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pEGFP-N3-t-PA真核表达质粒的构建及其在成纤维细胞中的表达被引量：1: 2008年; 目的利用基因工程技术克隆人组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建一种能高效、安全表达t-PA的pEGFP-N3-t-PA真核表达重组质粒,为进一步研制转基因动物奠定基础.方法采用高效Trizol试剂快速从黑色素瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR获得t-PAcDNA,并将真核表达质粒pEGFP-N3和t-PA基因片段分别双酶切,将回收的pEGFP-N3大片段(4.7kb)与t-PA基因片段(1.1kb)重组.对pEGFP-N3-t-PA质粒进行酶切鉴定和基因测序鉴定.脂质体介导pEGFP-N3-t-PA转染成纤维细胞(NIH3T3),并用RT-PCR法从mRNA水平检测t-PA的表达情况,用倒置荧光显微镜检测、分析其在NIH3T3细胞中的表达.结果成功地从黑色素瘤细胞中克隆了t-PA基因,并构建了以pEGFP-N3为载体的真核表达质粒载体,并能在真核细胞中表达、分泌t-PA.结论含t-PA基因真核表达质粒构建成功.; 王栋何成强杨桂文李国荣; 关键词：组织纤溶酶原激活物基因克隆成纤维细胞

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山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2004BS01012)