重庆市自然科学基金(cstc2011jjA10046)
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 相关作者：李琪周向东李娜陈贵华更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院俄罗斯医学科学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Ezrin介导中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的人气道上皮细胞株分泌黏蛋白增加被引量：3
- 2014年
- 目的探讨膜连接蛋白Ezrin在中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导气道黏液高分泌的作用及相关调节机制。方法以中性粒细胞弹性蛋白酶刺激培养的人气道上皮HBE16细胞,ELISA法、real-time PCR法测定黏蛋白(MUC)5AC的蛋白及mRNA水平。免疫荧光法检测Ezrin蛋白含量。结果 NE刺激30 min后MUC5AC mRNA表达增强,细胞中及培养上清中黏蛋白MUC5AC的含量均显著高于对照组(P<0.01);转染Ezrin永久磷酸化载体pEGFPN1-Ezrin-T567D的细胞经NE刺激后,胞质内磷酸化Ezrin表达明显增强,且胞膜分布增多。同时,细胞培养上清液中的MUC5AC蛋白含量亦显著高于单纯NE组(P<0.01)。遏制Ezrin磷酸化pEGFP-N1-Ezrin-T567A载体转染组在NE刺激后,Ezrin蛋白与pEGFP-N1-Ezrin-T567D组相比有明显减少,且未出现向胞膜聚集的趋势,同时分泌至培养上清的MUC5AC蛋白也有明显减少(P<0.01),同时伴随胞质内MUC5AC蛋白有所增加(P<0.05)。结论 Ezrin蛋白参与了NE诱导的MUC5AC蛋白分泌,是气道上皮细胞MUC5AC分泌的重要调控分子。
- 李琪李娜尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：黏蛋白类分泌白细胞弹性蛋白酶EZRIN
- Wnt/β-catenin信号通路参与高渗条件下气道上皮细胞黏液高分泌被引量：3
- 2014年
- 目的研究高渗刺激对人气道上皮细胞(16HBE)黏蛋白(MUC)5AC分泌的影响,以及Wnt/β-catenin信号通路可能的介导作用。方法使用浓氯化钠配置高渗培养液,用高渗培养液刺激16HBE细胞,细胞分为常规培养(阴性对照组)以及高渗培养液刺激3、6、9、12 h组。ELISA法检测MUC5AC分泌量,Western blotting法检测人气道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表达情况。将Wnt4小片段siRNA转染16HBE细胞,再给予高渗培养液刺激。采用ELISA法检测培养上清的MUC5AC分泌量,采用Western blotting法检测细胞内经典Wnt/β-catenin通路相关信号分子的表达量,细胞免疫荧光法检测核因子(NF)-κB p65核转位情况。结果高渗培养的16HBE细胞上清及胞质中检测到的MUC5AC分泌量显著高于阴性对照组,且MUC5AC分泌量在一定范围内呈时间依赖性(均P<0.05)。高渗刺激组Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表达量较阴性对照组无明显变化(均P>0.05),而Wnt4表达量显著升高(P<0.05)。高渗刺激组细胞内β-catenin和Cyclin D1的相对表达量显著高于阴性对照组,细胞免疫荧光法提示NF-κB p65核转位(均P<0.05);而经转染Wnt4 siRNA后,高渗培养组上清及胞质内MUC5AC分泌量显著低于未转染的高渗培养组(P<0.05),细胞内β-catenin、CyclinD1水平及NF-κB p65的核转位现象也受到显著抑制(均P<0.05)。结论高渗盐水可诱导16HBE细胞MUC5AC高分泌,Wnt/β-catenin信号通路在该效应中有重要的参与作用。
- 李琪陈贵华周向东
- 关键词：黏蛋白5AC核因子ΚB
