湖南省自然科学基金(03Jjy3029)
- 作品数：9 被引量：37H指数：5
- 相关作者：贺修胜唐国华罗桥龙治峰陈主初更多>>
- 相关机构：南华大学中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 石蜡切片厚度对流式细胞仪检测细胞周期分析的影响被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨石蜡包埋组织制备单细胞悬液过程中 ,切片厚度对流式细胞仪检测结果的影响。方法 以小型猪的肠系膜淋巴结为实验对象 ,将淋巴结分别制成新鲜组织单细胞悬液和石蜡组织块 ;石蜡组织块切割成不同厚度的薄片 ,再制成单细胞悬液 ;流式细胞仪分别检测其DNA含量 ;采用MultiCycleforWindows分析软件分析它们之间的差异。结果 新鲜组织的G0 /G1 期、S期、G2 /M期细胞所占比例、G0 /G1 峰的CV值及Debris值与石蜡组织之间存在差异 ;而不同厚度石蜡切片组织间制备的样本所测结果亦不相同。结论 不同厚度石蜡切片组织制备的细胞悬液 ,对流式细胞仪检测细胞周期分析的结果有影响 ;以采用 60
- 唐国华龙治峰贺修胜唐朝克何淑雅唐新民
- 关键词：流式细胞仪DNA石蜡切片
- STGC3新基因的克隆及功能初步分析被引量：14
- 2004年
- 背景与目的:研究显示,染色体3p21是鼻咽癌高频率杂合性丢失位点,本研究在对3p21区域与鼻咽癌相关的表达序列标签(expressedsequencetag,EST)筛选的基础之上,进行鼻咽癌相关新基因的克隆和功能研究。方法:采用cDNA克隆质粒测序及RACE方法,获取新基因全长cDNA。利用因特网上核酸、蛋白质数据库及蛋白质分析软件进行生物信息学分析。通过构建pEGFP-C2/STGC3绿色荧光表达载体,与脂质体共转染COS7、CNE2细胞,进行基因表达蛋白质定位分析。用Northernblot法检测STGC3在人其他正常组织及肿瘤细胞系表达状况。结果:在3p21区域获得一个全长为1271bp的cDNA新序列,生物信息学分析与已知基因无明显同源性,属于一个新基因,编码146个氨基酸,定位于染色体3p21,被命名为STGC3(GenBank登录号:AY078383)。蛋白质定位分析显示,STGC3融合蛋白存在于细胞浆及细胞核内;MTETMArray2多组织膜Northernblot显示该基因在人正常组织及肿瘤细胞均有表达,并在淋巴瘤等多种肿瘤细胞株中阳性杂交信号弱。结论:STGC3属于一个新基因,其表达的蛋白质存在于细胞浆及细胞核内。在鼻咽癌及多种肿瘤细胞株表达下调。
- 贺修胜肖志强陈主初赵素萍朱建华贺智敏李友军田芳余艳辉
- 关键词：鼻咽癌新基因胞浆肿瘤细胞株生物信息学分析细胞核
- 甲氧滴滴涕对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响被引量：1
- 2006年
- 目的探讨甲氧滴滴涕(MXC)对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响。方法实验动物分为对照组,溶剂组,5 d、10 d和15 d MXC实验组。用流式细胞仪检测染毒雄性大鼠生精细胞周期变化。结果随着MXC染毒时间延长与对照组比较,实验组G0/G1期与S期细胞数减少,G2/M期细胞数增多(P<0.05),单倍体细胞减少,二倍体与四倍体细胞增多(P<0.05);除5 d实验组二倍体与四倍体细胞荧光强度强外,其余各实验组的单倍体、二倍体和四倍体细胞荧光强度均减弱(P<0.05);溶剂组与对照组间的变化无显著性差异(P>0.05)。结论MXC可引起大鼠睾丸生精细胞S期抑制及G2期阻滞。
- 唐国华贺修胜何淑雅唐新民
- 关键词：甲氧滴滴涕睾丸生精细胞细胞周期
- 鼻咽癌相关新基因NPCEDRG表达对CNE2细胞生长的影响被引量：7
- 2010年
- 为研究鼻咽癌相关新基因NPCEDRG的功能,探讨其对鼻咽癌细胞生长特性的影响,利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素(deoxycycline,Dox)诱导NPCEDRG基因表达的CNE2细胞系.运用RT-PCR选择背景表达低、诱导活性高的细胞克隆,以不同浓度Dox诱导CNE2/Tet/TRE-NPCEDRG细胞,确定Dox的最佳诱导浓度.借助形态学观察、细胞生长曲线、软琼脂克隆形成试验和流式细胞仪分析等方法,对Dox诱导NPCEDRG高表达后CNE2细胞的生物学行为进行了检测.结果显示,NPCEDRG高表达后CNE2细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),克隆形成能力显著降低(P<0.01),瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控NPCEDRG基因表达CNE2细胞系成功建立,恢复NPCEDRG表达能部分逆转CNE2的恶性表型,证明NPCEDRG是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因.
- 阳帅胡华邓敏董娟慧王妍罗桥贺修胜陈主初
- 关键词：鼻咽癌抑癌基因基因表达
- 石蜡切片厚度对流式细胞仪检测细胞DNA的影响被引量：6
- 2004年
- 唐国华龙治峰贺修胜唐朝克
- 关键词：M细胞细胞DNA细胞群体流式细胞仪技术碱基对DNA双螺旋结构
- Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的建立及其功能初步研究被引量：12
- 2006年
- 利用Tet-on调控系统,建立受强力霉素诱导STGC3基因表达的CNE2细胞系,为进一步研究STGC3的功能提供了一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-STGC3转染入CNE2细胞,并用G418和潮霉素分别进行两轮筛选,运用RT-PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度强力霉素诱导CNE2/Tet/pTRE-STGC3细胞,RT-PCR检测STGC3的表达,确定强力霉素的最佳诱导浓度.采用此浓度的强力霉素分别诱导CNE2、CNE2/Tet/pTRE、CNE2/Tet/pTRE-STGC3三组细胞,测定细胞的生长曲线、克隆形成率和细胞周期分布.诱导STGC3基因高表达,CNE2细胞增殖速度显著减慢(P<0.05),克隆形成能力显著降低(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示,瘤细胞群体中处于G0/G1期细胞数增加,细胞阻滞于G0/G1期.Tet调控STGC3基因表达CNE2细胞系的成功建立,为进一步研究STGC3基因的功能提供一个理想的细胞模型.
- 邓敏贺修胜罗桥赵帅曾超李艳兰
- 关键词：鼻咽癌
- 雌激素对转STGC3基因CNE2细胞系生长增殖的影响被引量：5
- 2007年
- 为探讨雌激素对STGC3基因抑瘤的促进作用,将重组的pcDNA3.1(+)-STGC3真核表达载体导入鼻咽癌细胞系CNE2,经G418筛选,RT-PCR及蛋白质印迹检测STGC3的表达,获得稳定高表达STGC3基因的pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞系.采用细胞计数法,检测雌二醇(β-estradiol)对体外培养pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞生长增殖的影响.将pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞接种于裸小鼠前肢背部皮下,观察分析雌性与雄性裸鼠成瘤的差别.运用RT-PCR、免疫组织化学及蛋白质印迹方法,分别从mRNA及蛋白质水平,分析STGC3基因在裸鼠移植瘤组织中的表达状况.移植瘤组织病理切片检查,观察瘤细胞形态学变化.用流式细胞仪测定移植瘤组织的细胞周期分布.研究结果表明:细胞体外培养,pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞经β-estradiol处理后,其生长速度明显减缓(P<0.05);裸鼠体内研究,接种pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞实验组的移植瘤体积和重量均小于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);实验组中,雌性裸鼠组移植瘤体积和重量均小于雄性组,差异有显著性意义(P<0.05),雌性裸鼠组移植瘤生长最慢,而对照组中雄性与雌性裸鼠组间瘤块的差异无显著性意义(P>0.05);接种pcDNA3.1(+)/STGC3/CNE2细胞的雌性裸鼠组移植瘤,阻滞于G0/G1期细胞数大于其他各组(P<0.05).上述体内外研究结果显示,雌激素可能具有增强STGC3基因对CNE2细胞系的生长抑制作用.
- 胡波邱青朝贺修胜罗桥唐国华龙治峰廖银花
- 关键词：雌激素鼻咽癌裸鼠
- Tet调控STGC3基因表达的CNE2细胞系裸鼠成瘤实验性研究被引量：4
- 2007年
- STGC3基因是一个新近克隆的肿瘤相关基因,前期的体外实验研究结果表明,STGC3基因在CNE2鼻咽癌细胞系高表达,可明显抑制CNE2的生长增殖.采用Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系接种于裸鼠皮下,以强力霉素(Dox)诱导STGC3基因高表达,观测STGC3基因高表达对CNE2裸鼠体内成瘤的影响,并探讨其可能作用机制.运用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫组织化学方法,分别从mRNA和蛋白质水平,分析瘤组织中STGC3基因的表达;用流式细胞仪检测移植瘤组织内肿瘤细胞的凋亡情况;用免疫组织化学方法,检测移植瘤组织凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达.研究结果显示,STGC3蛋白表达主要定位于细胞核内,Dox诱导STGC3基因在Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系高表达,Tet/pTRE-STGC3/CNE2细胞系裸鼠体内成瘤受到明显抑制,与对照组比较,移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小、细胞凋亡率高,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减少,差异有显著性意义(P<0.01).此体内实验研究结果与前期体外实验结果一致,进一步证明STGC3基因对肿瘤细胞生长具有抑制作用.
- 邱青朝胡波贺修胜罗桥龙治峰唐国华廖银花
- 关键词：鼻咽癌裸鼠
- 甲氧滴滴涕对雄性大鼠生殖细胞毒性的影响被引量：4
- 2005年
- 目的探讨甲氧滴滴涕(Methoxychlor,MXC)对雄性大鼠生精细胞的细胞周期影响。方法用流式细胞仪检测染毒雄性大鼠生精细胞周期变化。结果随着MXC染毒时间延长,实验组G0/G1期细胞数(5、10和15 d组分别为58.4%、45.8%和43.9%)与S期细胞数(5、10和15 d组分别为21.9%、20.8%和12.7%)减少,G2/M期细胞数(5、10和15 d组分别为19.7%3、3.4%和43.4%)增多(P<0.05);实验组单倍体细胞减少,二倍体与四倍体细胞增多(P<0.05);除5 d实验组的二倍体与四倍体细胞平均荧光强度增强外,其余实验组单倍体、二倍体和四倍体细胞平均荧光强度减弱(P<0.05),溶剂组变化差异无显著性(P>0.05)。结论MXC可以引起大鼠睾丸生精细胞S时相抑制,并出现G2期细胞阻滞。
- 唐国华唐朝克贺修胜何淑雅
- 关键词：甲氧滴滴涕睾丸生殖细胞
