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重组人HIF-1α真核表达质粒的构建和鉴定被引量：1: 2009年; 目的:构建重组人HIF-lα真核表达质粒,为进行人HIF-lα基因的克隆与表达做准备。方法:从人外周血细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法反转录合成cDNA。分别以含有绿色荧光蛋白(EGFP)片段的质粒PIREGFP质粒和反转录合成的cDNA为模板,加入所设计的3对引物[EGFP-linker、HIF-1α)上游(up)和下游(down)引物]所扩增目的基因片段分别与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB/Amp平板培养基筛选菌落,提取质粒。测序正确后经酶切先后克隆进入pVAX1载体。结果:通过聚合酶链反应(PCR)分别获得约870、1199和672bp的特异性DNA片段,分别与T载体连接后测序,测序结果与GenBank所提供的基因序列相同。将以上3个片段依次连入pVAX1载体后,所得质粒经酶切鉴定后获得约1800bp片段,与预想结果一致。结论:成功构建了重组人HIF-1α真核表达质粒pVAX1-EGFP-linker-HIF-1α。; 陆蕴松高忠礼刘光耀; 关键词：缺氧诱导因子1 质粒

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吉林省科技厅科研基金(20070105)