河北省青年科技基金(C2012401039)
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
- 相关作者：王洋田喜凤王沂余源贺宝玲更多>>
- 相关机构：河北联合大学河北联合大学附属医院华北理工大学更多>>
- 发文基金：河北省青年科技基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究被引量：1
- 2015年
- 目的建立实时荧光定量RT-PCR(real-time quantitative,RT-PCR)检测C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)Delta giardin基因mRNA表达量的方法,分析双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达水平的影响。方法分别采用100μg/mL、200μg/mL的双氢青蒿素改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2h、4h、8h、12h,提取总RNA,逆转录合成cDNA,实时荧光定量PCR检测Delta giardin基因mRNA表达情况。结果 100μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.44、0.26、0.25、0.02;200μg/mL双氢青蒿素培养2h、4h、8h、12h后,Delta giardin基因mRNA相对表达量分别为0.30,0.26,0.11,0.02。药物对照组中C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA表达量明显低于阴性对照组。结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的防治效果。
- 刘阿倩王洋林志强张亚粉田喜凤余源
- 关键词：双氢青蒿素实时荧光定量RT-PCRDELTA
- 蓝氏贾第鞭毛虫的免疫逃避机制被引量：4
- 2013年
- 蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)是一种世界性分布的机会性致病原虫,能够引起以腹泻为主要表现的贾第虫病,严重影响人类尤其是儿童的健康和发育。在贾第虫感染过程中,宿主的非特异性和特异性免疫系统均会产生强烈的抗贾第虫效应,但贾第虫通过抗原漂变、L-精氨酸饥饿等机制逃避和抑制宿主的免疫反应,引起宿主的长期或反复感染。本文对宿主的抗贾第虫免疫以及贾第虫的免疫逃避机制做一综述。
- 王洋田喜凤
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫免疫逃避
- 阴道毛滴虫对小鼠组织的侵袭力研究被引量：2
- 2013年
- 目的研究4株阴道毛滴虫对小鼠组织的侵袭力。方法取有症状的阴道毛滴虫患者的阴道后穹窿分泌物,无菌培养,获得的4株阴道毛滴虫各感染30只昆明小鼠,每只经腹腔接种0.5ml(含5×106个虫体/ml)的阴道毛滴虫悬液,每天观察小鼠的行为变化。分别于第10、20、30d剖杀小鼠,剥开腹腔,检查各器官病理改变。结果共接种小鼠120只,解剖107只,检出有病变小鼠37只,占30.83%。小鼠接种滴虫后,外观行为变化包括行动迟缓、精神萎靡、竖毛、腹胀等。发生病变的小鼠腹腔脏器表面可见多处脓肿,病变脏器中均有活滴虫,受累脏器涉及肝、脾、肾、胰、胃、睾丸、卵巢等。观察病变肝组织病理变化,可见滴虫在肝脏形成脓肿,引起变性、坏死。病变早期,肝细胞间隙或溶解的组织中可见椭圆形游离的滴虫,也有滴虫附着于组织细胞上,紧密排成一列,呈栅栏状;病变中期,在坏死的病变区可见数量多、密集成团的滴虫;晚期,变性肝细胞围绕脓肿腔呈索状排列,肝细胞核皱缩,发生玻璃样变或溶解。结论阴道毛滴虫对小鼠组织有较强的侵袭力和致病性,滴虫接触并粘附组织细胞在其致病过程中起重要作用。感染小鼠的器官发生一系列的病理变化。
- 贺宝玲王洋田立伟刘向芹文丹莉马素兰田喜凤
- 关键词：阴道毛滴虫小鼠
- C2株蓝氏贾第鞭毛虫SUMO特异性蛋白酶基因的克隆、生物信息学分析及其催化活性区的原核表达被引量：1
- 2015年
- 目的克隆C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)的SUMO-Specific Protease(SENP)基因,并对其序列进行生物信息学分析,原核表达贾第虫SENP的催化活性区。方法提取C2株贾第虫基因组DNA,以基因组DNA为模板获得SENP编码区全长片段,连入克隆载体pGM-T,测序后进行生物信息学分析;根据分析结果克隆SENP的催化活性区,构建其原核表达载体pET-28a(+)-SENPc,在E.coli Rosetta(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE及Western blot观察表达结果。结果成功克隆了C2株贾第虫SENP编码区全长序列,生物信息学分析显示C2株贾第虫SENP蛋白序列与WB株相同,二级结构以无规则卷曲为主,其催化活性区位于126-497aa,被一段插入序列分割成两个部分;构建了SENP催化活性区原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达,在相对分子量约43kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符。结论成功克隆了贾第虫SENP基因并原核表达了其催化活性区,为贾第虫SENP蛋白功能的研究提供了基础。
- 李少东周英斌刘晓莉禇晗李思瑾田喜凤王洋
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫原核表达生物信息学
- 人TRAF3IP3基因的克隆及真核表达被引量：1
- 2013年
- 目的构建人肿瘤坏死因子受体相关因子3相互作用蛋白3(TRAF3IP3)基因真核表达载体,并进行表达检测及鉴定。方法 RT-PCR扩增获得TRAF3IP3开放读码框区基因,双酶切连入真核表达载体pIRES2-EGFP,双酶切和测序鉴定阳性克隆;重组质粒磷酸钙法转染HEK293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,实时定量PCR和Western blot法鉴定TRAF3IP3基因的表达情况。结果经限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,成功构建了TRAF3IP3真核表达质粒,荧光显微镜观察可见转染了重组质粒的HEK293细胞有绿色荧光蛋白的表达,实时定量PCR和Western blot结果证实TRAF3IP3蛋白高水平表达。结论成功构建了pIRES-EGFP-TRAF3IP3真核表达质粒,为TRAF3IP3基因功能的研究奠定了基础。
- 王沂张秀军刘青余源慈雅丽王洋
- 关键词：真核表达转染HEK293细胞
- 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA表达水平的影响被引量：1
- 2014年
- 目的分析双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)中心体蛋白(Centrin)基因mRNA表达水平的影响,探讨其对蓝氏贾第鞭毛虫的抑制作用。方法采用改良型TYI-S-33培养基培养C2株蓝氏贾第鞭毛虫,培养基内分别加入浓度为100μg/ml、200μg/ml的双氢青蒿素,以不含药物组作为阴性对照,分别培养2、4、8、12h后,收集各组虫体并提取总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,采用实时荧光定量RTPCR检测药物作用后Centrin基因mRNA表达水平的相对变化量。结果实时荧光定量RT-PCR检测显示,经双氢青蒿素作用虫体后Centrin基因mRNA表达水平显著降低,培养2、4、8、12h后100μg/ml药物组Centrin基因mRNA相对表达量分别为0.46、0.43、0.35和0.27,200μg/ml药物组分别为0.42、0.38、0.29和0.25。结论双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Centrin基因mRNA的表达具有明显的抑制作用,且抑制作用随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强,提示双氢青蒿素对蓝氏贾第鞭毛虫具有明显的损伤作用,可供蓝氏贾第鞭毛虫病防治参考。
- 余源王洋陈阳赵丽娜贺宝玲张亚粉田喜凤
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR双氢青蒿素中心体蛋白
- TRAF4的结构与生物学功能被引量：4
- 2015年
- TRAF(TNF receptor associated factor)家族蛋白是一类具有相同C末端保守结构域的细胞内接头蛋白,能够与包括TNF受体在内的多种受体蛋白相互作用传递信号并因此得名,目前已经发现了7种TRAF家族蛋白。TRAF4是TRAF家族蛋白中最古老的成员之一,最早在乳腺癌的转移淋巴结中发现,在多种实体肿瘤组织中存在高表达和亚细胞定位的异常。与其他TRAF家族蛋白主要参与免疫和炎症反应不同,TRAF4在免疫中的作用非常有限,目前其已知功能主要体现在胚胎发育、细胞极性、凋亡以及活性氧生成调节等方面。
- 王沂赵俊暕韩晓燕王洋
- 关键词：胚胎发育细胞极性凋亡活性氧
- 蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素特异性多克隆抗体的制备及免疫电镜定位研究被引量：2
- 2012年
- 目的制备针对蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的特异性抗体,免疫胶体金电镜观察该贾第素的亚细胞定位。方法生物信息学分析并合成α-4贾第素抗原肽,与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联后免疫新西兰白兔,Protein A亲和层析纯化抗血清,采用α-4贾第素重组蛋白和贾第虫滋养体全虫体裂解物通过Western blot验证抗血清结合力和结合特异性,选择高特异性抗体通过免疫胶体金电镜观察α-4贾第素的亚细胞定位。结果筛选出3段可能的抗原肽,合成的抗原肽与KLH偶联后免疫兔得到高效价抗血清,Protein A纯化效果良好;3种纯化抗血清均能与α-4贾第素结合,其中anti-P2具有较高的抗原结合特异性。采用anti-P2进行免疫胶体金电镜,显示α-4贾第素主要定位于鞭毛,胞浆也有少量散在表达。结论制备的α-4贾第素多克隆抗体具有抗原结合特异性。用anti-P2进行免疫胶体金电镜,α-4贾第素主要定位于贾第虫鞭毛。
- 王洋王沂杨文思李冀余源沈海娥刘青田喜凤
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫亚细胞定位
- 蓝氏贾第鞭毛虫胞外核酸酶的表达纯化和活性鉴定被引量：2
- 2016年
- 目的克隆、原核表达蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,贾第虫)的胞外核酸酶编码区,并对其蛋白产物进行活性鉴定。方法对贾第虫胞外核酸酶(GeNuc)蛋白进行生物信息学分析,根据分析结果以C2株贾第虫基因组DNA为模板扩增获得GeNuc去信号肽段编码区序列,双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),将酶切和测序验证正确的重组质粒转化E.coli Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE及Western blot鉴定蛋白产物。Ni-NTA亲和层析纯化GeNuc蛋白,经复性后验证其对质粒DNA的水解能力。结果成功克隆了长约800bp的GeNuc编码区并构建了原核表达载体pET-28a(+)-GeNuc,测序结果显示C2株GeNuc序列与WB株相同;在大肠杆菌中诱导表达获得了相对分子量约30.8kDa的融合蛋白;复性后的纯化GeNuc蛋白具有降解双链DNA的能力,但活性较商品化DNaseⅠ低。结论证明了GeNuc的存在,为GeNuc抗体的制备及贾第虫致病机制的研究提供了实验材料。
- 王沂赵俊暕余源田喜凤李冀刘晓莉周英斌李少东王洋
- 关键词：蓝氏贾第鞭毛虫生物信息学原核表达活性鉴定
