浙江省科技攻关计划(2005C12038)
- 作品数：17 被引量：105H指数：9
- 相关作者：钱冬王国良刘问潘清清杨玉娇更多>>
- 相关机构：宁波大学浙江省淡水水产研究所华中农业大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划浙江省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 锯缘青蟹血细胞酚氧化酶活力及主要影响因子被引量：9
- 2007年
- 研究了温度、pH、促进剂、抑制剂、菌体及免疫多糖对锯缘青蟹(Scylla serrata)血细胞裂解物(HLS)酚氧化酶(phenoloxidase,PO)活力的影响。试验结果表明:锯缘青蟹PO的最适作用温度为25℃,最适pH值为7.8;SDS、Ca2+、Mg2+均可提高PO的活力,其中Ca2+和Mg2+的最佳反应浓度分别为50 mmol/L和150 mmol/L,SDS的最佳反应浓度为2.5 mg/mL;叠氮钠、二乙基二硫代氨基甲酸钠、乙二胺四乙酸、Cu2+对PO活力有不同的抑制作用。发现拟态弧菌SS060818、气单胞菌Mr M0602、金黄色葡萄球菌ATCC25923、溶壁微球菌AS1.634对PO有激活作用,其中拟态弧菌和气单胞菌激活作用显著,金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌对PO有弱激活作用;肽聚糖、拟态弧菌脂多糖粗提物可显著提高PO活力,肽聚糖、脂多糖的最佳激活浓度分别为2.7mg/mL、0.5 mg/mL。
- 潘清清钱冬刘问邱庆连胡大雁陈昌福
- 关键词：锯缘青蟹酚氧化酶
- pH突变对拟穴青蟹免疫因子的胁迫影响被引量：10
- 2009年
- 以拟穴青蟹为材料,在实验室条件下测定了pH 6.5、pH 7.0、pH 7.5、pH 8.0、pH 8.5各梯度胁迫0h、24h、48h、72h、96h时青蟹的血细胞总数(THC)、血细胞吞噬能力及血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)及溶血素等相关免疫因子的活力变化.结果表明:长时间胁迫使各免疫指标值下降,显示可抑制免疫因子的活性,其中THC、LZM和溶血素活力下降明显.小幅度(pH 7.05、pH 8.02)突变下短时间内各项指标值有所上升,而后下降;大幅度(pH 6.45、pH 8.44)突变各项指标值显著降低.pH胁迫24h后对照组的THC显著高于其他各组;pH 7.05、pH 6.45、pH 8.02组的溶血素活力显著低于对照组;pH 8.44、pH 6.45组的血细胞吞噬作用和ACP活力显著低于对照组.可见THC、溶血素、血细胞吞噬能力、PO和POD可作为pH胁迫对拟穴青蟹抗病力影响的重要参考依据.
- 刘璐杨玉娇王国良
- 关键词：拟穴青蟹免疫因子胁迫
- 盐度变化对锯缘青蟹Scylla serrata免疫因子的胁迫影响被引量：6
- 2010年
- 在实验室条件下测定了在盐度5.0,10.0,17.5,25.0,35.0胁迫0,12,24,48,72和96 h,锯缘青蟹血细胞总数(THC)、血细胞吞噬能力及其血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)、溶血素等免疫相关因子的活力变化。结果表明:各梯度盐度胁迫下THC明显下降,其他免疫指标均在12至24 h出现一个峰值变化,而后趋于平稳。在12 h盐度5.0和35.0组吞噬百分比(PP)、吞噬指数(PI)值高于对照组,盐度10.0和25.0组的LZM,PO活力显著高于对照组,除盐度5.0组以外的ACK,APK活力均高于对照组;POD、溶血素活力在盐度10.0和25.0组显示随时间的延续而增高,分别在72和24 h达到最大值,且极显著高于对照组;SOD的变化不显著。说明盐度突变对锯缘青蟹各相关免疫因子均有影响,低浓度短时间的盐度胁迫能引起应激反应,适当提高其免疫力,而大幅度长时间的盐度胁迫可显著影响锯缘青蟹的抗病力。
- 马月钗杨玉娇王国良
- 关键词：锯缘青蟹盐度变化免疫因子胁迫
- 锯缘青蟹Scylla serrata黄水病血液病理学分析被引量：4
- 2011年
- 对患"黄水病"锯缘青蟹(Scylla serrata)血液生理生化指标测定,结果表明:与健康蟹相比,病蟹的蛋白质和脂质代谢存在显著差异,尿素氮(BUN)和肌酐(GREA)含量极显著高于健康蟹,而甘油三酯(TG)和总胆固醇(CHO)极显著低于健康蟹。病蟹血清蛋白质含量和谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷酰转肽酶(GGT)和乳酸脱氢酶(LDH)活性皆极显著低于对照组,血清电解质仅Mg2+极显著高于对照组。反映患黄水病锯缘青蟹的营养物质代谢发生异常,其抗病力、消化、呼吸、排泄等方面的生理功能受到损害。
- 丁小丰王国良
- WSSV对锯缘青蟹的致病性及血清酶指标影响被引量：12
- 2009年
- 锯缘青蟹(Scylla serrata)俗称青蟹,是我国重要的海水养殖蟹类。近年来,浙江、福建、广东等青蟹主要养殖地区出现了严重的青蟹病害。对浙江省养殖青蟹的发病原因和流行病学调查发现,白斑综合征病毒(White spotsyndrome virus,WSSV)与青蟹发病存在较大相关性。为进一步研究WSSV对青蟹的致病性和发病机理,作者采用白斑综合征病毒的除菌过滤液,以1∶10—1∶10000稀释度注射感染青蟹,结果表明1∶10、1∶100感染组的青蟹死亡率达100%,1∶1000感染组死亡率为66.7%,1∶10000感染组死亡率为38.9%。根据攻毒悬液的病毒浓度计算出WSSV对青蟹的LD50为1.19×106拷贝/只(7.93×103拷贝/g组织);取WSSV感染青蟹血淋巴进行PCR检测,攻毒死亡青蟹的WSSV检出率为100%,表明WSSV对青蟹有很强的致病力。分析病毒感染濒死蟹的血清酚氧化酶(PO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(ALP)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)等主要酶指标,发现病毒感染青蟹的PO、POD和SOD活力明显低于对照组,而ALP、GPT和GOT的活力则明显高于对照组;用WSSV单克隆抗体对感染蟹进行免疫组化分析,发现WSSV主要侵染青蟹的鳃、甲壳下表皮、心脏、肠、胃等组织的上皮细胞,尤其以鳃上皮细胞损害最为严重。
- 刘问钱冬潘清清严小军
- 关键词：锯缘青蟹白斑综合征病毒
- 白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立被引量：2
- 2009年
- 白斑综合征病毒(white spot syndrom virus,WSSV)是甲壳类动物的重要病原,作者采用提纯的WSSV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,共得到3株能特异分泌抗WSSV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞(1E9、1E10、4F5)。将3株杂交瘤细胞注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶104~105。1E9、4F5的抗体亚型均为IgG1,1E10的抗体亚型为IgG2b。特异性实验表明:3株单抗与虾类病原桃拉综合征病毒(TSV)、罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)、哈维氏弧菌(V.harveyi)均无交叉反应。Western bolt分析表明:单抗1E9与病毒28kD外膜蛋白特异性结合。采用生物素标记纯化后的单抗1E9,并建立了生物素-亲和素酶联免疫吸附法(Biotin-Adivin ELISA,BA-ELISA)用于WSSV的检测,该方法对提纯病毒的检测灵敏度约为4 ng,对病虾血淋巴的检测灵敏度达1∶25000。
- 刘问钱冬严小军
- 关键词：白斑综合征病毒单克隆抗体BA-ELISA
- 养殖锯缘青蟹黄水病流行病学及其预报模型被引量：9
- 2009年
- 依据浙江三门县青蟹养殖基地青蟹黄水病发生及流行的定点观测资料和环境因子检测数据,对青蟹发病与养殖环境因子的关系进行了分析研究,找出3个显著影响青蟹黄水病发生与流行的环境因子,即盐度变化、降雨量和弧菌数量。在此基础上,用多元统计方法对黄水病的预报模型进行了研究,建立了三门县青蟹养殖基地的青蟹黄水病预报模型,^Y=-0.088+0.00026TV+7.179SC。检验表明,该模型具较高拟合度,可以用来测报黄水病发病率。
- 冯振飞王国良倪海儿
- 关键词：锯缘青蟹流行病学
- 五倍子、乌梅等45种中草药提取物对锯缘青蟹致病弧菌的抑菌作用研究被引量：11
- 2010年
- 取五倍子、乌梅等45种中草药,分别采用水提取法和醇提取法制备提取液,除菌后滴加至Φ6mm空白药敏滤纸片上,制成试验用药敏纸片。测试了提取物对拟态弧菌SM060818、梅氏弧菌SM060813、霍利斯弧菌SM060913等3种分离自锯缘青蟹体外抑菌的效果。结果表明:所试验的45种中药提取物中,有28种中药提取物对试验弧菌表现有抑菌作用;其中五倍子、乌梅、秦皮、艾叶中药提取物抑菌作用较好,对3种菌株均有较好抑菌效果;天冬、白头翁、赤芍、金银花、黄精、黄柏、青蒿等11种中草药提取物仅对2种菌株有较好抑制作用,千里光、穿心莲等17种中药提取物对弧菌无抑制作用;大部分中药抑菌活性成份均为水溶性提取物,青蒿存在明显的醇溶性抑菌物质。测定了五倍子等9种中药提取物对致病弧菌的最低抑菌浓度(MIC),五倍子、乌梅和天冬3种药物对拟态弧菌和梅氏弧菌的MIC分别为0.172mg/mL、0.461mg/mL、1.042mg/mL,对霍利斯弧菌的MIC分别为0.086mg/mL、0.922mg/mL和1.042mg/mL,有较好的抑菌作用。
- 邱庆连潘清清张友平刘问钱冬
- 关键词：弧菌抑菌体外试验
- 中草药免疫增强剂在甲壳动物病害防控中的应用被引量：4
- 2008年
- 中草药免疫增强剂具有来源广泛、价格低廉、环境污染较低等优越性,近年来已较多地应用于甲壳类养殖动物的病害防控,产生了较好的效果。本文介绍了中草药免疫增强剂多糖、甙类、生物碱类、有机酸及挥发性油类等免疫活性成分和作用机理,以及在甲壳动物上的应用。总结和分析了中草药免疫增强剂在甲壳动物病害防控中的应用情况、评价指标及目前在研制和应用中存在的主要问题和发展趋势,以期为甲壳动物免疫增强剂的研究和应用提供参考。
- 潘清清钱冬刘问陈红琴邱庆连胡大雁
- 关键词：中草药免疫增强剂甲壳动物
- 养殖锯缘青蟹呼肠孤样病毒粒子的电镜观察被引量：10
- 2008年
- 经过对患病青蟹Scylla serrata的组织进行了超薄切片电镜观察,在病蟹的鳃上皮细胞、心肌细胞、胃和肠道上皮细胞中发现了大量的呼肠孤样病毒粒子。该病毒粒子的大小为60 nm左右,二十面体对称,无囊膜,在感染组织细胞浆中呈晶格状排列。根据病毒的形态特征和组织分布形态,初步认为该病毒为水生呼肠孤病毒,暂将其命名为青蟹呼肠孤病毒(Scylla serratareo-like virus,Ss-REO)。
- 陈吉刚杨季芳王海丽丁朋晓
- 关键词：锯缘青蟹电镜
