国家自然科学基金(81101897)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 相关作者：黄丽洁叶青龚福生黄峰王晓盈更多>>
- 相关机构：福建医科大学福建省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 突触核蛋白在结直肠癌中的表达模式及其临床意义
- 2012年
- 目的探讨结直肠癌组织中突触核蛋白(Synuclein)的表达模式,并分析其与临床病理特征的关系。方法半定量RT-PCR检测20例结直肠癌及其癌旁组织中α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein基因的mRNA水平,免疫组化SP法检测51例结直肠癌及其癌旁组织中α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein蛋白的表达。结果结直肠癌组织中α-synucle-in、β-synuclein和γ-synuclein mRNA的的相对表达量分别为0.62±0.32、0.61±0.32和0.72±0.37,显著高于癌旁组织的0.41±0.27、0.40±0.25和0.45±0.25(P=0.034,P=0.026,P=0.007)。γ-synuclein蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为47.1%,显著高于癌旁组织的23.5%(P=0.022),而α-synuclein、β-synuclein蛋白在结直肠癌和癌旁组织中的表达差异无统计学意义。在α-synuclein、β-synuclein和γ-synuclein表达模式的8种组合中,任一种蛋白表达、α-synuclein或γ-synuclein、β-synuclein或γ-synuclein、α-synuclein和γ-synuclein在结直肠癌组织中的表达率明显高于癌旁组织(P<0.05)。α-synuclein、β-synuclein蛋白的表达与临床病理特征无关,γ-synuclein蛋白的表达与分期和淋巴结转移有关(P=0.047,P=0.048)。淋巴结转移及分期较晚者任一蛋白的阳性表达率明显高于无淋巴结转移及分期较早者(P=0.030,P=0.040)。结论 Synuclein在结直肠癌组织中的表达较癌旁组织有增高的趋势,其中γ-synuclein对于评估结直肠癌病程的发展和转归具有潜在价值。
- 叶青应敏刚龚福生许杨梅王晓盈黄丽洁
- 关键词：结直肠癌突触核蛋白临床病理特征
- γ-synuclein基因真核表达载体的构建及其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能的影响被引量：2
- 2014年
- 目的构建针对γ-synuclein基因的真核表达载体并观察其对结肠癌细胞sw1116体外侵袭及与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）黏附能力的影响。方法从结肠癌细胞系HT29提取总RNA，经RT．PCR获得γ-synucleincDNA全长片段，经过酶切连接等反应定向克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上，以脂质体转染的方法将重组质粒转染至结肠癌细胞系SW1116，经G418筛选出稳定转染的细胞株。采用Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。将细胞接种于铺有HUVEC的96孔板中，酶标仪读取荧光强度来表示黏附细胞的相对数。结果成功构建pEGFP-γ-synuclein真核表达载体，经过筛选后可在SW1116细胞中稳定表达，且能在体外翻译出GFP-γ-synuclein融合蛋白质。转染γ-synuclein后，穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的细胞数明显增加（198．4±20．7比98．8±13．2，P〈0．05），与HUVEC黏附的细胞数（荧光强度）亦显著增加（3．08±0．36比1．22±0．21，P〈0．05）。结论γ-synuclein可显著增强结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能。
- 叶青黄峰郑秋红王晓盈许扬梅龚福生黄丽洁
- 关键词：结肠癌细胞人脐静脉内皮细胞
- γ-synuclein对结肠癌细胞系体外生物学行为影响的观察
- 2013年
- 目的:构建针对人γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,观察γ-synuclein基因对人结肠癌细胞系体外生物学行为的影响。方法:根据人γ-synuclein序列设计并构建γ-synuclein基因的shRNA真核表达载体,以脂质体转染的方法将γ-synuclein干扰质粒转染至人结肠癌细胞株HCT116,经G418筛选出稳定转染的细胞株。应用CCK8法检测γ-synuclein干扰对HCT116细胞增殖的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力,细胞划痕实验检测细胞体外迁移能力,Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。结果:经测序证明γ-synuclein的shRNA序列已成功插入pGCsi-U6/neo/GFP质粒中,构建的干扰质粒能够显著抑制γ-synuclein mRNA及蛋白的表达。γ-synuclein受抑制后,HCT116细胞增殖数目从48h后开始减少,持续72h,与空质粒组及未转染组相比,差异均有统计学意义,P<0.05。siRNA组细胞克隆形成率为(9.6±2.9)%,显著低于未转染组的(29.4±4.5)%和空质粒组的(32.1±5.8)%,差异均具有统计学意义,P<0.05。在细胞划痕实验中,γ-synuclein被抑制后细胞划痕损伤愈合的速度明显减慢。在侵袭实验中,穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的siRNA组侵袭细胞数为20.1±5.26,显著低于未转染组的100和空质粒组的105.4±12.5,差异均有统计学意义,P<0.05。结论:干扰γ-synuclein的表达可显著抑制结肠癌细胞体外增殖、克隆形成和迁移侵袭能力。
- 叶青黄峰龚福生许杨梅王晓盈黄丽洁应敏刚
- 关键词：结肠癌细胞Γ-SYNUCLEINSHRNA生物学行为
- γ-synuclein对结肠癌细胞SW1116体外及体内增殖潜能的影响
- 2017年
- 目的:研究γ-synuclein对人结肠癌细胞系体外及体内增殖潜能的影响。方法:利用真核表达载体p IRES2-EGFP和RNA干扰载体p GCsi-U6/neo/GFP构建针对γ-synuclein的重组质粒,并转染至人结肠癌细胞株SW1116,经G418筛选出稳定转染细胞株。应用CCK8法检测细胞增殖活性;软琼脂克隆法检测细胞克隆形成能力;裸鼠皮下成瘤实验检测细胞在裸鼠体内的成瘤能力。结果:经测序以及RT-PCR和Western blot验证,重组质粒成功构建,并能够过表达或抑制γ-synuclein基因和蛋白。结果显示,γ-synuclein受抑制后,SW1116细胞的增殖数目从48h至120h持续显著减少(P<0.05),克隆形成率亦显著降低(P<0.05)。SW1116细胞的增殖和克隆形成能力与其γ-synuclein的表达水平呈正相关。过表达γ-synuclein能够部分增强SW1116细胞的增殖和克隆形成能力,但差异无统计学意义(P>0.05)。体内实验也有类似结果,过表达γ-synuclein能够稍微加快SW1116细胞瘤体生长速度,但直至第27天,其生长速度才显著加快(P<0.05)。γ-synuclein受抑制后,SW1116细胞裸鼠皮下成瘤速度从第6天至第30天显著减慢(P<0.05)。结论:γ-synuclein与结肠癌细胞体外及体内的增殖潜能密切相关。
- 叶青黄峰许杨梅黄丽洁龚福生郑秋
- 关键词：结肠癌细胞Γ-SYNUCLEIN克隆形成裸鼠
