国家自然科学基金(31360169)
- 作品数：19 被引量：52H指数：4
- 相关作者：王瑞刚李国婧杨杞杨飞芸刘坤更多>>
- 相关机构：内蒙古农业大学中国农业科学院草原研究所包头市种子管理站更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程更多>>
- 中间锦鸡儿DHN1基因克隆及表达分析被引量：2
- 2016年
- 脱水素(DHNs,dehydrins)是LEA II亚家族蛋白,在种子发育后期大量积累,并受不同逆境胁迫处理诱导表达。在中间锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中筛选到了一段DHN1序列,利用RACE技术克隆获得基因全长序列。序列比对分析表明,Ci DHN1具有开放阅读框891bp,起始密码子为ATG,终止密码子为TAG,编码297个氨基酸,含有5个Y片段和一个K片段,与Ci DHN1相似性最高的为山茱萸科主教红端木(Cornus sericea),相似性为39%。系统进化分析显示Ci DHN1单独聚为一支,推测该蛋白为新的功能未知蛋白。亚细胞定位结果表明Ci DHN1定位在细胞质、质膜和细胞核。荧光定量PCR结果显示Ci DHN1的表达受冷、脱水和Na Cl等非生物胁迫的诱导。Ci DHN1过量表达拟南芥后,其中表达量最强的株系对200 mmol/L的Na Cl处理较为敏感。Ci DHN1在中间锦鸡儿抵抗逆境胁迫中的功能有待于进一步研究。
- 万永青杨洋张春林万东莉杨爱琴杨杞王瑞刚李国婧
- 关键词：基因克隆亚细胞定位中间锦鸡儿
- CiF3H基因克隆及功能分析被引量：3
- 2019年
- 黄烷酮-3-羟化酶(F3H)是类黄酮合成途径的中枢位点,调控代谢途径中黄酮醇和花青素合成。文章根据转录组数据库中F3H基因中间片段设计特异引物,以中间锦鸡儿cDNA为模板,克隆得到CiF3H基因全长,通过序列分析、系统进化分析加以确认。qRT-PCR检测分析发现,中间锦鸡儿CiF3H基因受紫外、NaCl和ABA等胁迫诱导时表达模式具有相同规律。CiF3H基因在叶和根中表达量相当,茎中较少。异源表达CiF3H基因拟南芥的总黄酮含量少量增加,花青素含量降低。
- 杨飞芸白洁杨天瑞王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿总黄酮含量花青素含量转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿CiMYB177的克隆及表达分析被引量：3
- 2016年
- MYB转录因子超家族很多基因参与调控生物钟。本文利用RACE技术克隆到一个中间锦鸡儿MYB家族基因CiMYB177,其c DNA全长2 028 bp,可以编码433个氨基酸。序列分析发现CiMYB177属于CCA1(CIRCADIAN AND CLOCK ASSOCIATED1)亚家族,与大豆的GmMYB177一致性最高(70.3%)。用染色体步移技术克隆到该基因起始密码子上游1 127 bp的启动子序列。用实时荧光定量PCR技术对CiMYB177的转录水平进行分析发现其表达呈节律性的昼夜变化,并且受干旱、NaCl和冷的诱导。亚细胞定位观察发现CiMYB177定位到细胞核。
- 韩晓敏邢丹丹杨杞李国婧王瑞刚
- 关键词：中间锦鸡儿生物钟基因克隆MYB转录因子
- 中间锦鸡儿CiABR17基因的克隆及表达分析
- 2017年
- 该研究采用blastn比对方法,从中间锦鸡儿干旱胁迫抑制消减杂交文库筛选出ABA响应蛋白17基因(ABR17)的EST序列。RACE扩增得到cDNA序列594bp,其中ORF为471bp,编码157个氨基酸,预测蛋白质分子量为16.44kD,等电点为4.93,平均疏水指数为-0.126,是一种亲水蛋白。实时荧光定量PCR检测发现,中间锦鸡儿CiABR17基因在脱水、NaCl和热胁迫下均有不同程度表达,说明CiABR17基因与中间锦鸡儿响应逆境胁迫有关;过表达CiABR17拟南芥株系的鲜重、干重和莲座直径均极显著高于野生型株系。
- 刘坤杨杞赵娜韩晓东苏雨萌王瑞刚李国婧
- 关键词：中间锦鸡儿ABR
- 柠条锦鸡儿CkLEA4-2基因的克隆与功能分析被引量：2
- 2017年
- 胚胎发育晚期丰富(LEA)蛋白在植物抵抗非生物胁迫过程中起着重要作用。利用RACE技术从柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii)中克隆得到一个LEA_4家族基因Ck LEA4-2,其cDNA全长963 bp,编码240个氨基酸。实时荧光定量PCR检测发现CkLEA4-2的表达受干旱、脱水、NaCl、冷、高pH、脱落酸(ABA)处理的诱导。通过构建35S启动子驱动的pCanG-CkLEA4-2植物过表达载体,研究转基因拟南芥并发现,过表达Ck LEA4-2提高了拟南芥在ABA处理及NaCl和甘露醇胁迫下的萌发率。在幼苗生长阶段,转基因拟南芥的抗旱性增强,失水率低于野生型,并且积累了较少的丙二醛,脯氨酸和谷胱甘肽含量高于野生型。同时,CkLEA4-2过表达后使ABA2、AAO3等ABA信号途径基因以及胁迫响应基因RD22、RD29A和MYB2的表达量升高。结果表明,Ck LEA4-2基因参与了植物逆境应答过程,并提高了转基因拟南芥的抗旱能力。
- 于秀敏岳文冉张燕娜王瑞刚李国婧杨杞
- 关键词：非生物胁迫柠条锦鸡儿转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿WRKY75基因对拟南芥耐受盐和ABA能力的影响被引量：7
- 2018年
- 该研究从旱生灌木中间锦鸡儿中克隆得到1个CiWRKY75基因。序列分析显示,CiWRKY75开放阅读框长570bp,编码189个氨基酸,含有1个WRKYGQK基序和1个C2H2型锌指结构,属于第二类WRKY转录因子。亚细胞定位显示,CiWRKY75定位于细胞核。实时荧光定量PCR检测表明,CiWRKY75基因的表达受盐胁迫和ABA诱导。在拟南芥中过量表达CiWRKY75后,与野生型拟南芥相比,转基因株系种子的萌发率在盐胁迫下降低,并且对盐胁迫的耐受能力明显减弱;ABA处理下,2个转基因株系的种子萌发率(10.3%、9.6%)较野生型(25.9%)明显降低。研究表明,CiWRKY75是中间锦鸡儿对盐和ABA响应的重要调控因子。
- 万永青毛铭铢万东莉万东莉王光霞李国婧王光霞
- 关键词：中间锦鸡儿WRKY转录因子盐胁迫转基因拟南芥
- 中间锦鸡儿CiCHIL克隆及其黄酮代谢功能研究
- 2016年
- 植物的次生代谢产物能够为植物的果实和花着色、有助于种子的形成、花粉的传播、适应外界逆境及防御害虫的攻击。苯丙烷代谢途径是植物中一个重要的次生代谢途径,苯丙烷代谢通路上有几条主要的分支,分支下游产生了上千种化合物。查耳酮异构酶(chalcone isomerase,CHI)是苯丙烷通路上的一个关键酶,催化查耳酮到黄烷酮的反应,主要作用是帮助底物进行正确的分子内环化反应,生成的黄烷酮类化合物成为苯丙烷代谢途径下游产物的底物。从中间锦鸡儿干旱胁迫抑制性削减杂交文库中克隆得到一个CHI基因家族成员,序列分析和系统进化分析表明,该基因属于CHIL基因亚家族成员,命名为CiCHIL。实时荧光定量PCR检测发现,该基因受UV-B诱导且过表达CiCHIL具有较强的抵御紫外胁迫的能力。对过表达株系进行RNA和蛋白质水平的检测,对挑选出来的过表达株系进行总黄酮含量检测,发现过表达株系总黄酮含量显著高于野生型。
- 韩晗包旦奇杨飞芸刘坤杨天瑞杨杞李国婧王瑞刚
- 关键词：WESTERNBLOT总黄酮含量中间锦鸡儿
- 中间锦鸡儿CibHLH027基因的克隆和功能研究被引量：1
- 2018年
- 叶片衰老是植物生长发育的最后阶段,黑暗、干旱和极端温度等会加速叶片衰老过程,严重影响植物的生长发育和作物产量。bHLH（basic helix-loop-helix）属于转录调控因子中的一个大家族,因具有保守性较高的bHLH结构域而得名,广泛存在于真核生物界。在中间锦鸡儿（Caragana intermedia）转录组数据库中得到一条候选bHLH基因全长序列,将其命名为Cib HLH027。正常和黑暗诱导的情况下,CibHLH027-OE株系较WT相比叶片衰老明显,并且黑暗处理后叶绿素含量下降、离子渗透率增大、细胞膜受损严重,说明CibHLH027参与了叶片衰老调控过程。
- 杨天瑞李娜张秀娟杨杞王瑞刚李国婧
- 关键词：中间锦鸡儿黑暗叶片衰老
- 中间锦鸡儿转录组EST-SSR标记系统性识别与引物筛选被引量：4
- 2016年
- 旨在对中间锦鸡儿转录组数据库EST信息进行SSR系统性识别和初步验证,为进一步SSR分子标记开发提供依据。对Hi Seq2000测序技术获得的中间锦鸡儿转录组Unigenes进行SSR位点搜索,共获得45 706个SSR位点,出现频率为10.38%,平均4.30kb出现一个SSR位点。SSR重复类型以单核苷酸重复序列基元为主,所占比例为56.47%;二核苷酸、三核苷酸重复序列基元的数量所占比例分别是20.56%和21.04%;其他数量的基元所占比例仅为1.9%。多核苷酸重复类型中最多的为2核苷酸重复AG/CT;其次为3核苷酸重复AAG/CTT。针对EST-SSR位点随机挑选了150对引物,通过琼脂糖凝胶电泳进行PCR验证,其中有79对能获得扩增条带,21对引物扩增出单一条带,比例为14.0%。
- 王光霞杨杞王瑞刚李国婧
- 关键词：中间锦鸡儿引物筛选
- 中间锦鸡儿查尔酮合成酶基因的克隆和表达分析被引量：7
- 2016年
- 查尔酮合成酶是黄酮类化合物合成途径的第一个关键酶。本研究通过其它豆科植物已知的查尔酮合成酶保守序列设计简并引物,扩增得到中间锦鸡儿查尔酮合成酶基因的保守片段,经RACE技术扩增得到基因全长。对该基因gDNA全长和cDNA全长分析显示,它是由一个内含子和两个外显子构成,该基因cDNA全长为1 548 bp,其中ORF(open reading frame)为1 176 bp,5'UTR(untranslated regions)为175 bp,3'UTR为196 bp,编码391个氨基酸,推测蛋白质质量为43.03 kD,等电点为6.24,是一种两性蛋白。序列比对和系统进化分析表明,该基因属于查尔酮合成酶家族,命名为CiCHS。实时荧光定量PCR检测发现,CiCHS在紫外处理下受到诱导,0.5 h表达量最高,之后不断降低。
- 白洁杨杞郭琳王瑞刚张春林李国婧杨飞芸
- 关键词：中间锦鸡儿查尔酮合成酶基因克隆RACE黄酮
