河南省科技攻关计划(0222031300)
- 作品数：12 被引量：74H指数：6
- 相关作者：张钦宪朱晓燕刘书漫岳保红孟青更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州大学第一附属医院郑州大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”河南省医学科技创新人才工程项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 核干细胞因子特异性短发夹状RNA对HL-60细胞分化抗原和生物学性质的影响被引量：8
- 2006年
- 目的研究核干细胞因子(nuc leostem in,NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞分化抗原及生物学性质的影响,探讨NS的生物学功能和与急性白血病的关系以及用于基因治疗的可能性。方法特异性转染试剂和合成的NS短发夹状RNA(NS-shRNA)体外直接转染HL-60细胞,采用RT-PCR判断基因阻断效果,MTT法测定转染后细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM)测定细胞分化抗原,形态学观察细胞形状和生长状态,血细胞分析仪测定细胞大小、粒度。结果合成的2条NS-shRNA均能明显阻断NS基因表达,抑制率分别为37.82%和71.88%;NS-shRNA能显著抑制HL-60细胞的增殖并存在时间和浓度依赖性,以48 h和10 nmol/L浓度最佳。转染后:分化抗原CD11b、CD33、CD14、CD64、HLA-DR增高,CD38降低,显示有向粒系继续成熟和向单核系重新分化趋势;细胞聚团性减弱,碎片增多,一部分细胞形态变成梭形和长尾形,染色后细胞核紧密,凹陷,髓过氧化物酶(MPO)和α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)活性增强;大小和粒度分析小体积细胞和核碎裂细胞增多。结论NS-shRNA通过阻断NS基因表达,对HL-60细胞有抑制增殖和促分化作用,改变了细胞的生物学性质,使细胞恶性程度有所减弱,并有可能诱发凋亡,在白血病的基因中具有潜在的临床价值。
- 岳保红朱晓燕张功员孙玲赵小强王清霞刘帅张秋堂张钦宪
- 关键词：核干细胞因子短发夹状RNA分化抗原生物学性质分化
- siRNA对胃癌细胞系BGC-823生长抑素基因表达的抑制效应被引量：2
- 2006年
- 目的：研究siRNA对胃癌细胞BGC-823生长抑素(SOM)分泌的抑制效应。方法：设计4条针对SOM基因不同位点的寡核苷酸序列,应用RiboMAXT7体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823,经RT- PCR、免疫细胞化学法检测SOM mRNA和蛋白的表达水平,筛选抑制效果最佳的序列,MTT法检测BGC-823细胞的增殖变化。结果：转染后24、48及72h,SOM基因的表达被抑制,抑制效率有差异,并呈浓度及时间依赖性。结论：体外合成siRNA抑制胃癌细胞系SOM基因的表达,增强了细胞的增殖能力。
- 朱晓燕张艳张钦宪
- 关键词：生长抑素RNA干扰
- T7启动子介导体外构建Nucleostem in特异性短发夹状干扰RNA被引量：4
- 2006年
- 目的体外构建合成针对Nuc leostem in(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNA i)为手段的白血病基因治疗可行性。方法从Nuc leostem in基因的三个变异体cDNA共同序列中筛选出2个3′端为AA的21个碱基片段作为shRNA合成的对应序列,9个碱基的5′-UCUCUUGAA-3′作为Loop环。以23个碱基的5-′GGATC-CTAATACGACTCACTATA-3′作为T7启动子(T7 Promoter)序列,构建shRNA的体外合成双链DNA模板,一条链5′端无AA,顺序为启动子、shRNA正义信息链、Loop环、shRNA反义信息链,共70个碱基;另一条是该链的互补链,5′端带有AA,共72个碱基。在T7 RNA聚合酶(T7 RNA polym erase)作用下合成shRNA,纯化后通过凝胶电泳比较灰度值确定shRNA浓度;shRNA作用于HL-60细胞,通过观察细胞形态变化和NS-mRNA抑制率验证干扰效果。结果体外合成的两条shRNA电泳无降解和弥散现象,浓度分别为5.24μmol.L-1和3.35μmol.L-1;干扰HL-60细胞48 h后,细胞密度和聚集程度下降,细胞之间大小相差悬殊,经shRNA-NS-2作用的HL-60细胞一部分由圆形变成了梭形并有明显的伪足;与对照组相比NS-mRNA抑制率分别达到37.82%和71.88%。结论体外成功构建和合成了两条针对Nu-c leostem in基因的shRNA,且抑制该基因表达的作用明显,shRNA-NS-2使HL-60细胞形态发生了改变。所合成的shR-NA-NS-2可作为进一步研究该基因和探索白血病的基因治疗的工具。
- 岳保红朱晓燕孙玲赵小强陈艳丽王清霞刘帅张钦宪
- 关键词：T7启动子核干细胞因子体外构建DNA模板
- siRNA对SOM基因表达的抑制研究
- 2009年
- 目的研究siRNA对生长抑素SOM基因表达的抑制作用。方法根据SOM全长cDNA序列设计和合成RNA干扰的靶序列,应用RiboMAXT7体外转录合成SiRNA,并转染胃癌细胞系SGC-7901,经RT-PCR,Western blot检测SOM mRNA及蛋白质的表达水平。结果siRNA可以特异性抑制SOM基因的表达。结论通过体外合成siRNA可以特异性抑制SOM基因的表达,为筛选抑制SOM基因表达的有效序列研究奠定了基础。
- 朱晓燕岳保红张钦宪
- 关键词：RNA干扰
- siRNA对SGC7901/VCR细胞mdr1基因沉默效果的影响因素分析被引量：6
- 2006年
- 目的分析siRNA沉默人胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1基因效果的相关因素。方法设计并体外转录合成4条靶向mdr1的siRNA(mdr1si326、mdr1si1513、mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RTPCR和免疫印迹检测mdr1mRNA和Pgp的表达、流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性,综合这4方面结果评价4条siRNA的沉默效果情况;用分子生物学软分析siRNA沉默效果的影响因素。结果沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列编码Pgp的跨膜区而且自身无茎和袢;沉默效果较差的mdr1si3071和最差的mdr1si1513靶序列编码Pgp的胞内区,前者自身成茎和成袢。沉默效果最好的mdr1si326和较好的mdr1si2631靶序列在靶位点和靶位点外间有较少的碱基配对和氢键。siRNA的沉默效果与siRNA3’5’端3个碱基中的A/U数量、N1和N19、GC含量间无规律可循。结论siRNA沉默SGC7901/VCR细胞mdr1的效果与靶序列的结构关系密切。
- 高福莲朱晓燕王峰吴景兰张钦宪
- 关键词：小分子干扰RNAMDR1基因SGC7901/VCR细胞SIRNA设计
- B7-H1及其受体PD-1在胃癌组织中的表达与意义被引量：22
- 2008年
- 目的探讨B7-H1和PD-1信号通路与胃癌发生的关系。方法利用免疫组化技术和ANAE染色技术检测胃组织中B7-H1和PD-1的原位表达及肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）浸润情况，利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测胃癌组织中B7-H1和PD-1 mRNA的表达，利用Western blot技术检测B7-H1蛋白的表达。结果B7-H1和PD-1在胃癌组织中表达升高，阳性率分别为64．4％和43．8％，而在正常胃组织中不表达。胃癌组织中，B7-H1表达与TIL浸润负相关。B7-H1表达与胃癌的浸润深度、周围淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关，而PD-1与其无关。结论胃癌组织中B7-H1和PD-1表达升高，B7-H1／PD-1信号通路可能抑制抗肿瘤免疫。B7-H1的表达与胃癌的病程有关，有可能作为判断胃癌预后的指标和胃癌治疗的靶点。
- 刘书漫孟青张钦宪王盛典刘占举张谢夫
- 关键词：胃肿瘤B7-H1PD-1
- siRNA抑制SOM基因表达的有效序列筛选被引量：1
- 2006年
- 目的研究siRNA对胃癌细胞BGC-823生长抑素(SOM)分泌的抑制效应。方法设计2条针对SOM基因不同位点的寡核苷酸序列,应用RiboMAXT7体外转录合成siRNA并转染胃癌细胞系BGC-823,经RT-PCR,免疫细胞化学法检测SOM mRNA和蛋白的表达水平,筛选抑制效果最佳的序列。结果转染后24 h、48 h及72 h,SOM基因的表达被抑制,抑制效率有差异。结论体外合成siRNA可以抑制SOM基因的表达,抑制效率呈现浓度及时间依赖性。
- 朱晓燕刘书漫张钦宪
- 关键词：生长抑素RNA干扰胃癌细胞系
- 小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药被引量：4
- 2006年
- 目的研究小分子干扰RNA(siRNA)逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901/VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列,设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA(mdr1si2631和mdr1si3071),转染SGC7901/VCR细胞,用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达,免疫组织化学检测P-gp的表达,流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积,MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901/VCR细胞48 h后,mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降,细胞内阿霉素积累量增加,对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79.59%及59.98%。结论siRNA可逆转SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药。
- 高福莲刘书漫吴景兰张钦宪
- 关键词：小分子干扰RNAMDR1基因SGC7901/VCR细胞多药耐药逆转录聚合酶链反应噻唑蓝法
- 共刺激分子B7-H1在胃癌中表达上调被引量：7
- 2008年
- 目的了解胃癌患者胃黏膜组织中共刺激分子B7-H1的表达情况及其与肿瘤转移和预后的关系。方法应用流式细胞技术、免疫化学染色、免疫荧光染色与Western blot检测胃癌细胞系SGC-7901与新鲜切除的胃癌组织、癌旁组织及其远端正常胃黏膜组织中B7-H1的表达,并对相关数据进行相应的统计学分析,确定B7-H1表达水平与患者临床病理指标的关系。结果SGC-7901细胞中有B7-H1蛋白表达,主要分布在细胞膜,细胞质中少量;胃癌组织中B7-H1阳性表达率为(13/21)62%,癌旁组织中为(7/21)33%,而正常胃黏膜组织中没有B7-H1表达。统计分析显示,胃癌组织中B7-H1表达与肿瘤的浸润深度、周围淋巴结转移、远处转移及pTNM分期有关(P<0.05)。结论B7-H1分子可作为胃癌早期诊断与预后判断的新指标。
- 刘书漫李倩如张娓王一菱孟青张钦宪刘占举
- 关键词：胃癌B7-H1预后
- 不同胃癌细胞系中B7-H1分子的表达水平及定位被引量：3
- 2008年
- 目的通过检测胃癌细胞系SGC7901/VCR、SGC7901和BGC-823,以及永生化胃上皮细胞系GES中B7-H1的表达,探讨B7-H1与胃癌的发生及多药耐药(MDR)的关系。方法上述细胞系培养于含10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中,利用RT-PCR技术、细胞免疫化学染色以及细胞免疫荧光染色技术与流式细胞术检测4种细胞系中B7-H1 mRNA与B7-H1蛋白的表达情况,并比较其在4种细胞系中的表达强度。结果B7-H1 mRNA在4种细胞系中均有表达,表达强度按照GES-1、BGC-823、SGC-7901、SGC-7901/VCR的顺序递增;细胞免疫化学染色与免疫荧光染色表明,B7-H1蛋白主要表达在上述细胞的细胞膜和少量细胞浆中,结合流式细胞术检测进一步证实,B7-H1蛋白在4种细胞系中的表达结果与mRNA的表达一致。结论B7-H1表达在胃上皮细胞上,可能通过抑制机体免疫反应,促进胃癌细胞生长及MDR基因表达。
- 刘书漫孟青王盛典刘占举张钦宪
- 关键词：多药耐药逆转录-聚合酶链反应胃癌细胞系
