国家自然科学基金(30571660)
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
- 相关作者：缪晓辉李爽胡卓汉龚智翔倪武更多>>
- 相关机构：第二军医大学复旦大学江苏省人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢性乙型肝炎病毒感染对人肝细胞色素酶P4502C9的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨慢性HBV感染对人肝细胞色素酶P450 2C9（CYP2C9）的影响。方法收集慢性HBV感染者和健康对照者的肝组织和血液标本各10份，聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）检测CYP2C9基因型，高效液相色谱（HPLC）检测肝组织样本中CYP2C9酶活性。RT—PCR和Western印迹法测定肝组织样本中CYP2C9 mRNA和蛋白表达的差异，数据行t检验。结果20份样本均为野生型CYP2C9（＊1＊1），未检测到突变型基因。反映酶活力的指标最大反应速度（Vmax）在慢性HBV感染组为（40．4±10．4）pmol·mg^-1·min^-1，健康对照组为（52．6±13．4）pmol·mg^-1·min^-1（t=2．269，P=0．0367）；而酶特征性常数米氏常数（Km）分别为（263．5±66．4）μmol／L和（284．6±85．9）μmol／L（t=0．614，P=0．5471）。慢性HBV感染组和健康对照组CYP2C9 mRNA相对表达量分别为0．39±0．28和0．65±0．13（t=2．628，P=0．0171）；蛋白相对表达量分别为0．26±0．13和0．60±0．19（t=4．688，P=0．0002）。结论慢性HBV感染在mRNA和蛋白水平降低肝脏CYP2C9酶的表达，导致酶活性下降。
- 周福平缪晓辉龚智翔姚静娟倪武胡卓汉
- 关键词：基因型代谢细胞色素P450酶系统
- 慢性乙型肝炎病毒感染对人肝细胞色素酶 P450 3A4的影响被引量：5
- 2006年
- 目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染对人肝脏细胞色素酶3A4(CYP3A4)的影响,为慢性 HBV 感染患者安全用药提供指导。方法收集慢性 HBV 感染患者和正常人的肝组织标本,匀浆后以差速离心法制备成微粒体。以睾丸酮为探针底物,用高效液相色谱(HPLC)方法建立体外检测 CYP3A4酶代谢活性的技术平台,检测两组肝组织样本中 CYP3A4的酶活性。以 Western 印迹法测定了两组肝组织样本中 CYP3A4蛋白的表达差异。结果 HPLC 检测显示,反映酶活力的指标V_(max):慢性 HBV 感染组为(493±297)pmol·min^(-1)·mg^(-1),正常对照组为(741±189)pmol·min^(-1)·mg^(-1),两组差异有统计学意义(P=0.03),而酶系特征性常数 Km 值两组分别为:(0.142±0.057)μmol/L,(0.121±0.024)μmol/L,差异无统计学意义(P=0.103)。Western 印迹测定 CYP3A4蛋白表达两组差异有统计学意义(P=0.003),慢性 HBV 感染组 CYP3A4蛋白表达为3.0±1.6,低于正常组的表达量(5.7±1.5)。各样本酶活性和蛋白表达的相关系数为0.7683(P<0.01),表明酶活性与蛋白表达呈现良好的相关性。结论慢性 HBV 感染可降低肝脏 CYP3A4酶蛋白的表达,导致酶活性下降,但是对酶的结构未产生影响。提示慢性 HBV 感染者在使用由 CYP3A4代谢的药物时,要重视由于代谢变化导致的副作用。
- 李爽胡卓汉缪晓辉
- 关键词：肝炎病毒乙型高压液相
- 乙型肝炎病毒X蛋白对HepG2细胞中细胞色素P450同工酶3A4诱导的影响
- 2009年
- 目的 观察乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对1α，25-（OH）2D2诱导的HepG2细胞色素P450（CYP）3A4的影响。方法将重组HBx真核表达质粒pcDNA3-X与pEGFP—N1质粒（转染对照）瞬时共转染HepG2细胞，分为空白细胞对照组（对照组）、转染pEGFP—N1组、转染pEGFP—N1＋1d，25（OH）2D3组、共转染pEGFP-N1＋pcDNA3-X-＋1α，25（OH）2D3组。同时以0．35μmol／L1d，25（OH）2Ds诱导HepG2细胞CYP3A4表达72h，分别以RT—PCR法和Western印迹法，在mRNA水平和蛋白水平检测CYP3A4的表达。组间比较行F检验。结果共转染pEGFP-N1＋pcDNA3X＋1d，25-（OH）2D3组CYP3A4mRNA表达量是空白对照组的1．52倍，而转染pEGFP-N1＋1α，25（OH）2D。组为3．97倍（F=4．72，P〈0．05）；共转染pEGFP-N1＋pcDNA3-X＋1α，25-（OH）2D3组CYP3A4蛋白诱导倍数是2．1，而转染pEGFP-N1＋1α，25-（OH）2D。组是5．9（F=4．68，P〈0．05）。结论HBx干扰1α，25-（OH）2D3对HepG2细胞CYP3A4的诱导，提示HBx对CYP3A4的表达调控有抑制作用。
- 李爽缪晓辉
- 关键词：肝炎病毒病毒蛋白质类细胞色素P450酶系统同工酶类
- 1α，25-二羟维生素DB3B对HepG2细胞中细胞色素P450酶同工酶3A4的诱导作用被引量：2
- 2008年
- 目的观察1α，25-二羟维生素DB3B[1α，25（OH）B2．DB3B1对HepG2细胞中细胞色素P450酶同工酶3A4（CYP3A4）的诱导特点，为药物代谢研究建立简便高效的细胞模型提供依据。方法选取3个浓度的1α，25（OH）B2BDB3B（0．10、0．25、0．35μmol／L）加入HepG2细胞中，分别在培养24、48、72、96h时，以四甲基偶氮唑盐法观察细胞活性，RT-PCR法检测CYP3A4mRNA的表达，Western blot检测CYP3A4蛋白的表达。结果3个浓度的1α，25-（OH）B2BDB3B对HepG2细胞无毒性作用。未经1α，25（0H）B2BDB3s诱导的HepG2细胞CYP3A4mRNA的表达很低，3个浓度的1α，25（OH）B2sDB粥在诱导的第24小时未见到CYP3A4mRNA表达增高；在48h，3个处理组的CYP3A4mRNA表达量分别是对照组的120％、134％、200％；72h达174％、254％、420％；96h为258％、450％、370％。未经诱导的HepG2细胞CYP3A4蛋白的表达很低，在3个浓度下，诱导后的第24小时未见到CYP3A4蛋白表达的增高；在48h，0．10umol／L组未观察到诱导表达增加，0．25μmol／L组和0．35μmol／L组诱导倍数分别为1．2和2．2；72h各浓度处理组诱导倍数分别达1．8、3．4和6．5；96h分别为4．1、6．1、7．2。结论 1α，25-（OH）B2B DB3B可以较好的诱导HepG2细胞中CYP3A4在转录水平和蛋白质表达水平的表达，可应用于CYP3A4酶被抑制导致的药源性肝损害或其他毒性和不良反应的研究。
- 李爽缪晓辉
- 关键词：药物毒性HEPG2细胞
