贵州省社会发展科技攻关计划项目(2011)
- 作品数：60 被引量：212H指数：8
- 相关作者：商黔惠康颖倩何光志王颜颜吕倩更多>>
- 相关机构：遵义医学院贵阳医学院遵义医学院附属医院更多>>
- 发文基金：贵州省社会发展科技攻关计划项目国家自然科学基金贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学环境科学与工程更多>>
- 固相微萃取-气质联用法对红子种子挥发性组分的测定被引量：1
- 2012年
- 采用固相微萃取法提取贵州红子[Pyracantha fortuneana(Maxim.)Li]种子中的挥发性组分,采用GC-MS进行分析。结果表明,从红子种子中共鉴定出30种化学组分,占挥发性组分的91.98%,包括月桂酸(12.36%)、(E,E)-2,4-癸二烯醛(8.87%)、亚油酸(7.96%)、壬醛(6.91%)、己醛(6.79%)和2-十一烯醛(5.20%)等。
- 钟宏波陈青韦黄山
- 关键词：种子挥发性组分
- 建兰花叶病毒贵州分离物的分子鉴定被引量：1
- 2014年
- 采用生物学方法对ELISA检测为阳性的建兰花叶病毒贵州长瓣兜兰分离物(CyMV-GZ)进行纯化。RT-PCR技术克隆其外壳蛋白(CP)基因并测序,使用DNAMAN7.0和MEGA5.0软件对CyMV-GZ的CP基因进行同源性分析。结果表明:成功克隆该病毒CP基因,其序列长度为672 bp,编码223个氨基酸残基;序列同源性分析显示,该分离物的CP基因与16种已报道的CyMV各地分离物同源性均达95%以上,而与同属其他3种病毒CP基因同源性均低于48%,由此证明该长瓣兜兰分离物为CyMV。
- 李欲轲洪鲲张宇斌乙引万晴姣
- 关键词：建兰花叶病毒外壳蛋白分子鉴定
- 间接ELISA在过敏性哮喘模型干预性实验中检测IgE含量的应用
- 2014年
- 目的:探讨间接ELISA法在检测过敏性哮喘模型血清Ig E中的应用价值。方法:对SD大鼠采用卵清蛋白(OVA)雾化法建立过敏性哮喘模型,采用方阵滴定法确定Ig E标准品和血清样本的最佳稀释浓度、酶标二抗的最佳工作浓度。检测45只SD大鼠(哮喘组15只,空白对照组15只,西药治疗组15只)血清Ig E,确定阴阳临界值并评价特异性。用本研究建立的ELISA法检测各组实验动物Ig E的OD450。结果:确定Ig E标准品最佳工作浓度为1:1,样本选用原液,酶标二抗最佳稀释倍数为1:4,阳性临界值为0.752,特异性为100%。测得各组动物血清Ig E的OD450,经统计发现哮喘组血清中的Ig E的OD450值(0.944±0.083)与空白对照组(0.687±0.039)和西药治疗组(0.859±0.014)存在显著差异(P<0.05)。结论:试验建立的间接ELISA法能够检测过敏性哮喘模型的Ig E,该方法可用于临床上诊断过敏性哮喘。
- 郭海涛杨光勇何光志
- 关键词：过敏性哮喘间接ELISAIGE
- 血管平滑肌细胞表型转化在高盐诱导的大鼠颈动脉重构中的作用被引量：10
- 2016年
- 目的探讨血管平滑肌细胞发生表型转化在高盐饮食诱导的Wistar大鼠颈动脉重构中的作用以及替米沙坦的干预效应。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组(0.5%Na Cl饲料饲养)、高盐模型组(4%Na Cl饲料饲养)和替米沙坦组(替米沙坦+4%Na Cl饲料饲养),共喂养24周。HE染色和Masson染色观察颈动脉中膜形态结构的变化。通过real-time PCR和免疫组织化学法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α(SM22α)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA和蛋白在颈动脉的表达。结果与比照组比较,高盐模型组大鼠的血压明显升高(P<0.05),颈动脉中膜增厚、中膜厚度/腔径比、血管壁横截面积、中膜胶原容积分数增加,增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达明显增加(P<0.01),α-SMA、SM22α的蛋白和mRNA表达明显降低,而OPN的蛋白和mRNA表达升高;与高盐模型组比较,替米沙坦组大鼠的血压降低,颈动脉中膜厚度和血管壁横截面积减少、中膜胶原容积分数降低、PCNA阳性表达率减少(P<0.01),α-SMA、SM22α的蛋白及mRNA表达升高,而OPN的蛋白和mRNA表达降低。结论 4%高盐饮食可引起Wistar大鼠颈动脉重构和血压升高,其机制之一可能为血管平滑肌细胞在高盐的作用下发生了由收缩型向合成型转变的表型转化;替米沙坦能够抑制血管平滑肌细胞发生表型转化,并改善颈动脉重构。
- 胡从智商黔惠刘婵刘娟赵宇王晓春
- 关键词：高盐饮食高血压颈动脉重构表型转化
- 贵州齿兰环斑病毒的分子鉴定被引量：7
- 2014年
- 为有效地控制贵州兰花的病毒，将经ELISA方法检测为齿兰环斑病毒（ORSV）阳性的蝴蝶兰样品摩擦接种至其枯斑寄主苋色藜进行纯化，RT-PCR 克隆并连接至 pMD18-T 载体后测序，用 DNA-MAN7．0和MEGA5．0软件进行核苷酸序列分析。结果表明：成功克隆该病毒CP基因，其序列长度为477 bp，编码158个氨基酸残基；序列同源性分析显示，该分离物的CP基因与已报道的11种ORSV各地分离物序列同源性高达96％～99％，而与同属其他3种病毒CP基因同源性均低于70％。证明，贵州蝴蝶兰上感染的病毒为 ORSV。
- 万晴姣李欲轲马骏乙引洪鲲
- 关键词：齿兰环斑病毒外壳蛋白分子鉴定
- 重组IL-4R蛋白对SD大鼠过敏性哮喘干预作用的研究
- 2017年
- 目的探索重组IL-4R蛋白对过敏性哮喘动物模型的干预作用。方法选择6周龄SD大鼠60只,采用安全随机分组法分成哮喘模型组、IL-4R组、布地奈德组和对照组,每组15只。哮喘模型组在腹部选取3处于皮下注射10%鸡卵清白蛋白(OVA)混合液1ml(OVA 100mg、氢氧化铝100mg及灭活的百日咳杆菌5×109个)进行致敏,1周后用上述同样药物再进行致敏,第2次致敏1周后将大鼠分别放入不完全封闭的箱中,用5%OVA与0.9%氯化钠混合溶液,连续10d超声雾化激发30min。IL-4R组和布地奈德组同法造模,但每次雾化激发前30min,IL-4R组腹腔注射重组IL-4R蛋白稀释液(400μg/d)。布地奈德组腹腔注射布地奈德稀释液(400μg/d),对照组用0.9%氯化钠溶液连续10d超声雾化激发30min。取4组大鼠肺组织作HE染色的光镜病理切片,观察肺组织病理变化。建立间接ELISA方法,检测实验中4组大鼠肺泡灌洗液中的IL-4和IFN-γ的含量。结果哮喘模型组大鼠肺组织有大量嗜酸性粒细胞浸润,对照组大鼠肺组织几乎无嗜酸性粒细胞浸润,IL-4R组和布地奈德组大鼠肺组织嗜酸性粒细胞浸润明显少于哮喘模型组。IL-4R组和布地奈德组肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ的含量明显高于哮喘模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论研究结果提示IL-4R蛋白对过敏性哮喘有良好的干预作用。
- 杨光勇郭海涛刘茜明刘莉莉何光志
- 关键词：IL-4RIFN-Γ过敏性哮喘
- 高血压家族史与高盐对人脐动脉平滑肌细胞转化生长因子β1/Smads及钙离子调控相关基因表达的析因分析被引量：4
- 2014年
- 目的研究高血压家族史与高盐对人脐动脉平滑肌细胞(hUASMC)转化生长因子β1(TGF-β1)/Smads及钙离子调控相关基因表达的效应分析。方法取高血压阴性家族史(FH-)和阳性家族史(FH+)胎儿脐带各7例,按照析因设计采用组织块贴壁法培养hUASMC:培养基Na+终浓度为139mmol/L(FH-正常盐组和FH+正常盐组)和164mmol/L(FH-高盐组和FH+高盐组),用平滑肌细胞特异性α肌动蛋白进行免疫细胞化学方法鉴定;实时逆转录聚合酶链反应检测4组hUASMC TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7、细胞膜钠泵-α1亚型(α1-subunit)、α2-subunit、α3-subunit、细胞膜钙泵亚型1(PMCA1)、PMCA4、瞬时受体电位通道C亚族(TRPC)TRPC1、TRPC3、TRPC6mRNA表达;采用析因分析高血压家族史与高盐在TGF-β1/Smads及钙离子调控相关基因表达中的效应。结果高血压家族史和高盐对TGF-β1/Smads、α3-subunit、PMCA4、TRPC1、TRPC6mRNA表达无交互效应(均P>0.05),主效应分析显示高血压家族史增加TGF-β1、α3-subunit、TRPC6的表达(均P<0.05),减少Smad7的表达(均P<0.05),而高盐增加Smad3、TRPC1的表达(均P<0.05),减少PMCA4、Smad7的表达(均P<0.05)。高血压家族史和高盐对α1-subunit、α2-subunit、PMCA1、TRPC3mRNA表达有交互效应(均P<0.05)。高血压家族史为阳性时,高盐组较正常盐组TRPC3表达增加(P<0.05),α1-subunit、α2-subunit、PMCA1表达减少(P<0.05);高血压家族史为阴性时,高盐组较正常盐组TRPC3表达增加(P<0.05),对α1-subunit、α2-subunit、PMCA1表达无影响(均P>0.05);此外,在高盐水平下,高血压家族史阳性组较阴性组α1-subunit、TRPC3表达增加(P<0.05),PMCA1表达减少(P<0.05),在正常盐水平下,高血压家族史阳性组较阴性组α1-subunit、α2-subunit、PMCA1表达增加(P<0.05),对TRPC3表达无影响(均P>0.05)。结论家族史影响α3-subunit、TRPC6基因表达,而高盐影响PMCA4、TRPC1基因表达,高盐和家族史共同参与调节TGF-β1/Smads、α1-subunit、α2-subun
- 范静商黔惠邹焰刘婵胡琼
- 关键词：高血压家族史高盐离子泵
- 抗IL-4R单链抗体原核表达载体的构建与表达被引量：1
- 2017年
- 目的通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗白细胞介素-4受体(IL-4R)鼠抗人单链抗体(scFv)。方法在前期研究结果的基础上优化抗IL-4R scFv序列,优化后分析scFv序列,构建重组质粒pET-32a-scFv,将该重组质粒酶切鉴定,将其转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,并进行SDS-PAGE分析检测,对表达蛋白进行纯化和复性,通过SDS-PAGE分析抗IL-4R单链抗体的分子质量,运用Western blot检测融合蛋白的特异性。结果插入pET-32a载体的scFv序列长度761 bp,抗IL-4R单链抗体的分子质量在45 ku左右,重组蛋白具有较高的特异性。结论本实验成功构建pET32a-scFv原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为进一步研究抗IL-4R单链抗体作为药物靶点提供了工作基础。
- 杨光勇刘茜明刘莉莉王文佳何光志
- 关键词：重组蛋白质类单链抗体原核表达INTERLEUKIN-4
- 银杏提取物对血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响被引量：6
- 2015年
- 目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:分离与培养新生SD大鼠原代心肌细胞,采用Ang Ⅱ诱导乳鼠心肌细胞凋亡后将细胞分阴性对照组(A组,细胞培养液)、Ang Ⅱ组(B组,Ang Ⅱ 10-5mol/L干预)、ALK5抑制剂组(C组,SB431542 6 mg/L及Ang Ⅱ 10-5mol/L)、GBE低剂量组(D组,GBE 2 mg/L及Ang Ⅱ 10-5mol/L)及GBE高剂量组(E组,GBE 20 mg/L及Ang Ⅱ 10-5mol/L),采用流式细胞仪和原位末端标记技术(TUNEL法)检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况。结果:B组心肌凋亡率明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C、D及E组的心肌细胞凋亡率均降低,其中C组和E组细胞凋亡率与B组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:GBE能够抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡,具有保护心肌细胞的作用。
- 李伟罗振华付凌云沈祥春吴立荣刘兴德
- 关键词：银杏叶提取物细胞凋亡心室重塑
- 基于树突状细胞的抗肿瘤免疫治疗被引量：5
- 2014年
- 树突状细胞（dendritic cells,DCs）是目前已知的功能最强大的专职抗原递呈细胞,于1973年被美国洛克菲勒大学的Ralph M.Steinman发现,因其成熟时表面具有许多树枝状的突起而得名.DCs在免疫反应的诱导和调控中具有独特的地位,处于启动、调控以及维持免疫应答的中心环节,
- 胡祖权夏雪杨晓芳曾柱
- 关键词：树突状细胞抗肿瘤免疫治疗专职抗原递呈细胞CELLS免疫反应树枝状
