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北京市教委科技发展计划(KM200810025013)

作品数：4 被引量：5H指数：1
相关作者：赵文明王炜马静李慎涛刘振龙更多>>
相关机构：首都医科大学更多>>
发文基金：北京市教委科技发展计划国家自然科学基金北京市优秀人才培养资助更多>>
相关领域：医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 2篇生物学
  • 2篇医药卫生

主题

  • 4篇热休克
  • 4篇骨保护素
  • 3篇蛋白
  • 3篇融合蛋白
  • 3篇热休克蛋白
  • 2篇热休克蛋白7...
  • 2篇人骨
  • 2篇人骨保护素
  • 2篇OPG
  • 1篇原核表达
  • 1篇体外
  • 1篇体外功能
  • 1篇热休克蛋白6...
  • 1篇重组蛋白
  • 1篇昆虫细胞
  • 1篇活性
  • 1篇活性分析
  • 1篇活性鉴定
  • 1篇基因
  • 1篇基因表达

机构

  • 4篇首都医科大学

作者

  • 4篇赵文明
  • 3篇刘振龙
  • 3篇李慎涛
  • 3篇马静
  • 3篇王炜
  • 2篇张月
  • 2篇刘舒
  • 2篇张权庚
  • 1篇余丹
  • 1篇曾津津
  • 1篇刘姗
  • 1篇曾牧

传媒

  • 2篇中国生物工程...
  • 1篇中国临床药理...
  • 1篇中国组织工程...

年份

  • 3篇2009
  • 1篇2008
共 4 条 记 录，以下是 1-4
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排序方式：
OPG-HSP65重组蛋白的原核表达及其生物学活性研究被引量：1
2009年
PCR扩增OPG-HSP65基因,构建原核重组表达载体pET-28a-OPG-HSP65,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达产生包涵体形式的目的蛋白。对重组蛋白进行Western blot检测表明,重组蛋白能与抗His-Tag单克隆抗体及鼠抗人OPG单克隆抗体特异性结合。对重组蛋白进行尿素洗涤纯化,进而透析、复性。经破骨细胞生长抑制实验和抑炎实验表明,重组蛋白能减少破骨细胞生成及减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应。
张月刘舒马静李慎涛王炜张权庚赵文明
关键词：骨保护素热休克蛋白65重组蛋白
人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白在昆虫细胞中的表达和活性分析
2009年
目的:利用BaculoDirect杆状病毒表达系统融合表达人OPG功能片段p22-194和分枝杆菌HSP70p111-125基因,并鉴定重组蛋白及其生物学活性。方法:将编码人OPG功能片段和分枝杆菌HSP70功能片段基因克隆至杆状病毒转座载体,将重组转座载体与BaculoDirectTM Linear DNA进行LR重组连接反应,构建出重组杆状病毒DNA,转染Sf9昆虫细胞,获得重组病毒。在Sf9细胞中进行表达,并对表达产物进行SDS-PAGE电泳、Western blotting分析,用Ni柱纯化。采用破骨细胞生成抑制试验和抑炎试验鉴定表达产物的生物学活性。结果:重组病毒在感染昆虫细胞后48h开始出现一相对分子质量为28kDa大小的特异条带,感染后72～96h蛋白量达到高峰。破骨细胞生成抑制实验及抑炎试验结果显示,重组蛋白能明显抑制破骨细胞的生长和分化,同时亦具有抑制炎症反应的作用。结论:利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达OPG-HSP70融合蛋白,该融合蛋白具有抑制破骨细胞生成和抑制炎症反应生物学活性。
刘舒张权庚张月马静刘振龙赵文明
关键词：人骨保护素热休克蛋白70昆虫细胞基因表达
OPG-HSP70融合蛋白对CIA大鼠的保护性作用
2009年
目的:研究人骨保护素(OPG)-分枝杆菌热休克蛋白70(HSP70)融合蛋白对类风湿关节炎动物模型——胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠的保护性作用。方法:将OPG-HSP70重组基因菌株诱导表达,收集蛋白并鉴定,大量提取,纯化,复性;实验大鼠分为OPG-HSP70组、OPG组、HSP70组、模型组和正常对照组,CIA大鼠模型制备后分别给予相应处理,观察对大鼠关节病变的影响。结果:与模型组相比,OPG-HSP70组关节炎指数明显降低(P<0.05);关节病理切片显示关节滑膜无明显增生;骨密度值增高(P<0.05)。结论:OPG-HSP70融合蛋白具有减轻CIA大鼠关节病变的作用。
刘姗余丹曾津津李慎涛王炜刘振龙赵文明
关键词：骨保护素热休克蛋白融合蛋白
人骨保护素-分枝杆菌热休克蛋白70融合蛋白的克隆与表达及其活性鉴定被引量：4
2008年
目的:为解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题,拟克隆人骨保护素功能区与分枝杆菌热休克蛋白70肽段融合基因,进一步观察其在大肠杆菌中的表达并鉴定活性。方法:实验于2006-05/2007-09在首都医科大学免疫学系实验室完成。采用反转录-聚合酶链反应技术从人骨肉瘤细胞系MG63总RNA中扩增骨保护素成熟肽段编码区基因,构建pGEM-TEasy-骨保护素重组质粒。以此为模板,聚合酶链反应扩增骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA,构建重组表达载体pET-28a-骨保护素-热休克蛋白70,将其转化E.coli.BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷诱导后收集菌体蛋白,以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白免疫印迹鉴定该融合蛋白的表达,以破骨细胞生长抑制实验及抑炎实验检测该融合蛋白的生物学活性。结果:①实验最终获得人骨保护素全长基因片段,人骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA片段已被正确插入到pET-28a载体中,转化菌株可表达人骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白。②十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示约在Mr22000处有蛋白的超表达,而未诱导菌株未发现有此条带。③蛋白免疫印迹检测表明,融合蛋白能与抗人骨保护素单克隆抗体特异性结合。④破骨细胞生长抑制实验表明,该融合蛋白能够减少破骨细胞的生成数量,具有体外抑制骨破坏的生物活性。⑤抑炎实验表明,融合蛋白具有显著减轻迟发型超敏反应小鼠模型炎症反应程度的作用,说明融合蛋白中热休克蛋白70具有抑制炎症的生物学活性。结论:在E.coli.BL21(DE3)中表达了骨保护素-热休克蛋白70融合蛋白,体外功能实验证实该融合蛋白具有一定的生物学活性。
马静王炜赵文明李慎涛曾牧刘振龙
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