱ型胶原的高表达,将复合物植入动物后,可以修复软骨缺损动物模型。结论PLGA与转染后的骨髓基质细胞具有良好的生物相容性,转染后的骨髓基质细胞与PLGA复合物可以修复兔软骨缺损动物模型,可以作为自体软骨移植的一种替代治疗方法。
- 徐忠世肖德明林博文卢小虎李冉
- 关键词：骨髓基质细胞软骨缺损聚乳酸-羟基乙酸共聚物
- bFGF真核表达质粒的构建及骨髓基质细胞转染被引量：5
- 2009年
- 目的探讨bFGF基因转染骨髓基质干细胞的方法及可行性。方法构建bFGF基因真核表达质粒,用脂质体法介导转染骨髓基质细胞,通过形态学观察、免疫组化、ELISA法、及RT-PCR方法检测bFGF基因转染骨髓基质干细胞的成功性,以及转染后骨髓基质干细胞的生物学特性。结果bFGF基因成功转染骨髓基质干细胞,并能持续稳定的分泌bFGF蛋白,可诱导骨髓基质干细胞向成软骨方向分化。结论bFGF基因可以转染骨髓基质干细胞,并能诱导骨髓基质干细胞向成软骨方向分化。
- 徐忠世肖德明林博文卢小虎李冉
- 关键词：骨髓基质细胞软骨缺损
- SOX-9真核表达质粒转染兔骨髓基质细胞被引量：4
- 2008年
- 目的探讨SOX(sry-type high-mobility-group box)-9基因转染兔骨髓基质细胞的方法及可行性。方法构建SOX-9基因真核表达质粒,用脂质体法介导转染兔骨髓基质细胞,通过形态学观察、免疫组织化学、酶联免疫吸附法及反转录-聚合酶链反应检测SOX-9基因转染兔骨髓基质细胞的成功性,以及转染后骨髓基质干细胞的生物学特性。结果免疫组织化学检测实验组细胞内有稳定的SOX-9表达,在2周的表达量高于6d的表达量。RT-PCR结果表明只有实验组有SOX-9的基因表达。酶联免疫吸附法检测结果显示各时间点SOX-9的基因表达实验组均明显高于其余2组(P<0.01),实验组表达量48h时达到最高。结论SOX-9基因可以转染兔骨髓基质干细胞,并能诱导骨髓基质干细胞向成软骨方向分化。
- 徐忠世肖德明林博文卢小虎李冉
- 关键词：骨髓基质细胞细胞培养软骨缺损
- SOX-9真核表达质粒转染兔骨髓基质细胞的可行性(英文)
- 2008年
- 背景:SOX-9在软骨组织的发生和发育中具有重要作用,可促进间充质细胞凝集,具有转录激活结构域,能直接调控转录。目的:选用SOX-9基因构建pDC316-SOX-9质粒转染兔骨髓基质细胞,观察SOX-9基因对骨髓基质细胞生长特性及产物表达的影响。设计、时间及地点:细胞基因工程体外实验,于2006-06/2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成。材料:SPF级6周龄新西兰大白兔8只,用于分离培养骨髓基质细胞。方法:采用脂质体介导法将构建的pDC316-SOX-9质粒转染兔骨髓基质细胞,细胞转染分为SOX-9质粒转染组、空质粒组、只加入等量脂质体的空白对照组。主要观察指标:通过细胞形态、细胞生长活性、免疫组织化学及HE染色、RT-PCR法、ELISA法检测SOX-9基因转染骨髓基质细胞是否成功。结果:pDC316-SOX-9质粒转染4d出现小片的细胞集落,挑取克隆扩增培养后,细胞呈梭形纤维状。随转染时间的延长,空白对照组细胞逐渐死亡,SOX-9质粒转染组、空质粒组的细胞活性均显著延长,在转染2周达高峰,之后逐渐降低。转染第6天,SOX-9质粒转染组骨髓基质细胞免疫组织化学染色呈棕黄色,稳定表达SOX-9蛋白,HE染色可见多个双核细胞,细胞增殖旺盛,与成软骨细胞类似;空质粒组无SOX-9蛋白表达,组胞增殖分裂不旺盛。SOX-9质粒转染组表达SOX-9 mRNA,空质粒组及空白对照组均无SOX-9 mRNA表达。转染后24,48,72h及1,2周,SOX-9质粒转染组细胞上清液中SOX-9含量均明显高于空质粒组、空白对照组(P<0.01)。结论:利用pDC316-SOX-9质粒成功转染兔骨髓基质细胞,增强细胞生长活性,并能持续稳定的分泌SOX-9蛋白,可诱导骨髓基质细胞向软骨方向分化。
- 徐忠世肖德明林博文卢小虎李冉
- 关键词：骨髓基质细胞转染软骨
- 兔骨髓基质细胞的体外培养及鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的体外分离培养兔骨髓基质细胞并进行鉴定,为组织工程提供适宜的种子细胞。方法抽取新西兰白兔红骨髓,在体外分离纯化获取骨髓基质细胞,分别用倒置显微镜观察骨髓基质细胞的增殖分化,用HE染色光镜下观察对细胞进行鉴定,用MTT法描绘细胞生长曲线,并对传代培养的细胞进行冻存复苏。结果骨髓基质细胞在在培养皿中贴壁生长、增殖,经鉴定为单核细胞;细胞生长曲线显示在接种后前6d细胞持续旺盛生长,第8天细胞活力最高;复苏冻存56d的细胞,培养,发现细胞依然生长良好,增长迅速。结论可以通过在体外分离纯化骨髓基质细胞并传代培养、冻存复苏,获得足够数量有多向分化潜能骨髓基质细胞,可作为组织工程的种子细胞。
- 徐忠世杨述华肖德明林博文卢小虎李冉
- 关键词：骨髓基质细胞细胞培养
