国家自然科学基金(30600592)
- 作品数：7 被引量：13H指数：3
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- 人胰腺癌干细胞对吉西他滨的敏感性及其分子机制研究被引量：4
- 2010年
- 目的检测人胰腺癌干细胞对吉西他滨的敏感性,分析其差异性基因的表达,初步阐明其耐药分子机制。方法运用流式技术从人原代胰腺癌和细胞系SW1990中分选CD24+CD44+ESA+细胞,行NOD/SCID鼠移植瘤实验验证其肿瘤干细胞特性;运用吉西他滨进行体内、外干预,检测胰腺癌干细胞凋亡和表达率变化情况。采用人类全基因组表达谱AffymetrixU133plus2.0芯片对胰腺癌干细胞和非干细胞进行差异基因筛选。结果人原代胰腺癌和细胞系SW1990中分选到CD24+CD44+ESA+(0.8%)和CD24+CD44+(3.6%)细胞,移植瘤实验证实其为胰腺癌干细胞。肿瘤干细胞凋亡率及表达率检测提示胰腺癌干细胞对吉西他滨显著耐药。与胰腺癌非干细胞比对,基因表达谱芯片筛查到胰腺癌干细胞820条差异基因,其中上调表达281个,下调表达539个。结论胰腺癌干细胞对吉西他滨耐药,具有特征性基因表达谱,为阐明胰腺癌多药耐药机制及靶向治疗奠定基础。
- 朱峰王敏秦仁义申铭王欣田锐张志发石程剑
- 关键词：胰腺癌肿瘤干细胞基因芯片多药耐药
- 胰腺癌细胞转染hSSTR2基因对下游波形蛋白表达的影响及其意义被引量：2
- 2009年
- 目的探讨生长抑素2型受体(hSSTR2)基因转染胰腺癌细胞对下游蛋白表达的影响及其意义。方法利用腺病毒载体Ad.CMV.hSSTR2.GFP将hSSTR2全长cDNA导入胰腺癌细胞Panc-1;采用荧光差异双向凝胶电泳技术分离并筛选hSSTR2基因转染胰腺癌细胞前后差异表达蛋白;用反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱鉴定差异蛋白。利用免疫印迹验证差异表达的波形蛋白;采用免疫组化检测波形蛋白在胰腺癌组织中的表达,并分析其临床意义。结果有统计学意义的差异蛋白质点21个;选择1.3倍以上的差异点18个,经质谱鉴定得到13个蛋白质,包括翻译调节蛋白、代谢酶类、与细胞通讯信号传导相关蛋白、细胞结构蛋白、分子伴侣、具有GTPase活性的蛋白及动力蛋白等。波形蛋白在胰腺癌细胞转染hSSTR2基因后表达降低,免疫组化显示波形蛋白主要在低分化的胰腺癌细胞中高表达。结论筛选的波形蛋白等差异蛋白可能成为新的胰腺癌敏感治疗靶点。
- 江建新申铭秦仁义李静田锐
- 关键词：胰腺肿瘤蛋白质组学波形蛋白
- 生长抑素2型受体基因转染对胰腺癌细胞蛋白表达的影响
- 2008年
- 目的探讨生长抑素2型受体（hSSTR2）基因转染对胰腺癌细胞PANCl蛋白表达的影响，以寻找新的胰腺癌敏感治疗靶点。方法利用前期构建的腺病毒载体Ad．CMV．hSSTR2．GFP将hSSTR2全长eDNA导入胰腺癌细胞PANCl。采用双向荧光差异凝胶电泳（2D—DIGE）技术分离并筛选转染hSSTR2的实验组、空载体对照组以及空白组胰腺癌细胞之间差异表达蛋白，用反射式基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱（MALDI-TOF／TOF）技术对差异蛋白进行鉴定。结果hSSTR2成功地转染了胰腺癌细胞，获得了hSSTR2阴性和阳性表达的PANCl荧光差异蛋白表达图谱，经DeCyderv6．5软件分析，共有18个差异在1．3倍以上的蛋白质点，经质谱鉴定得到13个蛋白质。低表达的蛋白7个，为GMP合酶、磷酸化应激诱导蛋白、谷氨酸脱氢酶、Septin—11、波形蛋白、异柠檬酸脱氢酶α亚基、线粒体内膜易位酶；高表达蛋白6个，为真核延长因子1cd、丙酮酸激酶异构体M2型、烯酰-CoA水合酶、转录调节因子1-β、Mitofilin、HSPl05。结论hSSTR2基因转染胰腺癌细胞PANCl后引起蛋白表达发生变化，这些差异蛋白功能涉及到糖、脂肪、核酸代谢以及细胞生长调节和细胞凋亡等，从而为寻找新的胰腺癌敏感治疗靶点奠定基础。
- 江建新申铭秦仁义王敏田锐
- 关键词：胰腺肿瘤受体生长抑素蛋白质组学
- 人胆管癌CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh细胞亚群的分选及其肿瘤干细胞样特性的鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的 检测及分选人胆管癌中的CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh细胞亚群,探讨其是否具有肿瘤干细胞样生物学特性.方法 流式细胞术检测6例人胆管癌中CD24、CD44、EpCAM的表达率 取2例人胆管癌新鲜标本种植到NOD/SCID鼠皮下,建立荷人胆管癌小鼠模型.流式细胞术分选CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh亚群细胞,NOD/SCID鼠移植瘤试验鉴定其成瘤和分化能力.结果 6例人胆管癌组织标本和2例移植瘤中,CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh在人胆管癌中表达率为0.58%～2.43%（平均值0.94%）.运用NOD/SCID鼠移植瘤模型,分选得到CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh亚群细胞.NOD/SCID鼠移植瘤试验,1×103个CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh细胞能成瘤（3/8）,而CD24- CD44- EpCAMlow/-细胞在5×104才能成瘤（1/8）.CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh胆管癌细胞NOD/SCID鼠移植瘤的组织类型及标记物的表达率和原代肿瘤相似.结论 人胆管癌中含有CD24＋ CD44＋ EpCAMhigh细胞亚群,具有强成瘤能力、自我更新和分化的能力,可能是胆管癌干细胞.
- 朱峰王敏秦仁义申铭王欣田锐江建新石程剑
- 关键词：胆管癌肿瘤干细胞
- Construction of a lentiviral vector for RNA interference of human VIM gene and its silencing effect in pancreatic cancer cells被引量：4
- 2009年
- 目的将为人的活力基因的 RNA 干扰(RNAi ) 构造 lentiviral 表示向量；并且在胰腺的癌症房间线 Panc-1 估计它的基因 silencing 效果。短发卡 RNA (shRNA ) 定序的三人的活力基因用联机的可得到的一个软件和一对被设计的方法来自文件。在合成以后并且退火，四双 stranded oligonucleotides (dsOligo ) 被克隆进 pGCL-GFP/U6 原生质标志，它被聚合酶链反应(PCR ) 和 DNA 定序分析随后证实。实时 PCR 并且西方弄污被用来在 293T 房间屏蔽有效 pGCL-GFP-shRNA 原生质标志，然后，最有效的被挤进有包装材料 pHelper 的 lentiviral 的 recombinant lentivirus Lv-VIM-shRNA 1.0 并且 pHelper 2.0 在 293T 房间。lentivirus 的 titer 被 hole-by-dilution titer 试金决定。在 Panc-1 房间的 Lv-VIM-shRNA 的 silencing 效果被即时 PCR 验证并且西方弄污。结果有效 Lv-VIM-shRNA 成功地被构造。lentivirus 的 titer 在 2 ×上被决定 10 9 TU/mL。活力 mRNA 和 vimentin 的表情是在感染 Lv-VIM-shRNA 的 Panc-1 房间的 down-regluated。有效 Lv-VIM-shRNA 能在 vitro 在 Panc-1 房间禁止活力基因的表示的结论，它为在发信号的小径调查活力基因的角色提供一个工具在胰腺的癌症和寻找的新治疗学的目标的 tumorigenesis 和前进包含了。
- Jianxin Jiang Ming Shen Renyi Qin Rui Tian Jing Li Min Wang
- 关键词：胰腺癌细胞慢病毒载体RNA干扰短发夹RNA
- 生长抑素受体2转染胰腺癌细胞生物学行为的研究
- 2007年
- 目的探讨生长抑素受体2（SSTR2）对胰腺癌恶性行为的影响。方法利用原先已构建的腺病毒载体Adv-GFP-SST2R将人SSTR2全长cDNA转染导入胰腺癌细胞株PC3中,用RT-PCR检测SSTR2mRNA表达。通过肿瘤细胞与基膜成分黏附能力测定、运动能力测定、明胶酶谱法观察转染前后细胞的生物学特性的改变。结果转染Adv-GFP-SST2R的PC3细胞表达SST2RmRNA。SSTR2转染胰腺癌PC3细胞后,胰腺癌细胞与基质的黏附性、运动性下降,明胶酶的分泌能力明显减弱。结论SSTR2转染可明显减轻胰腺癌的恶性行为。
- 陈敏申明胡均杜志勇刘文松王敏秦仁义
- 关键词：转染肿瘤浸润明胶酶类
- 干细胞相关基因Oct-4在人肿瘤细胞系中的表达及其意义被引量：1
- 2007年
- 目的探讨干细胞相关基因Oct-4在多种人肿瘤细胞系中的表达。方法体外培养人胰腺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌细胞系,应用RT-PCR和Western blot法分别检测Oct-4mRNA和蛋白在各种人肿瘤细胞系中的表达。结果Oct-4mRNA和蛋白在胰腺癌细胞系SW1990、PANC1、BxPC3、PC3,宫颈癌细胞系HELA,肝癌细胞系HepG2,乳腺癌细胞系MCF-7和结肠癌细胞系CaCo2中均有表达。结论干细胞相关基因Oct-4在肿瘤细胞中的表达,一方面说明恶性肿瘤与干细胞具有密切的关系,另一方面也说明Oct-4基因在这些肿瘤的发生中起到重要作用。
- 夏维田锐秦仁义
- 关键词：干细胞OCT-4
