广东省自然科学基金(3227)
- 作品数：10 被引量：56H指数：5
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- 相关机构：华南农业大学郑州牧业工程高等专科学校河南农业大学更多>>
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- 禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究被引量：19
- 2006年
- 将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H(OmpmH)的重组菌pGEX-ompmH／ BL21大量培养,在最佳诱导条件下诱导表达,表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化,得到Ompm H基因的原核表达产物,将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗,用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡,首免后每周采血检测抗体,二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1 进行攻击。结果显示,OmpmH具有良好的免疫原性,能诱导鸡体产生特异性抗体,可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击,免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗。
- 曹素芳黄青云
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌亚单位疫苗
- 禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因与鸡IL-18基因真核共表达载体的构建及表达被引量：5
- 2006年
- 根据鸡IL-18和真核质粒pcDNA 3的序列,设计1对特异性引物,以重组质粒pcDNA 3/IL-18为模板,扩增出具有完整真核表达结构的CM V-cIL-18-BGHpA片段。将此片段非定向插入重组表达质粒pcDNA 3/om pH中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定证实成功构建了共表达禽巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因和鸡IL-18基因的重组表达质粒。将共表达质粒转染Cos7细胞,经RT-PCR、SDS-PAGE及W estern b lotting检测,证明了外膜蛋白H基因及鸡IL-18基因均获得了瞬时表达,为研究禽巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H的免疫原性和鸡IL-18在基因疫苗中的免疫调节作用奠定了基础。
- 曹素芳黄青云韩先干邓宪方
- 关键词：鸡IL-18WESTERNBLOTTING
- 禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因真核表达载体的构建被引量：3
- 2005年
- 应用限制性内切酶BamHⅠ将片段ompH从重组质粒pMDT-omp H切下,非定向插入真核表达质粒pcDNA3中,经酶切分析、PCR鉴定及序列测定,证实成功构建了禽多杀性巴氏杆菌C48-1外膜蛋白H基因的重组真核表达质粒pcDNA3-ompH。将重组表达质粒转染至 COS7 细胞,经RT-PCR、SDS-PAGE及Western-blotting检测,证明了外膜蛋白H基因获得了瞬时表达。
- 曹素芳黄青云韩先干邓宪方
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白质印迹法
- 鸡IL-18基因重组真核表达载体的构建及其表达产物的生物学活性被引量：10
- 2005年
- 从pMDChIL18克隆质粒扩增获得了ChIL18全基因片段,并将其重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)。经酶切、质粒PCR鉴定和基因测序,鸡IL18全基因被正确重组到pcDNA3.1(+)真核表达质粒上;将重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)ChIL18转染COS7细胞,转染细胞中含ChIL18基因的mRNA。SDSPAGE分析表明,表达产物是与ChIL18相符的约23ku的蛋白条带。鸡淋巴细胞转化试验表明,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导转化作用。
- 温纳相黄青云陈荣光束长娥
- 关键词：IL-18基因真核表达
- 共表达C48-1H基因和鸡IL-18基因重组DNA疫苗的免疫保护性
- 2008年
- 曹素芳黄青云
- 关键词：DNA疫苗免疫保护性IL-18H基因共表达免疫保护率
- 鸡IL-18对禽多杀性巴氏杆菌DNA疫苗的免疫佐剂作用被引量：15
- 2007年
- 为了探索鸡IL-18在禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗中的免疫佐剂作用,分别用共表达鸡IL-18基因和禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗、鸡IL-18真核表达质粒pcDNA3/cIL-18与禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗混合物、禽多杀性巴氏杆菌C48-1H基因的DNA疫苗肌肉注射5周龄鸡,首免后每周采取外周血及外周抗凝血,应用ELISA和MTT法分别检测免疫鸡的体液免疫及细胞免疫水平。二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1进行攻击。结果鸡IL-18能够明显增强禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗的免疫原性,显著提高免疫鸡的体液免疫和细胞免疫水平,并且鸡IL-18与禽多杀性巴氏杆菌H基因共表达时的免疫佐剂作用最强,能强有力地抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击。结果表明,鸡IL-18可作为DNA疫苗的一种理想的免疫佐剂。
- 曹素芳黄青云
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌鸡IL-18DNA疫苗
- 鸭IL-18基因克隆与序列分析被引量：4
- 2008年
- [目的]为深入研究鸭IL-18的基因表达及其生物学活性和分子佐剂的应用奠定基础。[方法]依据GenBank中香港鸭IL-18基因的序列设计1对特异引物,以广东水鸭脾淋巴细胞总RNA为模板进行RT-PCR扩增,克隆广东水鸭IL-18基因并进行序列分析。[结果]测序结果表明,广东水鸭的IL-18基因开放阅读框为603 bp,编码201个氨基酸,分子量为23.2 kDa。序列分析表明,所获得的广东水鸭IL-18基因与GenBank中香港鸭的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为100%。它与鸡和火鸡的核苷酸同源性分别为86.9%和87.1%,而氨基酸同源性分别为96.5%和97.0%。[结论]进化树分析结果表明,鸭IL-18基因与鸡和火鸡进化关系较近。
- 韩先干黄青云尹会方邓宪方柯艳坤
- 关键词：RT-PCR
- 禽巴氏杆菌C_(48-1)外膜蛋白H基因克隆及序列分析被引量：3
- 2006年
- 根据已发表的外膜蛋白基因核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽巴氏杆菌5:AC48-1株的ompH全长片段,将ompH进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,ompH全长1597bp,含有一个1056bp的开放性阅读框架(ORF),编码352个氨基酸,前20个氨基酸组成信号肽。与已知的15个血清型及疫苗株CU的ompH的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较,核苷酸同源性在51.5%～98.7%之间,氨基酸同源性在39.3%～98.7%之间。氨基酸多序列比较显示,血清型特异性抗原表位位于60～80位和200～220位氨基酸处。
- 曹素芳黄青云韩先干陈红英邓宪方
- 关键词：禽巴氏杆菌外膜蛋白同源性
- 禽多杀性巴氏杆菌C_(48-1)成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索被引量：1
- 2005年
- 应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C48 1成熟外膜蛋白H基因(ompmH),将ompmH片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得了重组表达质粒pGEX ompmH。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),当转化菌的D600nm值达到0.6～0.8时,对异丙基硫代 β D 半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST ompmH表达的最适条件。结果,当细菌的D600nm值为0.6～0.8时,IPTG最佳诱导浓度为0.8mmol L,最佳诱导时间为4h,最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测,结果显示表达的融合蛋白GST ompmH能与C48 1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应,证明pGEX 6p 1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。
- 曹素芳黄青云韩先干邓宪方
- 关键词：多杀性巴氏杆菌聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹法融合蛋白
- 鸡IL-18在禽多杀性巴氏杆菌DNA疫苗中的免疫佐剂作用
- 【目的】为了探索鸡IL-18在禽多杀性巴氏杆菌H基因DNA疫苗中免疫佐剂作用。【方法】将共表达鸡IL-18基因和禽多杀性巴氏杆菌CH基因的DNA疫苗、鸡IL-18真核表达质粒pcDNA3/cIL-18与禽多杀性巴氏杆菌C...
- 曹素芳黄青云陈红英
- 关键词：禽多杀性巴氏杆菌鸡IL-18DNA疫苗
- 文献传递
