重庆市自然科学基金(2006BB5271)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 相关机构：重庆医科大学重庆市肿瘤研究所重庆市肿瘤医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 短发夹RNA靶向抑制环氧化酶-2基因表达对肺癌细胞A_(549)增殖的影响
- 2007年
- 目的评价短发夹 RNA(short hairpin RNA,shRNA)靶向肺癌细胞 A_(549)环氧化酶-2(COX-2)基因表达的抑制作用,并观察对肺癌细胞 A_(549)生长和细胞周期的影响。方法将抑制 COX-2基因的 shRNA DNA 模板插入到真核表达载体 pGenesil-1的 U_6启动子下游,构建靶向抑制 COX-2基因的重组表达载体 pshRNA-COX-2。将试验分为3组:未转染肺癌细胞 A_(549)组、阴性对照 HK 组和pshRNA-COX-2转染组。用脂质体 Lipofectamine^(TM)2000转染肺癌细胞 A_(549)9,逆转录(RT)-PCR 和免疫印迹法(Wb)分别检测 COX-2基因 mRNA 和蛋白表达情况,流式细胞术检测细胞周期,细胞计数检测细胞生长变化。结果与阴性对照组相比,pshRNA-COX-2重组表达载体抑制 COX-2 mRNA 及蛋白表达的抑制率分别为72.2%和48.6%;G_0-G_1,期细胞由63.7%上升为71.0%,S 期细胞由26.5%下降为20.0%;细胞生长明显减慢。结论 pshRNA-COX-2 重组表达载体能显著抑制肺癌细胞 COX-2表达,引起 G_0-G_1期细胞增多,S 期细胞减少,从而抑制肺癌细胞生长。
- 杨义明刘预涂植光甘晓协刘靳波陈亚芹
- 关键词：肺肿瘤基因表达短发夹RNA
- 靶向COX-2基因短发夹RNA重组表达载体的构建及鉴定
- 2007年
- 目的利用RNA干扰技术,以COX-2为靶基因,构建靶向COX-2基因的短发夹RNA(shRNA)重组表达质粒并进行鉴定分析。方法设计、合成1对COX-2编码基因的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,经退火形成互补双链,通过定向克隆至质粒pGenesil-1,构建shRNA真核表达载体。转化JM109大肠杆菌,提取质粒进行酶切鉴定和测序分析;RT-PCR和Western blot检测重组表达质粒对COX-2mRNA和蛋白表达的抑制效果。结果酶切证实目的DNA定向克隆至载体上,测序分析结果与目的序列相同。RT-PCR和Western blot结果显示,与未转染组比较,pshRNA-COX-2重组表达质粒对β-actin基因无明显影响,而对COX-2有明显抑制作用。COX-2mRNA和蛋白表达的抑制率分别为66.9%和50.3%。结论成功构建的靶向干扰COX-2基因重组质粒能够显著抑制COX-2基因表达。
- 杨义明刘预涂植光张钰倩
- 关键词：环氧化酶-2短发夹RNA重组表达载体
- shRNA靶向干扰COX-2促进人肝癌裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨重组干扰质粒pshRNA-COX-2对人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤肿瘤细胞凋亡的促进作用。方法:重组干扰质粒pshRNA-COX-2转染Hep3B细胞并筛选后,将被成功转染的Hep3B细胞种植于裸鼠皮下,测量肿瘤大小,成瘤4周后处死裸鼠,绘制肿瘤生长曲线,RT-PCR和Western blot检测肿瘤组织中COX-2 mRNA和蛋白表达,电镜观察和TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果:与空白组相比,干扰组肿瘤组织中COX-2 mRNA和蛋白表达抑制率分别为48.5%和61.4%。干扰组最终瘤体大小明显小于阴性组和空白组
- 陈光辉涂植光孔飞飞邱欣欣成凤匡文斌李朴刘预
- 关键词：肝癌皮下移植瘤凋亡
- shRNA抑制COX-2基因表达对肝癌细胞HepG_2生长的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:应用RNA干扰技术抑制COX-2基因,观察其对肝癌细胞HepG2生长的影响.方法:构建靶向抑制COX-2基因表达的短发夹双链RNA(shRNA)真核表达载pshRNA-COX-2,转染肝癌细胞HepG2,用RT-PCR和Western Blot分别从mRNA和蛋白水平检测其对COX-2的抑制效应,MTT法检测对HepG2细胞生长的影响.结果:与未转染组相比,pshR-NA-COX-2重组表达质粒抑制了HepG2细胞COX-2mRNA及蛋白表达,抑制率分别为69.9%和50.3%;并可抑制HepG2细胞生长,72h后有统计学差异(P<0.05).结论:pshRNA-COX-2重组表达载体能显著抑制肝癌细胞COX-2基因表达,从而抑制肿瘤细胞增殖.
- 杨义明刘预涂植光陈亚芹刘靳波
- 关键词：RNA干扰重组表达载体环氧化酶-2肝肿瘤
- 短发夹RNA抑制肝癌细胞HepG_2 COX-2基因表达的探讨被引量：4
- 2007年
- 目的:研究shRNA对肝癌细胞株HepG2中COX-2基因表达的抑制作用,同时检测对细胞周期和细胞生长的影响。方法:设计、合成一对环氧化酶-2(COX-2)基因编码的反向重复序列,中间间隔9个核苷酸序列,定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建抑制COX-2基因的短发夹RNA(short hairpin RNA shRNA)的重组表达质粒pshRNA-COX-2,用脂质体LipofectamineTM2000转染肝癌细胞HepG2,经RT-PCR和Westernblot分别检测pshRNA-COX-2重组表达质粒对COX-2mRNA和蛋白抑制效应,流式细胞仪检测细胞周期、细胞计数检测细胞生长变化。结果:pshRNA-COX-2重组表达质粒能够抑制COX-2基因表达。与未转染肝癌细胞HepG2相比,pshRNA-COX-2重组表达质粒转染肝癌细胞后,COX-2mRNA和蛋白表达明显降低,抑制率分别为69.9%和50.3%;G0-G1期细胞由55.4%上升为77.9%,S期细胞由31.1%下降为16.2%;细胞生长明显减慢。结论:构建的pshRNA-COX-2重组表达载体能够显著抑制COX-2基因表达;引起G0-G1期细胞增多,S期细胞减少,从而阻止肝癌细胞生长。
- 杨义明刘预涂植光陈亚芹刘靳波
- 关键词：短发夹RNA环氧化酶-2重组表达质粒细胞周期
- shRNA靶向干扰COX-2抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤及其血管生成被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨重组干扰质粒pshRNA-COX-2对人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成的抑制作用。方法:重组干扰质粒pshRNA-COX-2转染Hep3B细胞并筛选后,RT-PCR和Western blot检测COX-2mRNA和蛋白表达,RT-PCR检测VEGFmRNA表达。将被成功转染的Hep3B细胞种植于裸鼠皮下,测量肿瘤大小,4周后处死裸鼠,免疫组织化学法检测肿瘤组织中COX-2蛋白表达和肿瘤微血管密度(MVD)。结果:与未转染细胞相比,干扰组COX-2mRNA和蛋白表达抑制率分别为65.3%和52.8%(P<0.05),干扰组VEGFmRNA表达抑制率为56.5%(P<0.05)。干扰组瘤体大小明显小于阴性组和空白组(P<0.01)。干扰组COX-2得分和MVD均明显低于阴性组和空白组(P<0.01)。结论:pshRNA-COX-2通过抑制COX-2表达明显抑制人肝癌细胞Hep3B裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤血管生成。
- 陈光辉刘预孔飞飞邱欣欣成凤匡文斌李朴涂植光
- 关键词：肝癌皮下移植瘤血管生成
