国家自然科学基金(30571325)
- 作品数：4 被引量：32H指数：3
- 相关作者：安铁洙王春生梁洋张丽新白秀娟更多>>
- 相关机构：东北林业大学东北农业大学吉林大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析被引量：16
- 2008年
- 以绵羊基因组DNA为模板克隆获得绵羊角蛋白结合蛋白基因KAP6.1启动子。将KAP6.1启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中,构建了重组真核表达载体,并采用脂质体法转染传代培养绵羊皮肤成纤维细胞并检测其表达活性。结果显示:(1)KAP6.1启动子序列大小为830 bp,与GenBank上绵羊角蛋白结合蛋白的参照序列(M95719)有99.64%的同源性;与M95719相比,KAP6.1在349位点、726位点和246位点上分别存在1个C缺失、1个转换(G代替A)和1个颠换(A代替T);在438位点上具有1个依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box,但未发现具有依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box;(2)转染24 h后,在蓝光激发下检测到细胞核附近有绿色荧光蛋白的高表达,并在48 h后逐渐减弱,而细胞质内绿色荧光蛋白的表达量增加。这一结果表明,KAP6.1启动子在绵羊皮肤成纤维细胞的表达上可能具有特异性。
- 王春生安铁洙白秀娟任洪林柳增善
- 关键词：启动子分子克隆活性分析
- 4℃保存的小鼠胎体皮肤成纤维细胞继代培养及冻存被引量：3
- 2007年
- 为了探讨利用死亡动物皮肤组织获取成纤维细胞的方法，研究将小鼠胎体或皮肤分别在4℃的mPBS液中保存24—120h，然后通过原代培养、冷冻复苏和继代培养，观察了皮肤成纤维细胞的生长增殖能力。结果表明：与新鲜皮肤（对照组）原代培养成纤维细胞达到85％以上汇合需要8d相比，4℃保存24—120h后的皮肤（试验组）需要的时间延长（9—21d），但仍能贴壁生长并达到85％以上汇合，且皮肤保存法优于胎体保存法；各试验组经3—4d继二代培养即可达到85％汇合（对照组为3d）；冷冻复苏的各试验组原代培养细胞，经继二代培养即可在3—4d内达到85％以上汇合。说明动物死亡后，若及时采集其皮肤并在4℃的mPBS液中保存一段时间，经原代培养和继代培养，或经原代培养、冷冻复苏和继代培幕．可获得具有正常继代能力的成纤维细胞。
- 刘欣梁洋张丽新安铁洙
- 关键词：小鼠成纤维细胞继代培养冷冻保存
- 转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞系的建立
- 参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因(AY55585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S),采用脂...
- 梁洋王春生原璐安铁洙
- 关键词：转染
- 文献传递
- 4℃保存的绵羊皮肤成纤维细胞的培养及冷冻被引量：6
- 2007年
- 为了探讨利用死亡珍稀动物皮肤建立成纤维细胞库的方法,本研究采集幼龄绵羊耳廓皮肤,在4℃条件下保存0 h(对照组)、24 h、48 h和72 h后进行原代培养,达到85%汇合后再进行了继代培养或者经冷冻-复苏后继代培养。结果:(1)与对照组相比,各保存组皮肤成纤维细胞经原代培养后达到85%汇合时间滞后(分别为4 d和8d^15 d);(2)各保存组成纤维细胞经4代培养后,与对照组继代培养达到85%汇合时间相同(对照组继代培养第1~4代均为4 d);(3)原代培养成纤维细胞通过冷冻-复苏后经第2代培养,即可在4 d内均达到85%汇合。表明动物死亡后立即采取其耳廓皮肤并在4℃下保存一段时间后,经原代培养和继代培养,或经原代培养、冷冻-复苏和继代培养,可获得具有正常继代能力的成纤维细胞。
- 王春生张丽新梁洋安铁洙
- 关键词：绵羊皮肤4℃保存成纤维细胞原代培养继代培养
- 小鼠皮肤及其毛囊早期发育的组织学观察被引量：9
- 2007年
- 目的探讨小鼠皮肤及其毛囊的早期发育规律。方法采用常规石蜡切片和H-E染色技术,观察昆明系小鼠出生前后皮肤及其毛囊的形态发育。结果(1)孕龄16 d胎鼠的皮肤表面形成凹凸不平的深褶皱,但在生后3 d^5 d不仅皱褶的数量减少,而且凹陷变浅;(2)胎鼠孕龄16 d至19 d,其皮肤的表皮、真皮及皮肤总厚度呈现平稳增厚。但是,出生后,其表皮、真皮和皮肤总厚度急剧降低;在生后第1天至第9天,表皮呈现平稳增厚,而真皮则在生后快速厚度,第7天达到最高值(1861.50μm);(3)孕龄16 d的胎鼠皮肤中可观察到初级毛囊,至生后第7天其密度呈现平稳增长;与其相比,次级毛囊从18 d胎鼠开始出现,其密度增长非常迅速,出生后第7天达到1257.14/mm;毛囊的总密度与次级毛囊呈现相似的变化趋势。出生第7天后,由于毛囊的数量急剧增加,无法观察初级毛囊和次级毛囊的变化规律;(4)初级毛囊和次级毛囊的长度与深度变化在出生前后的相对缓慢,与其相比在第3天以后至第7天呈现迅速变化趋势。结论小鼠皮肤及其毛囊的生长性发育发生在胎儿晚期和生后的早期,而其周期性变化可能从出生后的第9天以后开始出现;在孕期16 d至生后第7天可能是检测毛囊特异性基因表达的最佳期。
- 王博王春生安铁洙
- 关键词：小鼠皮肤毛囊石蜡切片HE染色
