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国家自然科学基金(81372661)
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张晓东
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张晓东
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2014
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人结直肠癌细胞Drosha基因敲除细胞模型的构建
2014年
目的为研究核酸酶Drosha与结直肠癌的关系,利用腺相关病毒(AAV)介导的染色体同源重组技术,构建Drosha基因敲除的HCT116结直肠癌细胞模型。方法设计引物通过PCR扩增Drosha基因的同源臂,构建Drosha的AAV病毒打靶载体,通过病毒的包装、感染、抗生素新霉素(G418)药物筛选、PCR以及Western blot鉴定获得基因敲除阳性细胞株,通过Cre病毒感染去除抗性基因,最终建立敲除Drosha基因的结直肠癌细胞模型。结果经过两轮打靶,分别将DNA双链上的Drosha基因去除并经Western blot鉴定,获得Drosha-/-阳性的HCT116细胞株。结论通过AAV病毒介导的染色体同源重组技术,成功构建Drosha基因敲除的HCT116细胞系。
李芸侨
李尚泽
宋伟
王任先
张晓东
王琳芳
关键词:
基因敲除
同源重组
结直肠癌
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