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温州市科技局科研基金(Y20060074)
作品数:
2
被引量:1
H指数:1
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陈钢
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2009
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EphrinA1基因小干扰RNA的构建及其在Huh-7细胞中的沉默效应
2009年
目的:构建针对EphrinA1基因的发夹状RNA(ShRNA)表达载体pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA,观察其对人肝癌细胞Huh-7中EphrinA1基因表达的特异性抑制效应。方法:设计合成针对EphrinA1 mRNA的RNAi核苷酸片段,并定向克隆到pSilencer2.1-U6载体中,构建重组质粒pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA,同时构建不针对任何序列的重组质粒pSilencer2.1-EphrinA1-ScrRNA,通过脂质体介导转染入Huh-7细胞,应用逆转录聚合酶链反应检测小干扰RNA的沉默效应。结果:酶切鉴定证实pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA和pSilencer2.1-EphrinA1-ScrRNA重组质粒构建成功,转染Huh-7细胞后,pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA组EphrinA1 mRNA表达较pSilencer2.1-EphrinA1-ScrRNA组和空白对照组明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:pSilencer2.1-EphrinA1-SiRNA载体的成功构建为下一步研究以EphrinA1基因为靶位点的肝细胞癌基因治疗奠定了重要的实验基础。
王怡
陈钢
陈必成
刘佳明
黄陈平
关键词:
EPHRINA1
小干扰RNA
抑制PI3K/Akt信号通路对Ephrin—A1介导的肝癌细胞运动和侵袭能力的影响
被引量:1
2009年
目的探讨PI3K/Akt信号传导通路在Ephrin—A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中的作用。方法Western blot法检测Ephrin-A1/Fc融合蛋白作用人肝癌细胞系Huh-7细胞前后丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号分子的表达,利用LY294002特异性的阻断PI3K/Akt信号通路后,检测细胞运动能力、细胞侵袭能力的变化。结果Ephrin—A1/Fc融合蛋白作用后p-Akt磷酸化蛋白的表达与对照组比较明显上升(t=4.564,P〈0.05),PI3K/Akt信号通路可能为Ephrin—A1/EphA1作用的下游信号传导通路;LY294002明显抑制Ephrin—A1/Fc融合蛋白对Huh-7细胞中PI3K/Akt信号通路的激活,p-Akt磷酸化蛋白的含量与对照组比较明显减少(P〈0.05);Ephrin-A1介导肝癌细胞的运动能力及侵袭能力明显受到抑制(P〈0.05)。结论PI3K/Akt信号通路在Ephrin—A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中起重要的作用。
陈钢
王怡
周蒙滔
施红旗
余正平
朱椰凡
俞富祥
单云峰
关键词:
信号传导
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