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胡萝卜抗坏血酸过氧化物酶基因的分离及其对非生物胁迫的响应被引量：8: 2016年; [目的]抗坏血酸过氧化物酶(APX)利用抗坏血酸作为电子供体,清除植物中的过氧化物,在植物应对非生物胁迫中起重要作用。本文目的是研究胡萝卜Dc APX基因在抵御逆境胁迫过程中的响应情况。[方法]以胡萝卜‘黑田五寸’为研究材料,克隆获得胡萝卜Dc APX基因(Gen Bank登录号为KR364573),对该基因进行序列分析,并研究其主要非生物胁迫(高温、低温、干旱和盐胁迫)下的基因表达情况。[结果]序列分析表明,胡萝卜Dc APX基因全长753个碱基,编码250个氨基酸,预估其蛋白质相对分子质量为27.76×103,p I值5.65。进化分析表明,胡萝卜Dc APX在进化关系上与同属伞形科的短果茴芹同源性最高。空间结构分析表明,胡萝卜Dc APX的氨基酸二级结构由38.40%的α-螺旋、10.40%的延伸主链和51.20%的随机卷曲构成。胡萝卜Dc APX的氨基酸三级结构由10个α-螺旋和4个β-折叠构成。实时荧光定量PCR结果显示,胡萝卜‘黑田五寸’中Dc APX基因表达具有组织特异性,在叶中表达量最高。[结论]胡萝卜中Dc APX基因可以响应多种非生物逆境胁迫,在胡萝卜非生物逆境胁迫调控过程中起着重要作用。; 张馨月王广龙黄蔚王枫倪桢燚熊爱生; 关键词：抗坏血酸过氧化物酶基因克隆非生物胁迫胡萝卜

大蒜生物钟基因AsRVE1和AsRVE2及其在渗透胁迫下的表达分析被引量：8: 2021年; 为了解大蒜生物钟相关基因REVEILLEs(RVEs)的序列特征及其在渗透胁迫下的功能,从大蒜中克隆得到AsRVE1和AsRVE2基因,并对其在盐胁迫和模拟干旱胁迫下的表达特征进行了分析。序列分析表明,AsRVE1和AsRVE2分别含有1050和975 bp的开放阅读框,编码349和324个氨基酸。在进化关系上,大蒜AsRVE和AsRVE2与玉米ZmRVE2和凤梨AcRVE2的较近。不同植物RVE氨基酸序列同源性较低,但N端保守结构域序列一致性较高。AsRVE1和AsRVE2均能响应昼夜节律的变化,在大蒜不同组织中均能表达,在不同组织间AsRVE1的表达差异不大,AsRVE2在根中表达相对较高。干旱胁迫和盐胁迫在不同组织内均诱导了AsRVE1和AsRVE2的表达。结果表明,AsRVE1和AsRVE2可能参与了大蒜植株抵御盐胁迫和干旱胁迫的过程,可进一步鉴定其生物学功能。; 卞诗村陆雅妮许吴俊陈伯清王广龙熊爱生; 关键词：大蒜生物钟渗透胁迫

芹菜衔接蛋白基因AgMu2的克隆与表达分析被引量：4: 2014年; 为研究芹菜(Apium graveolens)衔接蛋白(Adaptor protein)复合体AP-2中的μ2亚基的功能,以‘六合黄心芹’和‘美国西芹’为试验材料,采用RT-PCR方法获得AgMu2基因。序列分析表明:AP-2复合体AgMu2基因全长1 317个核苷酸,编码438个氨基酸。推测其蛋白质分子量为49.30 kD,pI为9.28。进化分析表明,来自‘美国西芹’的AgMu2亚基在植物间进化具有高度保守性,与葡萄Mu2进化关系最为接近。空间结构分析表明,从芹菜中分离的AgMu2亚基由5个螺旋和26个延伸主链构成,两个平行的β延伸主链构成的平面区域可能含有识别YXXΦ结构的位点。实时定量荧光PCR显示,芹菜中AgMu2基因主要在叶中表达,具有明显的组织特异性,同时该基因可响应低温、高温、干旱和盐胁迫等多种逆境信号,2个品种间该基因响应的时间和强度也具有显著的差异,显示了该基因功能的多样性。; 王广龙王枫徐志胜蒋倩谭国飞熊爱生; 关键词：芹菜克隆实时定量PCR

室温贮藏过程中胡萝卜口感及部分营养成分含量变化被引量：7: 2014年; 胡萝卜（Daucus carota var．sativaDC．）别名红萝卜，为2年生草本植物，原产于中亚、西亚和非洲北部，于13世纪末传人中国；其根部营养物质丰富，特别是胡萝卜素及维生素等含量较高。胡萝卜在中国南北方栽种广泛，主要种植在长江以北地区，特别是高寒地区，是该地区主要冬贮蔬菜之一。中国是胡萝卜栽种和产量大国，栽种面积占全球栽种面积的40％，产量占全球总产量的30％左右。; 谭国飞王枫马静田畅陈逸云熊爱生; 关键词：胡萝卜室温贮藏口感 VC 可溶性糖

芹菜过敏原蛋白Api g 1基因的克隆与表达分析被引量：7: 2013年; 以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别编码159个氨基酸,二者有2个核苷酸位点的差异,编码的氨基酸有1个位点差异。‘津南实芹’和‘美国西芹’的过敏原蛋白Api g 1与胡萝卜、欧芹等植物的过敏原蛋白相似度较高,在保守区域有7个甘氨酸残基,空间结构上由3个螺旋和7个折叠组成。实时定量PCR表达分析显示,该基因在主根中表达较高,茎其次,其他部位表达较弱,具有明显的组织特异性。; 李梦瑶王枫侯喜林蒋倩王镇马静熊爱生; 关键词：芹菜 API 克隆实时定量PCR 基因表达

芹菜热激转录因子基因AgHSFB2的克隆及不同温度处理下的表达响应被引量：8: 2015年; [目的]热激转录因子HSF(heat shock transcription factor)在植物遭遇高温胁迫时起关键的调节作用,研究芹菜热激转录因子基因及相关蛋白的结构、功能对探究芹菜耐热机制、培育耐热新品种有重要作用。[方法]以‘六合黄心芹’‘津南实芹’和美国西芹‘文图拉’为试验材料,分离并克隆出Ag HSFB2基因,分析相关序列并采用实时定量荧光PCR技术检测该基因在不同温度(4、38和42℃)下的表达响应情况。[结果]研究发现该基因含有1个918 bp的开放阅读框,编码305个氨基酸。推测其蛋白质相对分子质量为34 048,理论等电点p I值为5.09。芹菜Ag HSFB2与拟南芥中HSF蛋白进行比对构建进化树,发现Ag HSFB2与拟南芥HSFB2a和HSFB2b进化距离最近,该基因属于HSFB2亚族。芹菜Ag HSFB2与茄科的番茄、马铃薯相应蛋白的亲缘关系较近。Ag HSFB2蛋白的高级结构主要由3个α螺旋和4个β折叠组成。Ag HSFB2基因主要在芹菜的叶中表达,具有组织、品种特异性,同时对4、38和42℃等多种温度信号有明显响应。该基因对温度胁迫的响应时间和强度有品种的差异:4和38℃处理下‘文图拉’均在2 h有明显上调表达;42℃处理下‘津南实芹’和‘文图拉’均在1 h有明显上调表达。[结论]高温胁迫下Ag HSFB2基因可诱导下游热激蛋白大量表达,帮助植物抵御高温胁迫所带来的伤害。; 李岩徐志胜谭国飞贾晓玲王枫熊爱生; 关键词：芹菜克隆温度处理

大蒜谷胱甘肽硫转移酶基因AsGST的克隆及其对盐胁迫的响应被引量：11: 2019年; 为了解大蒜GST基因及其编码的蛋白质的结构特征,分析GST基因在不同组织及盐胁迫条件下的表达特性,采用RT-PCR方法克隆得到大蒜苍山四六瓣GST基因,采用BLAST、DNAMAN、ProtParam、MEGA5、Swiss-Model等生物信息工具分析其序列特征,利用实时荧光定量PCR方法,分析AsGST基因在大蒜根、鳞茎和叶片中的表达差异及其对盐胁迫的响应情况。结果表明,大蒜AsGST基因全长663 bp,编码220个氨基酸,推测蛋白质分子质量为25.58 kDa,理论等电点为6.55,属于tau类GST家族。植物GST的序列相似性较低,但在结构上相对保守。在蛋白的N端含有谷胱甘肽特异结合位点(G位点),C端含有可变性较大的疏水底物结合位点(H位点),在进化关系上AsGST与茄科作物较近。空间结构分析表明,大蒜GST的三级结构由3个β-折叠和11个α-螺旋构成。实时荧光定量PCR显示,苍山四六瓣中GST基因在根中的表达量最高,其次是叶,在鳞茎中的表达量较低,具有明显的组织特异性。盐胁迫处理4 h后,各组织内AsGST基因的表达量均升至最高,说明该基因可响应盐胁迫逆境信号。本研究结果为进一步研究大蒜GST基因的功能奠定了一定的理论基础。; 梁志乐尚珂含王立辉周瑾王广龙熊爱生; 关键词：大蒜盐胁迫基因克隆

番茄2个ERF-B1亚族转录因子基因的克隆及其对生物和非生物胁迫响应被引量：11: 2019年; 为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669 bp的开放阅读框,编码225和222个氨基酸,各含有1个保守的AP2结构域,属于亲水性蛋白。进化分析表明,这2个ERF转录因子均属于AP2/ERF家族中ERF亚族的B1组。SlERF83和SlERF109三级结构都含有1个α-螺旋和3个β-折叠。酵母单杂交及β-半乳糖苷酶活性测定结果证明SlERF83转录因子可以与GCC-box结合。番茄2个ERF蛋白启动子含有多种逆境相关的顺式作用元件。采用荧光定量PCR检测SlERF83和SlERF109在非生物和生物胁迫下的表达,结果表明,高盐和干旱胁迫下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制;水杨酸处理能够诱导SlERF83和SlERF109基因的表达;茉莉酸甲酯处理下SlERF83表达水平提高,SlERF109表达量降低;番茄黄化曲叶病毒侵染下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制。SlERF83和SlERF109转录因子可能参与了番茄对生物及非生物胁迫的响应过程。本研究结果为进一步深入开展ERF转录因子调控番茄抗逆分子机制研究提供了一定的理论依据。; 王雅慧李彤黄莹刘洁霞王枫熊爱生; 关键词：番茄转录因子酵母单杂交

芹菜核酸内切酶CELI基因的克隆及其表达分析被引量：5: 2014年; CELI是一种单链特异性核酸酶(singlestrand specific nuclease),主要应用于清除DNA或RNA双链分子存在的单链。测定不同品种芹菜中CELI基因非生物胁迫诱导表达情况,以进一步研究芹菜中核酸内切酶的功能及应用。以芹菜(Apium graveolens L.)为试验材料,分别从‘六合黄心芹’和‘文图拉’中克隆出核酸内切酶CELI基因序列。通过生物信息学的方法对所得序列进行分析,通过实时定量PCR方法进行该基因在芹菜中表达分析。结果表明:来源于2种芹菜的CELI基因核苷酸序列高度保守,基因全长均为891 bp,分别编码296个氨基酸。2种芹菜的CELI基因核苷酸序列之间共有20个位点不同,导致3个氨基酸位点发生改变。2种芹菜该酶的蛋白质相对分子质量分别为33.88×103和33.92×103,pI值分别为6.51和6.37。进化分析显示,芹菜中的CELI与同属于伞形科的欧芹进化关系最近,伞形科CELI进化上更接近于菊科。实时定量PCR分析表明,芹菜中CELI基因在根、茎、叶、花不同组织及不同品种之间的表达量有明显差异。对2种芹菜分别进行4℃、38℃、0.2 mol·L-1NaCl、200 g·L-1PEG处理2 h,表达分析显示,4种处理条件下芹菜中CELI基因表达量有明显差异,其中PEG处理表达量呈明显下降趋势。结论:通过逆境处理后的基因表达分析发现,芹菜中CELI基因对非生物胁迫有响应,‘六合黄心芹’中CELI基因的诱导表达量大于‘文图拉’。; 田畅王枫蒋倩徐馨琰刘君熊爱生; 关键词：芹菜核酸内切酶实时定量PCR 基因克隆

芹菜中6-磷酸甘露糖还原酶基因的克隆、进化和表达分析: 2013年; 以2个芹菜品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试材,采用RT-PCR技术分别获得6-磷酸甘露糖还原酶(M6PR)cDNA序列。序列分析表明:来源于2个芹菜品种的6-磷酸甘露糖还原酶基因核苷酸序列全长均为930 bp,编码309个氨基酸;预测其蛋白质相对分子质量为35×103,pI值为6.38。空间结构分析显示:M6PR蛋白由11个α-螺旋和13条β-延伸主链组成,中间形成1个疏水穴;催化四分体(Asp、Tyr、Lys和His)分布于疏水穴内部,具有催化活性。进化分析显示:芹菜M6PR与卷柏、小立碗藓、云杉等远古物种的醛-酮还原酶(AKR)相似性较高。实时定量PCR表达分析表明:M6PR基因主要在芹菜的茎中表达,具有明显的组织特异性。; 蒋倩王枫侯喜林马静李梦瑶熊爱生; 关键词：芹菜基因克隆进化实时定量PCR 基因表达

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教育部“新世纪优秀人才支持计划”(NCET-11-0670)

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