安徽省自然科学基金(0044547)
- 作品数：13 被引量：116H指数：8
- 相关作者：沈继龙刘庆中汪学龙祖莹李德发更多>>
- 相关机构：安徽医科大学蚌埠医学院深圳市儿童医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3不同剂量对免疫保护性的影响被引量：6
- 2006年
- 目的观察不同剂量重组日本血吸虫(中国大陆株)信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的免疫保护性,以探讨最佳的免疫剂量。方法以逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)扩增Sj14-3-3基因,并将其亚克隆入原核表达载体pET28a,然后转化大肠埃希菌进行诱导表达;用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、电洗脱和透析的方法制备纯化的rSj14-3-3蛋白,分5组(第1、2、3组为rSj14-3-3蛋白50μg、100μg和300μg实验组,第4、5组分别为福氏佐剂和生理盐水对照组)免疫BALB／c小鼠并进行攻击感染实验。在尾蚴攻击感染6周后,剖杀小鼠计算各组的减虫率和减卵率。并在试验过程中留取不同时期小鼠血清,检测抗Sj14-3-3特异性IgG抗体。结果成功表达出rSj14- 3-3蛋白,纯化蛋白免疫小鼠行攻击感染后各实验组的减虫率为第1组28．20％、第2组43．10％、第3组40．00％;各组的减卵率分别为(按以上组序)41．80％、57．50％、55．70％。各实验组与对照组比较,差异有统计学意义(减虫率:第1组t=6．8、第2组t=8．7、第3组t=7．3,各组P值均<0．01;减卵率:第1组t=11．23、第2组t=11．54、第3组t=7．99,各组P值均<0．01);各实验组间两两比较,第1组与第2组间(减虫率:X2=8．96,P<0．05;减卵率:X2=15．69,P<0．05)、第1组与第3组间(减虫率:X2=6．52,P<0．05;减卵率:X2=12．52,P<0．05)差异有统计学意义;第2、3两组间差异无统计学意义(减虫率:X2=1．20,P>0．05;减卵率:X2=0．93,P>0．05)。各实验组的抗Sj14-3-3特异性总IgG水平都有显著升高,所测的4个亚型中以IgG1和IgG2a亚型升高为主,IgG2b和IgG3亚型升高不明显。结论重组Sj14-3-3的免疫保护性与免疫剂量有一定关系,以100μg抗原量免疫小鼠获得的保护性最好。
- 刘庆中胡元生沈继龙江宝玲汪学龙
- 关键词：重组蛋白质类抗体生成
- 重组日本血吸虫14-3-3蛋白的纯化和免疫特性分析被引量：8
- 2003年
- 目的 :纯化日本血吸虫信号蛋白质 14 3 3编码基因的原核表达产物 ,分析纯化产物的免疫学特性。方法 :SDS PAGE鉴定重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)蛋白包涵体 ,超声破碎细胞收集包涵体 ,尿素溶解包涵体 ,NiSO4平衡层析柱 ,亲和层析纯化rSj14 3 3,Western blot鉴定纯化产物的免疫学特性。结果 :rSj14 3 3是以包涵体形式在大肠埃希菌中表达 ,通过亲和层析在 32 .5kDa附近得到单一蛋白条带 ,Western blot证实纯化产物为rSj 14 3 3,且具有与天然Sj 14 3 3相同的抗原表位。结论 :成功纯化了rSj14 3 3蛋白 ,为研究 14 3 3在血吸虫信号转导中的作用奠定了基础。
- 李德发沈继龙祖莹刘庆中
- 关键词：免疫特性日本血吸虫纯化
- 两种血吸虫病疫苗候选分子在原核细胞的融合表达被引量：13
- 2003年
- 目的 在原核细胞中表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3的融合蛋白。 方法 RT- PCR法从日本血吸虫成虫总 RNA中扩增出 Sj14- 3- 3基因 ,亚克隆至原核表达载体 p GEX- 4T- 1,并转化 E.coli BL2 1 ,IPTG诱导表达 ,Western- blot鉴定表达产物。 结果 扩增产物约为 76 5 bp,重组质粒经 Bam H 和 Xho 双酶切后可得到一与 PCR产物大小相同的 DNA片段 ,经 IPTG诱导后在 5 5 ku附近出现一新增蛋白条带 ,Western- blot结果显示 ,表达产物可被兔抗鼠 14- 3- 3ε多克隆抗体识别。 结论 在原核细胞融合表达 Sj GST和 Sj14- 3- 3成功。
- 祖莹李德发沈继龙
- 关键词：血吸虫疫苗SJ14-3-3
- rSj14-3-3和rSj14-3-3/SjGST对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响被引量：3
- 2003年
- 目的 探讨日本血吸虫信号蛋白 14 - 3- 3基因重组蛋白 (rSj14 - 3- 3)及其与谷胱甘肽S转移酶融合蛋白(rSj14 - 3- 3/SjGST)对宿主肝虫卵肉芽肿形成的影响。 方法 用rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST免疫雌性BALB/c小鼠 ,末次免疫后 5d ,各组小鼠均感染日本血吸虫尾蚴 4 0± 1条 /鼠 ,6周后 ,剖杀 ,取肝组织计数肝表面虫卵结节密度和肝切片上单个虫卵肉芽肿直径大小。结果 免疫组 (14 - 3- 3组和 14 - 3- 3/GST组 )和对照组肝表面虫卵结节数分别为 6 72±1 14、5 89± 1 0 3和 2 1 0 5± 1 2 6 ,前两者比后者分别减少了 6 8 0 8%和 72 0 2 % ;肝肉芽肿平均直径免疫组为 178 12±32 18μm和 14 8 13± 2 9 6 5 μm ,与对照组 2 75 0 0± 38 2 1μm相比分别减少了 35 2 3%和 4 6 13%。结论 重组抗原rSj14 - 3- 3和rSj14 - 3- 3/SjGST对日本血吸虫具有较好的抗病效果。
- 李德发祖莹沈继龙
- 关键词：日本血吸虫虫卵肉芽肿形成谷胱甘肽S转移酶基因重组蛋白
- 日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3对日本血吸虫病的诊断价值被引量：19
- 2003年
- 目的 探讨纯化的日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 3 3(rSj14 3 3)诊断血吸虫病的价值。 方法 利用纯化的rSj14 3 3抗原与成虫抗原 ,间接ELISA法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清。结果 急、慢性血吸虫患者血清rSj14 3 3抗体检出率为 10 0 %和 92 0 % ,与正常人血清未出现交叉反应 ;抗AWA抗体检出率为 98 0 %和 94 0 % ,与正常人有 7 3%的交叉反应。结论 rSj14 3 3为抗原诊断日本血吸虫病显示出高度的敏感性和特异性 ,具有实用价值。
- 刘庆中沈继龙汪学龙
- 关键词：日本血吸虫病成虫抗原
- 日本血吸虫重组抗原rSj14-3-3免疫保护作用的初步研究被引量：7
- 2004年
- 目的 初步探讨重组信号蛋白 14 3 3及 14 3 3与GST融合蛋白抗日本血吸虫尾蚴感染和抗血吸虫病的免疫保护作用。 方法 用rSj14 3 3和rSj14 3 3 /SjGST免疫BALB/c小鼠 ,日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤攻击感染 ,收集实验组与对照组成虫和虫卵 ,计算减虫率和减卵率 ;间接ELISA法测定实验组与对照组小鼠免疫前、后血清中特异性IgG抗体水平的变化 ;显微镜下测量并比较实验组与对照组肝脏切片上单个虫卵肉芽肿大小 ,观察两种重组抗原对小鼠肝脏肉芽肿形成的影响。 结果 上述两种重组抗原在尾蚴攻击感染后的减虫率分别为 3 1.93 %和 3 4.3 9% ;每克肝组织减卵率分别为 5 3 .2 4%和 60 .0 6% ,每对成虫减卵率分别为 3 3 .3 9%和 40 .48% ;免疫前各组血清IgG抗体A值差异无显著性 ,免疫后实验组血清IgG抗体A值明显高于对照组 ;实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿平均直径比对照组分别下降3 5 .2 3 %和 46.13 %。 结论 信号蛋白 14 3 3在抗感染和抗病免疫中具有保护作用 ,复合多价疫苗的免疫保护作用可能优于单价疫苗。
- 李德发祖莹陈月生沈继龙
- 关键词：免疫保护疫苗
- 日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3疫苗免疫保护性的观察被引量：15
- 2003年
- 目的 研究日本血吸虫 (中国大陆株 )重组信号蛋白 14 3 3 (rSj14 3 3 )作为血吸虫病疫苗分子的潜能 ,并探讨rSj14 3 3、rSjGST两种重组蛋白作为疫苗的协同作用及结核杆菌低分子量耐热多肽 (Mtb)激活的γδ T细胞在抗血吸虫病中的作用。 方法 用SDS PAGE、电洗脱和透析的方法制备rSj14 3 3和rSjGST抗原 ,将两种抗原 (分别用福氏佐剂和Mtb为佐剂 )分别免疫BALB/c小鼠后 ,进行尾蚴攻击感染实验。在攻击感染 6wk后 ,剖杀小鼠计算各组的减虫率。 结果 各组的减虫率为rSj14 3 3 +福氏佐剂组 3 2 .2 0 % ,rSj14 3 3 +rSjGST +福氏佐剂组 3 1.10 % ,rSj14 3 3 +Mtb佐剂组 2 7.96% ,rSj14 3 3 +rSjGST +Mtb佐剂组 2 6.0 0 % ,rSjGST +Mtb佐剂组 2 7.10 % ;各组的减卵率分别为 (按以上组序 ) 5 0 .40 %、5 3 .3 0 %、5 1.10 %、5 8.60 %和 5 1.3 0 %。 结论 rSj14 3 3具有一定的抗血吸虫潜能 ,有可能成为抗日本血吸虫疫苗 ,但未见rSj14 3 3和rSjGST的协同作用 ;Mtb激活扩增的γδ T细胞在抗血吸虫免疫中的效果与福氏佐剂产生的免疫作用类似。
- 刘庆中沈继龙
- 关键词：日本血吸虫疫苗免疫保护性
- 弓形虫信号转导蛋白14-3-3基因的克隆与表达被引量：7
- 2003年
- 目的 体外扩增弓形虫RH株信号转导蛋白 14 3 3 (Toxo 14 3 3 )基因编码序列 ,构建原核表达质粒 ,并表达Toxo 14 3 3。 方法 收集、纯化弓形虫RH株速殖子 ,提取RNA ,在设计合成的引物中引入EcoRI和XhoI酶切位点。应用RT PCR扩增Toxo 14 3 3基因片段 ,插入原核表达质粒 pET2 8a中 ,重组子双酶切、PCR和测序鉴定 ,转化大肠杆菌BL2 1并以异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。 结果 从弓形虫RH株RNA中扩增出 80 3bp的Toxo14 3 3基因片段 ,构建重组质粒 pET2 8a/14 3 3 ;IPTG诱导 ,SDS PAGE显示表达产物的大小约 3 0 .7kDa ,Western印迹鉴定为Toxo 14 3 3。 结论 成功地从弓形虫RH株基因组DNA中获取了 14 3 3基因 ,构建了 pET2 8a/Toxo 14 3 3重组质粒 ,并获得高效表达。
- 都建沈继龙汪学龙王维
- 关键词：弓形虫信号转导蛋白克隆
- 抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原及疗效考核价值的初步研究被引量：12
- 2004年
- 目的 探讨抗重组日本血吸虫 14 3 3(rSj14 3 3)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值。方法 制备纯化的抗日本血吸虫 14 3 3的单克隆抗体 ,以纯化的兔抗rSj14 3 3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶联免疫吸附试验 (P M ELISA)法 ,分别对同批治疗前及治疗后 2、4、6、12个月的血吸虫病患者和感染兔血清进行检测 ,并与常规检测抗体的可溶性虫卵抗原 -酶联免疫吸附试验 (SEA ELISA)法比较。结果 P M ELISA法对治疗前血吸虫病患者检测阳性率为 98 2 % ,而检测抗体的SEA ELISA为 95 5 %。P M ELISA法对治愈后 2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为 17 7%、4 1 9%、5 5 %、85 % ,而检测抗体的SEA ELISA法分别为 3 2 %、6 5 %、12 5 %、15 %。结论 该法既有较好的诊断价值 ,又有较好的疗效考核价值。
- 查任远沈继龙汪学龙
- 关键词：抗原SJ14-3-3
- 日本血吸虫DNA疫苗的构建及其保护性免疫被引量：3
- 2004年
- 目的 制备日本血吸虫裸露DNA疫苗 (pBK Sj14 3 3) ,观察其在小鼠抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法 以RT PCR方法扩增Sj14 3 3基因 ,并将其亚克隆入真核表达载体pBK ;提取、纯化重组质粒pBK Sj14 3 3,肌肉注射法接种BALB/c小鼠 ;日本血吸虫尾蚴攻击感染后 ,剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,观察pBK Sj14 3 3对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响。结果 1%琼脂糖凝胶电泳显示 ,RT PCR扩增产物与EcoRⅠ +XhoⅠ双酶切重组质粒得到的插入片段大小相同 ,约为76 5bp ,核苷酸序列测定证实插入片段为Sj14 3 3;免疫注射pBK Sj14 3 3后 ,14 3 3组平均每只小鼠获检成虫数为 2 2 9± 9 6 ,与对照组成虫数 (31 3± 7 3)比较 ,14 3 3组小鼠平均成虫负荷下降了 2 7%。经 5 %氢氧化钾消化后 ,14 3 3组平均每克肝组织虫卵数为 16 6 0 0± 5 90 4 ,每对成虫平均虫卵数为 476 9± 115 6 ,与对照组平均每克肝组织虫卵数 (77875± 4 32 6 )和每对成虫平均虫卵数 (972 3± 2 0 74 )比较 ,减卵率为 79% ,每对成虫减卵率为 5 1%。肝脏虫卵肉芽肿平均直径下降了 2 9%。结论 DNA疫苗pBK Sj14 3 3构建成功 ,且在小鼠抗血吸虫感染中有一定的免疫保护作用 。
- 李德发陈月生祖莹沈继龙
- 关键词：日本血吸虫DNA疫苗保护性免疫
