国家自然科学基金(30571690)
- 作品数：8 被引量：16H指数：2
- 相关作者：张学光马泓冰汤琳罗先富郑舒丹更多>>
- 相关机构：苏州大学南京中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人CD40 mAb 5H6的^125I标记及其与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性被引量：6
- 2008年
- 目的:研究抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6的125I标记及与卵巢癌细胞株HO8910体外结合的生物学特性。方法:氯氨-T法125I标记mAb5H6(125I-5H6),纸层析法测定125I-5H6的标记率和放射化学纯度,三氯醋酸沉淀法分析125I-5H6体外稳定性,细胞结合饱和实验进行Scatchard分析,lindmo法及其改良方法计算125I-5H6的免疫活性分数,细胞结合实验分析125I-5H6同HO8910细胞的内化和滞留。结果:(1)mAb5H6的125I标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%。(2)125I-5H6存放于4℃磷酸缓冲液中7d后其放射化学纯度为(80.3±4.7)%,在37℃血浆中存放24h后其放射化学纯度为(95.3±0.8)%。(3)125I-5H6与HO8910细胞亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L,最大结合位点数(Bmax)=(2.17±0.08)×105个/细胞。(4)125I-5H6免疫活性分数达(38.6±5.4)%。(5)4℃2h125I-5H6同HO8910细胞滞留率为(89.8±6.0)%,37℃2h125I-5H6同HO8910细胞内化率达(54.9±2.6)%。结论:氯氨-T法进行125I-5H6标记具有良好的标记率和放射化学纯度,以及良好的体外稳定性和较高的免疫活性分数,且125I-5H6与HO8910细胞具有很高的亲和力,可用于动物体内实验。
- 罗先富章斌马泓冰汤琳周璇徐颖吴翼伟张学光
- 关键词：^125I标记CD40卵巢肿瘤
- CD40单克隆抗体的抗肿瘤机制及其应用被引量：2
- 2008年
- CD40是分子量为45—50KD的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）超家族成员，表达于多种抗原递呈细胞、内皮细胞、上皮细胞、造血前体细胞、成纤维细胞以及某些肿瘤细胞。通过单克隆抗体激发CD40分子不仅可以直接作用于CD40^＋分子的肿瘤细胞，其介导的信号还可在多个环节影响肿瘤发生、发展，如调控细胞增殖／凋亡，增强其它治疗手段的敏感性，并能通过调节适应性和固有免疫应答而起到抗肿瘤作用，广泛应用于肿瘤治疗。
- 汤琳张学光
- 关键词：CD40单克隆抗体肿瘤
- 一株识别CD40分子新位点的单克隆抗体研制及生物学特性鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的：研制识别CD40分子新位点的单克隆抗体（mAb）。方法：以转人CD40转基因细胞L929-CD40为免疫原，常规免疫6—8周龄的雌性BALB／c小鼠；采用B淋巴细胞融合技术，将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2／0融合，以L929-CD40转基因细胞为抗体筛选阳性细胞，经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养；采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析了该mAb的亚类及抗原识别位点；采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的促增殖效应、ELISA法测定细胞因子分泌以及PI染色分析细胞周期。结果：获得1株持续、稳定分泌鼠抗人CIM0mAb的杂交瘤细胞株（命名为286），该mAb能特异性地识别人CD40分子并较好的识别肿瘤细胞株H08910表达的CD40分子并能够体外促进肿瘤细胞增殖。结论：成功地研制1株识别CD40新位点mAb，该mAb能够很好地识别肿瘤细胞表达的CD40分子并具有体外促进肿瘤细胞生长的作用。
- 汤琳郑璐戚春建马泓冰周璇庄羽美罗先富徐颖张学光
- 关键词：CD40杂交瘤肿瘤细胞
- 人B淋巴母细胞系体外培养方法的优化及其影响因素被引量：3
- 2010年
- 目的探讨体外建立健康人外周血B淋巴母细胞样细胞系(B-LCLs)的优化方法及其影响因素。方法用EB病毒感染健康人外周血中分离的单个核细胞(PBMC),加入CD40激发型抗体(5C11)、CpGDNA免疫调节基因序列以诱导B淋巴细胞增殖,环胞菌素A(CysA)抑制T淋巴细胞的活性。光学显微镜下观察B-LCLs的形态特征,利用流式细胞术分析B-LCLs膜表面分子CD19的表达水平。结果PBMC经EBV感染3周后转化成永生化B-LCLs。转化后的B淋巴母细胞体积增大积聚成团,可进一步分裂增殖并长期传代培养。CD40激发型抗体(5C11)及CpG免疫调节基因序列联合EBV感染人PBMC,明显地提高了转化效率,转化后的LCLs保持了成熟B淋巴细胞的生物学特征。结论CD40信号激发和CpG免疫调节基因序列联合运用能有效地促进EBV对人B淋巴细胞的转化及体外建系。
- 刘敏娟孙静许云云臧志远刘柳张学光
- 关键词：EB病毒CD40信号B淋巴母细胞系
- CD40不同形式的活化对CD40突变的RPMI48226细胞增殖和表型的影响
- 2008年
- 目的分析CIM0抗体或配体不同形式刺激对RPMI8226细胞增殖及表面共刺激分子和黏附分子表达的影响，探讨RPMI8226细胞CIM0基因突变在其生物学行为中的作用。方法用RT—PCR方法和DNA序列测定检测RPMI8226细胞CIM0基因突变体，分析RPMI8226细胞经CIM0抗体或配体四种不同方式（CD40单抗、CD40单抗包板、rhsCD40L和CIMOL转基因细胞）刺激后，其体外生长曲线、细胞表型及细胞周期的变化，并利用激光共聚焦显微镜对RPMI8226细胞表面CIM0信号转导体的形成进行初步分析。结果RPMI8226细胞表达CIM0突变体（TCA→TTA，Ser→ku），但是该点突变并未影响hmuCD40的抗原表位。三种激发CD40活化的分子（CD40单抗、rhsCD40L和CD40L转基因细胞）并不影响RPMI8226细胞的体外增殖，但是CIM0单抗包板能明显抑制RPMI8226细胞的增殖[（2．5±0．6）×10^5vs（7．8±1．2）×10^5，P〈0．05]，并产生明显的G．期阻滞[（58．0±3．6）％vs（42．0±2．3）％，P〈0．05]。RPMI8226细胞上黏附分子和共刺激分子的表达无明显变化。激光共聚焦显微镜分析结果显示，在CD40被激活后能形成CD40信号传导的复合体。结论RPMI8226细胞高表达一种CIM0基因突变体，该突变体能在被激活后形成相应的信号传导复合体。
- 郑璐马泓冰戚春建董秋明张学光
- 关键词：RPMI8226细胞CD40配体DNA突变分析
- 一株识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的单克隆抗体的研制及其生物学功能研究被引量：1
- 2009年
- 目的:以本科室发现肿瘤细胞上表达的CD4078AA突变为基础,研制识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性作初步分析。方法:以转人CD40突变体转基因细胞L929-CD40mu为免疫原,免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929-CD40mu转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,免疫荧光标记法对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用快速定性试纸法及竞争抑制结合试验分析该mAb的亚类及抗原识别位点;免疫印迹法对该mAb进行鉴定;采用MTT法分析mAb在体外对肿瘤细胞的抑制增殖效应以及PI-annexinⅤ方法进行细胞凋亡测定。结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD40mumAb的杂交瘤细胞株(命名为10C5),该mAb能特异性地识别人肿瘤细胞株HO8910表达的CD40突变体分子,而不识别正常扁桃体B淋巴细胞及血管内皮细胞表达的CD40分子,并且能够在体外促进肿瘤细胞凋亡。结论:成功地研制出1株特异性识别肿瘤细胞上CD40突变体分子的mAb,该mAb具有体外抑制肿瘤细胞生长并促进其凋亡的作用。
- 郑舒丹马泓冰高超汪家敏孙静罗先富张学光
- 关键词：CD40杂交瘤单克隆抗体突变体肿瘤细胞
- 一株识别CD83单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:鼠抗人CD83功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以人CD83转基因细胞L929/CD83为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将免疫小鼠脾脏细胞与Sp2/0融合,以L929/CD83、293/CD83转基因细胞为抗体筛选阳性细胞,经免疫荧光标记分析对杂交瘤进行反复筛选和多次的克隆化培养;采用Ig类和亚类快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法、Westernblot对mAb的生物学特性进行鉴定。结果:获得1株稳定分泌鼠抗人CD83mAb的杂交瘤细胞株(命名为9D8),该mAb能特异性地识别成熟的DC、活化的T细胞及肿瘤细胞株Daudi、8226表达的CD83分子,该mAb识别的位点不同于商品化抗人CD83mAb(HB15e)。结论:成功地研制1株鼠抗人CD83mAb,识别位点与HB15e不同,为更好地研究该分子的功能提供良好的物质基础。
- 高超仲维学郑舒丹陈礼文朱一蓓张学光
- 关键词：CD83杂交瘤单克隆抗体
- 125^I标记抗人CD40 mAb 5H6在荷人卵巢癌(HO8910)BALB/c裸鼠体内分布及放射免疫显像被引量：2
- 2008年
- 目的:研究125I标记抗人CD40单克隆抗体(mAb)5H6同卵巢癌细胞HO8910体外结合的生物学特性以及在荷瘤鼠体内的分布和放射免疫显像。方法:氯胺-T法进行mAb 5H6 125I标记(125I-5H6),Lindmo法计算125I-5H6的免疫活性分数;细胞结合饱和实验进行Scatchard分析计算解离常数Kd及最大结合位点数Bmax;建立荷人卵巢癌(HO8910)裸鼠模型,分析125I-5H6在体内的分布,并用SPECT进行放射免疫显像。结果:mAb 5H6标记率为(85.4±5.2)%,放射化学纯度为(99.2±0.5)%,125I-5H6免疫活性分数为(38.6±5.4)%,与HO8910细胞的亲和力Kd=(0.711±0.06)nmol/L。在荷瘤鼠体内特异性结合HO8910肿瘤,48小时达到高峰,放射免疫显像肿瘤清晰可见。结论:125I-5H6同卵巢癌HO8910细胞在体外结合具有很高亲和力,在体内能特异性结合HO8910肿瘤,能获得优质的放射免疫图像。
- 罗先富章斌马泓冰汤琳郑舒丹徐耀瑜吴翼伟张学光
- 关键词：CD40放射免疫显像卵巢癌
