公共文化服务平台

共 4 条记录，以下是 1-4

全选清除导出

排序方式：

转基因螺旋藻的光生物反应器培养及鉴定被引量：1: 2007年; 以本实验室构建的转胸腺素基因螺旋藻为藻种，利用中科院过程工程研究所研制的PhR-L20C光生物反应器，根据该反应器的各项性能指标和参数条件，采用本实验室优化过的培养条件，对转化藻进行高密度培养，初始pH值约为9.0，光照强度平均约为10000Lx，培养温度28-30℃，一个培养收获周期为10d，平均生长速率为0.3OD560·d，10d后藻细胞OD560达3.0，最终藻细胞密度可达到1.3g·L。（干重）；高密度培养后的转化藻经PCR鉴定，目的基因能够稳定地整合在螺旋藻染色体上，经Western-blot证明外源基因在螺旋藻中获得高效表达，且在光生物反应器中经过30d的无抗生素G418的高密度培养后，外源基因能够稳定的遗传表达。; 文磊施泓徐虹章军; 关键词：螺旋藻转基因光生物反应器

转胸腺素基因螺旋藻的表达及免疫增强活性研究被引量：4: 2005年; 胸腺素α_1(Tα_1)是具有免疫增强作用的28肽,通过基因工程技术构建获得了转Tα_1)基因螺旋藻,分别得到了1～4个串联目的基因的表达株,ELISA和HPLC检测结果表明：最高表达量可达藻细胞可溶性蛋白的7％,通过饲喂鳗鱼苗试验表明能有效提高鳗鱼苗体内的胸腺素含量,增强鳗鱼苗的免疫力。免疫增强蓝藻作为鱼类饲料添加剂适口性好,每公斤饲料适宜添加量为0．5～1．0 g,可望成为水产养殖的新型免疫增强饵料藻。; 章军徐虹周克夫刘仁海朱小明; 关键词：螺旋藻转基因胸腺素免疫增强

一种新型广谱的原核型分泌表达载体的建立及人表皮生长因子的表达被引量：1: 2007年; 通过Cyanobase藻类学数据库查询,从集胞藻6803转译后加工过程中的某些蛋白的分泌信号序列得到了可以用于分泌型表达的信号序列,进一步通过SignalP3.0Server分析软件预验证,从集胞藻6803得到4种不同蛋白的信号序列A、B、C、D,将这些信号序列插入pET-His-EGF表达载体hegf基因上游,得到了带有分泌型信号的pS-X系列分泌型表达载体,人表皮生长因子（hEGF）在其中的pS-A载体中实现了分泌型表达,hEGF分泌到周质空间的相对表达量约为1%,在其它3个载体中未见表达。获得的pS-A分泌型表达载体是一种新型分泌型表达载体,它利用蓝藻信号序列作为分泌表达的信号肽,实现了hEGF多肽在大肠杆菌中分泌表达,通过融合白亚细胞定位法处理得到的hEGF多肽在胞质、周质空间和培养基中表达的比例为85∶33∶25（density intensity/mm^2）,利用渗透休克处理方法得到的比例为50∶37∶25。由于A信号序列本身是集胞藻6803膜蛋白（ID：s110172/NCBI-GI：1001433）的分泌信号肽,说明pS-A载体是一种广谱的原核型分泌表达载体。这一结果为实现hEGF在螺旋藻中的分泌型表达奠定了基础。; 郝春芳徐虹章军刘仁海; 关键词：信号肽序列分泌型表达

蓝藻抗病毒蛋白-N在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备被引量：1: 2007年; 目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。; 黄小花章军; 关键词：克隆表达酶联免疫吸附反应 WESTERN BLOT

全选清除导出

共1页<1>

国家自然科学基金(30571422)