武汉市青年科技晨光计划(200750731256)
- 作品数：13 被引量：37H指数：4
- 相关作者：李皓桓刘世清贺斌彭昊刘文俊更多>>
- 相关机构：武汉大学更多>>
- 发文基金：武汉市青年科技晨光计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 新生大鼠许旺细胞体外培养纯化的最佳培养条件被引量：2
- 2009年
- 背景：许旺细胞对促进外周神经的生长、发育和修复有重要作用，目前对于许旺细胞体外培养方法的优劣情况报道不一。目的：筛选许旺细胞最佳体外培养条件。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2008-06／10在武汉大学人民医院中心实验室完成。材料：三四天龄SD大鼠24只，由武汉大学医学部实验动物中心提供。方法：无菌剥离大鼠双侧坐骨神经，应用低浓度酶快速消化法、差速贴壁法分离培养纯化许旺细胞。取处于指数生长期的细胞，调整密度为1×10^7L^-4接种到6孔培养板，然后分组实验。设定4个条件：培养基pH（6．8-8．8）、胎牛血清体积分数（2％-20％）、培养箱温度（34-39℃）、培养箱CO2浓度（3％-8％）。首先固定胎牛血清体积分数、培养箱温度和培养箱CO2浓度，改变培养基pH对细胞进行培养，从而确定最适培养基pH。然后依次改变胎牛血清体积分数、培养箱温度以及培养箱CO2浓度，进而得到其他3个指标的最佳值。镜下观察见明显克隆形成时终止培养，以含5个以上细胞的细胞团作为1个克隆，在倒置显微镜下进行克隆计数。主要观察指标：通过许旺细胞长势及克隆形成情况，筛选许旺细胞体外培养扩增的最适pH、胎牛血清体积分数、培养温度和培养箱C02浓度。结果：在以DMEM／F12（1：1）为基础培养基的情况下，培养基pH为7．0-7．2时克隆形成最多，〈7．0或〉7．2时克隆形成明显下降：胎牛血清体积分数为10％许旺细胞长势较好且克隆数明显增加，当血清浓度过高或过低时克隆形成相对较差：34-36℃细胞生长受到明显抑制，克隆形成较少，37℃时克隆形成最多，〉37℃细胞长势开始变差，克隆形成下降，至39℃时细胞已无法贴壁；培养箱CO2浓度为3％～8％时许旺细胞克隆形成无明显变化。结论：许旺细胞体外培养的最佳条件为
- 贺斌刘世清李皓桓
- 关键词：许旺细胞克隆
- 冷洗涤法纯化培养Schwann细胞的研究被引量：5
- 2007年
- Schwann细胞（Sc）是周围神经系统最主要的胶质细胞，为周围神经纤维行使功能和生存所必需。因其具有分泌多种生物活性物质、促进周围神经再生、修复中枢神经系统损伤等多种生物学效应，近年来一直是神经科学研究的热点。
- 李皓桓彭昊刘世清刘登胜
- 关键词：SCHWANN细胞纯化培养中枢神经系统损伤周围神经系统周围神经再生
- Ang-1,Ang-2及其受体Tie2在增生期血管瘤中的表达被引量：4
- 2008年
- 目的:检测血管生成素-1,-2(Ang-1,-2)及其受体Tie2在皮肤增生期血管瘤中的表达并探讨其意义。方法:应用半定量RT-PCR技术检测26例皮肤增生期血管瘤及20例正常组织中Ang-2、Ang-1及Tie2 mRNA的表达,并结合计算机图像分析比较上述RNA在两组中的表达。结果:Ang-2 mRNA在增生期血管瘤中的表达显著高于正常组织(P<0.05);Ang-1 mRNA在增生期血管瘤中的表达显著低于正常组织(P<0.05),而Tie2 mRNA的表达在血管瘤与正常组织间的表达无明显差异(P>0.05)。结论:Ang-1、Ang-2可能与血管瘤的发生、发展有关。
- 汤洁刘世清李皓桓刘文俊郑慧锋
- 关键词：血管生成素
- P13K／Akt信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中的作用被引量：9
- 2010年
- 目的探讨磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（phosphoinositide-3 kinase／Akt，P13K／Akt）信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中的作用。方法体外分离培养雪旺细胞，S-100免疫荧光鉴定；Westernblot检测P13K下游因子Akt磷酸化激活形式（p-Akt）的表达，并通过P13K激酶抑制剂（wortmannin）阻断该通路后p-Akt的表达情况。结果吡咯喹啉醌可使雪旺细胞发生形态学变化，加入吡咯喹啉醌后30min即可检测到p-Akt的表达，4h达高峰，12h基本无表达；吡咯喹啉醌在1—100nmol／L范围内可使p-Akt表达增加；加入wortmannin阻断P13K后p-Akt上调表达消失（P〈0．05）。结论吡咯喹啉醌可使雪旺细胞发生形态学变化，P13K／Akt信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中发挥重要作用。
- 贺斌刘世清李皓桓
- 关键词：吡咯喹啉醌雪旺细胞
- Ang-1,Ang-2和Tie2基因在骨肿瘤组织中的差异表达被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨Ang-1、Ang-2及Tie2 mRNA在骨肿瘤组织中的表达及其意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应法对正常骨组织、骨软骨瘤、尤文肉瘤和骨肉瘤组织标本各6例内Ang-1、Ang-2及Tie2 mRNA含量进行半定量检测。结果:恶性骨肿瘤组织(尤文肉瘤、骨肉瘤)内Ang-2 mRNA/Ang-1 mRNA比值较正常骨组织和良性肿瘤骨组织比值上调。尤文肉瘤和骨肉瘤中Tie2 mRNA的表达上调。结论:恶性骨肿瘤组织内Ang-1,Ang-2及Tie2mRNA表达失衡,肿瘤骨组织内可能存有Ang/Tie2的自分泌和旁分泌系统。深入探讨Ang-1/Ang-2/Tie 2在肿瘤骨组织中的分子生物学机制及其临床病理联系,有望使其成为判定骨肿瘤预后的指标,并为骨肿瘤分子治疗提供靶位点。
- 李皓桓彭昊方洪松汤洁温志远
- 关键词：血管生成素骨肿瘤逆转录聚合酶链反应
- 吡咯喹啉醌对体外培养雪旺细胞增殖及Cyclin E基因表达的影响被引量：11
- 2008年
- 目的观察吡咯喹啉醌（PQQ）对体外培养的大鼠坐骨神经雪旺细胞（Sc）增殖的影响，寻找PQQ促进Sc体外高效扩增的最佳效应浓度，并探讨其促进Sc增殖的作用机制。方法取SD鼠婴坐骨神经体外培养Sc，应用免疫荧光技术鉴定Sc的纯度，采用噻唑蓝（MTT）比色分析法选择PQQ促进Sc增殖的最佳效应浓度，设6个浓度梯度（1、10、10^2、10^3、IE0^4、10^5nmol／L），用逆转录．聚合酶链反应（RT，PCR）法检测PQQ对雪旺细胞Cyclin E基因表达的影响。结果PQQ浓度为1、10、1×10^2、1×10^3nm0L／L时能促进雪旺细胞的增殖，以浓度为1×10^2nmol／L时促进作用最明显，PQQ浓度为1×10^2nmol／L时与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05），而PQQ浓度为1×10^5nmol／L对SC具有一定的抑制作用；RT—PCR法显示与对照组比较PQQ浓度为1×10^2nmol／L时能促进雪旺细胞CyclinE基因的表达。结论适宜浓度的PQQ能促进Sc的增殖，其机制可能与其促进Sc中Cyclin E基因的表达有关。
- 彭昊郑慧锋李皓桓刘文俊
- 关键词：吡咯喹啉醌雪旺细胞增殖基因表达
- 吡咯喹啉醌对大鼠雪旺细胞增殖及其EGR1、EGR2基因表达的影响被引量：3
- 2010年
- 目的观察吡咯喹啉醌(PQQ)对大鼠雪旺细胞的促进增殖作用及其EGR1、EGR2基因表达的影响。方法体外原代培养大鼠雪旺细胞,纯化及S-100免疫荧光鉴定;加入PQQ进行培养,使PQQ终浓度分别为0、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L,持续作用72 h,提取总RNA进行RT-PCR,检测EGR1及EGR2基因的表达变化。结果PQQ可促进雪旺细胞增殖并改变其形态,1～1 000 nmol/L的PQQ可使EGR1、EGR2基因表达增高,10 000 nmol/L时抑制EGR1及EGR2基因的表达。结论PQQ可促进大鼠雪旺细胞增殖并改变其形态,使雪旺细胞ERG1及EGR2基因表达上调。
- 贺斌刘世清李皓桓
- 关键词：吡咯喹啉醌雪旺细胞细胞增殖
- 吡咯喹啉醌对大鼠雪旺细胞形态及增殖细胞核抗原表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:观察吡咯喹啉醌(PQQ)对体外培养雪旺细胞的形态、细胞数量及雪旺细胞内增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:从出生3-5dSD大鼠坐骨神经分离培养雪旺细胞,纯化并经S-100免疫荧光标记鉴定;设立对照组和实验组,分别加入100nmol/LPQQ和等量PBS培养48h后倒置显微镜下观察细胞形态并进行细胞计数;将不同浓度的PQQ(0,10,50,100,500nmol/L)加入雪旺细胞培养基中,培养48h后提取总mRNA及总蛋白进行PCNA的RT-PCR和Western blotting检测。结果:100nmol/LPQQ干预雪旺细胞48h可以使细胞的形态发生变化并使细胞数量增加,细胞数量较对照组增加13.6%;RT-PCR及Western blotting检测结果表明:PQQ浓度在10-500nmol/L浓度范围内可增加雪旺细胞内PCNA的表达,且当PQQ浓度为100nmol/L时该上调效应最明显,分别是对照组的2.0倍和3.4倍。结论:PQQ可增加体外培养雪旺细胞的数量;并可使体外培养雪旺细胞内PCNA表达上调。
- 贺斌刘世清李皓桓
- 关键词：吡咯喹啉醌雪旺细胞增殖细胞核抗原
- MEK/ERK信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的 探讨MEK/ERK信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中的作用. 方法 体外培养雪旺细胞,S-100免疫荧光鉴定;Western blot检测MEK下游因子ERK1/2磷酸化激活形式（p-ERK1/2）的表达;MEK抑制剂（PD98059）阻断该通路后检测p-ERK1/2的表达;MTT法检测经PD98059阻断MEK通路后雪旺细胞的增殖情况. 结果 吡咯喹啉醌可激活雪旺细胞内MEK/ERK信号通路,在加入吡咯喹啉醌1 h后p-ERK1/2表达最高;吡咯喹啉醌在1～500 nmol/L范围内可使p-ERK1/2表达增加,1 000 nmol/L时与对照组比较差异无统计学意义,10 000 nmol/L时则表现为抑制作用（P＜0.05）;经PD98059阻断MEK通路后p-ERK1/2的上调效应消失（P＜0.05）.而且加入PD98059阻断MEK通路后吡咯喹啉醌对雪旺细胞的促增殖效果减弱. 结论 吡咯喹啉醌可激活雪旺细胞MEK/ERK信号通路,且该通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中发挥作用.
- 贺斌刘世清李皓桓
- 关键词：吡咯喹啉醌雪旺细胞增殖
- 吡咯喹啉醌对许旺细胞增殖及c-fos、c-jun、CREB和PCNA表达的影响被引量：7
- 2011年
- 目的 观察吡咯喹啉醌（PQQ）对许旺细胞（Sc）的增殖作用,并探讨其对Sc c-fos、c-jun、CREB及PCNA表达的影响.方法 体外原代培养、纯化及鉴定Sc;行无血清培养细胞周期同步化,应用不同浓度PQQ（0、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L）作用sc 72 h;流式细胞仪检测细胞周期比例;RT-PCR检测c-fos、c-jun、CREB的mRNA含量;Western blot技术检测PCNA蛋白表达.结果 PQQ处理组表现为G0/G1期细胞比例减少,S期和G2/M期细胞所占比例增加;100 nmol/L PQQ可使c-fos、c-jun、CREB mRNA含量分别增加0.33、0.42和0.52倍（P＜0.05）;PQQ浓度为1 000 nmol/L时,上述因子mRNA含量与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;PQQ浓度为10 000 nmol/L时,上述因子mRNA的含量均降低（P＜0.05）;PQQ浓度在1～100 nmol/L时,PCNA蛋白表达上调,且当PQQ浓度为100 nmol/L时PCNA蛋白上调效果最为明显,与对照组比较增加了1.17倍（P＜0.05）;当PQQ浓度为1000 nmol/L时PCNA的表达与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;当PQQ浓度为10 000 nmol/L时PCNA表达降低（P＜0.05）.结论 10～100 nmol/L PQQ可促进Sc增殖,且c-fos、c-jun、CREB、PCNA在PQQ促Sc增殖过程中表达上调.
- 李皓桓贺斌彭昊刘世清
- 关键词：吡咯喹啉醌许旺细胞细胞增殖
