国家科技重大专项(2011ZX08008-002)
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 相关作者：陈玉林耿荣庆袁超白丁平李伟更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学盐城师范学院乌兰察布市农牧业科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金江苏省“青蓝工程”基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备被引量：2
- 2013年
- 本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT-PCR结果表明,该基因在转录水平上表达。另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。
- 何晓琳袁超屈雷陈玉林
- 关键词：陕北白绒山羊PIGGYBAC转座子稳定转染
- MSX2基因在山羊真皮毛乳头细胞增殖中的调控作用被引量：5
- 2018年
- 在山羊真皮毛乳头细胞中,建立MSX2基因过表达细胞株和MSX2基因干扰细胞株,通过生长曲线比较各细胞株的增殖能力,再通过Real-time PCR和Western Blot检测各株细胞中MSX2、LEF-1、cyclin D1基因的m RNA表达水平和蛋白质表达水平。结果表明,分离得到的山羊真皮毛乳头细胞均表达α-SMA和CD133表面标记,鉴定该细胞即为真皮毛乳头细胞。通过Real-time PCR检测各细胞株MSX2的表达量,发现在初级毛乳头细胞中过表达试验组是对照组的11.85倍,干扰试验组是对照组的0.31倍;而在次级毛乳头细胞中过表达试验组是对照组的10.59倍,干扰试验组是对照组的0.45倍,表明MSX2基因过表达和干扰细胞系已被成功建立。与此同时,研究中还发现,随着MSX2表达水平的增加,LEF-1和cyclin D1的表达水平也同步增加,同时使真皮毛乳头细胞增殖能力增强;随着MSX2表达水平的下调,LEF-1和cyclin D1的表达水平也同步减少,同时使真皮毛乳头细胞增殖能力下降。旨在探究MSX2基因在山羊真皮毛乳头细胞增殖中的调控模式,并为深入研究山羊毛囊的发生与生长提供理论基础。
- 郝斐闫玮郭晓东朱兵刘东军
- 关键词：山羊过表达细胞增殖
- 山羊绒毛干中线粒体DNA和核DNA的提取与PCR扩增被引量：4
- 2013年
- 本研究以PCR缓冲液、MgCl2溶液和蛋白酶K为裂解提取液,建立了一种从山羊绒毛干中快速提取DNA的方法。结果表明,该方法不仅能从山羊绒毛干中提取出线粒体DNA和核DNA,而且能够有效地进行线粒体基因和核基因组基因的PCR扩增,为拓展羊绒样品在个体识别、遗传资源评价、分子进化和分子标记辅助育种等研究领域中的应用奠定基础。
- 耿荣庆周光现韩旭峰李伟李碧波王小龙陈玉林
- 关键词：山羊绒线粒体DNA核DNADNA提取PCR扩增
- 从羊皮肤组织中提取总RNA方法的改进被引量：5
- 2012年
- 在借鉴动物组织RNA提取方法的基础上,结合使用RNAlater保存液和Trizol试剂,改进了提取步骤和反应体系。利用改良的总RNA提取方法,从羊皮肤组织中快速、高效地提取了高质量总RNA,提取的总RNA可满足基于RNA分析技术的相关分子生物学试验需要。
- 耿荣庆白丁平袁超陈玉林
- 关键词：皮肤组织RNA提取
