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ie-1和lef-1基因dsRNA表达元件转染及转化细胞对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制被引量：12: 2008年; 通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕BmN细胞中,瞬时表达结果显示转染了转基因RNAi载体的BmN细胞均对BmNPV有一定的抑制作用。IE dsRNA在病毒滴度为10-4时有抑制作用,在病毒滴度为10-5时有比较好的作用;LEF dsRNA则在病毒滴度为10-5时有抑制作用,在病毒滴度为10-6时有较好的抑制作用。通过转基因及G418筛选后,转基因IE dsRNA细胞在病毒滴度为10-4显示出一定的抑制作用,在病毒滴度为10-5表现了明显的抑制作用;而转基因LEF dsRNA细胞在病毒滴度为10-5有一定的抑制作用,但只维持了一个时段。; 薛仁宇曹广力王崇龙刘波沈卫德贡成良; 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕细胞

基于piggyBac转座子转hGM-CSF基因家蚕的研究被引量：30: 2006年; 将由家蚕核型多角体病毒IE-1基因启动子控制下的hGM-CSF基因克隆到p igA3GFP载体中,构建了家蚕转基因载体p igA3GFP[IE-GMCSF],利用压力渗透法和精子介导法将其与辅助质粒helper p igA3一起导入家蚕蚕卵,获得产生绿色荧光的家蚕,次代产生荧光蚕的比例分别为0.17%,0.15%。将次代荧光蚕与正常蚕交配后代(G1)的荧光蚕个体再相互杂交,连续进行多代选育,获得了稳定遗传的转hGM-CSF基因家蚕品系。; 曹广力薛仁宇何泽郑小坚沈卫德贡成良; 关键词：转基因家蚕精子介导法

家蚕丝胶蛋白基因1(ser-1)启动子的克隆及其活性分析被引量：16: 2007年; 家蚕ser-1基因是中部丝腺中特异表达组织特异性基因。为研究家蚕ser-1基因在时空上的调控机制,用PCR的方法克隆了家蚕ser-1基因启动子并进行序列分析,进一步构建了由ser-1基因启动子驱动报告基因DsRed的新型表达质粒pSK-ser-DsRed-PolyA,并通过蚕体和家蚕BmN细胞进行了瞬时表达。结果显示,家蚕ser-1基因启动子的TATA框的保守序列为TATAAAA,位于-24～-30处,CAAT框位于-112～-115处;ser-1基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕幼虫的中部丝腺组织和培养的BmN细胞中瞬时表达。; 诸戌娴曹广力薛仁宇周文林刘炜彬贡成良; 关键词：家蚕启动子克隆

Sequence and phylogenetic analysis of the complete mitogenome of Bombyx mandarina strain Qingzhou: The complete nucleotide sequence of the mitogenome of Bombyx mandarina strain Qingzhou was determined. The cir...; Xiao-long Hu; 文献传递

家蚕丝素重链基因(fib-H)部分序列克隆及结构分析被引量：1: 2008年; 通过PCR分别克隆了1个包含家蚕丝素重链基因启动子及旁侧序列(1380bp)、丝素重链基因第1内含子和第2外显子的部分序列(956bp)的2个片段,并进行了序列测定和分析,结果显示:该2个片段与已公开的家蚕丝素重链基因(GenBank登录号:AF226688)对应区域的同源性分别达98.48%和99.58%;2级结构分析显示,在启动子区域存在大量简单的反向互补序列,可形成多个潜在的茎环结构,推测这些茎环结构可能与调控蛋白的识别和作用有关;将第2外显子对应的部分氨基酸序列与其他昆虫的丝蛋白进行比对分析,发现不同的丝蛋白在比对的区域具有潜在的守恒基序,其差异序列可能与丝蛋白的特性相关。; 贾海芳曹广力薛仁宇贡成良; 关键词：家蚕同源性

人胰岛素样生长因子Ⅰ型在E.coli和家蚕中的表达被引量：5: 2006年; 将hIGF-I基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),在E.coli中进行了融合表达,West-ern blotting显示在26 kD附近有一条特异条带。将hIGF-I基因克隆进pBacPAK-8,获得了杆状病毒转移载体pBacPAK-8-IGF-I,在脂质体的介导下,与线性化的家蚕杆状病毒共转染家蚕培养细胞Bm-N,经空斑筛选,PCR检测,获得了重组病毒Bm-Bac-hIGF-Ⅰ。SDS-PAGE检测表明,在感染重组病毒后,家蚕幼虫血淋巴中可以检测到一条分子量约为7.5 kD的特异性条带,ELISA检测表达量达4.51μg/mL蚕血淋巴。; 徐岩贡成良薛仁宇沈卫德曹广力; 关键词：大肠杆菌家蚕重组病毒

家蚕丝蛋白Fhx/P25基因启动子区域的克隆及序列分析被引量：19: 2007年; 为研究家蚕Fhx/P25基因在时空上的调控机制,通过PCR扩增获得家蚕丝素蛋白Fhx/P25基因的启动子序列并进行克隆和序列分析。进一步构建了由Fhx/P25启动子驱动报告基因DsRed的表达载体pSK-P25-DsRed-PolyA,并通过家蚕BmN细胞进行瞬时表达。结果显示:Fhx/P25基因的启动子序列符合真核生物启动子特点,具有丝腺特异性表达启动子的特征,TATA框的保守序列为TATAA,位于-28—-32处,CAAT基序有3个,其中-110—-117和-90—-87处的2个CAAT基序可能具有活性;二级结构分析显示:Fhx/P25启动子区域具有复杂的茎环结构,这可能与蛋白表达的组织特异性、时间性以及活性有关。基因启动子可以驱动红色荧光基因DsRed在家蚕BmN培养细胞中的瞬时表达。; 刘炜彬贡成良薛仁宇周文林诸戌娴曹广力; 关键词：家蚕启动子

表达短ie-1 dsRNA的转化细胞对家蚕核型多角体病毒的抑制作用被引量：9: 2008年; 为了利用RNAi技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性,根据BmNPV复制必需基因ie-1设计其相应的dsRNA,构建带有ie-1 dsRNA表达盒的转基因载体piggyantiIE-Neo,结果显示:表达短ie-1 dsRNA的稳定转化Bm细胞,对BmNPV的增殖表现出抑制作用,但在病毒感染后期,由于病毒恢复增殖导致RNAi的效果被掩盖。通过反向PCR分析外源DNA片段插入基因组位点,结果显示:在转化细胞中,外源DNA可通过随机整合或按照piggyBac特定的转座位点TTAA插入细胞基因组。; 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：家蚕核型多角体病毒家蚕细胞 PIGGYBAC转座子

双元表达短dsRNAs的转化细胞/家蚕对BmNPV的抗性研究: 利用RNAi 技术提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抗性，构建了带有BmNPV ie-1、lef-1 dsRNA双表达盒的转基因载体piggyantiIE-lef1-Neo。结果显示：表达双元dsRNA的稳定转化B...; 张鹏杰薛仁宇曹广力贡成良; 关键词：转基因家蚕核型多角体病毒家蚕细胞转基因家蚕 PIGGYBAC转座子

家蚕核型多角体病毒碱性磷酸酶基因(alk-exo)与杆状病毒的分子进化分析被引量：4: 2006年; 基于为杆状病毒分类提供新的依据,克隆了家蚕核型多角体病毒苏州株(BmNPV-SU)碱性核酸酶基因(alk-exo)及其侧翼区,并进行序列和进化分析。BLAST检索显示,BmNPV-SUalk-exo上游的部分ORF109序列仅在AcNPV、RoNPV中检索到同源序列;下游区域在AcNPV、RoNPV、SlNPV的基因组中检索到同源序列。序列分析表明,BmNPV-SU的alk-exo基因编码420个氨基酸残基,下游区域存在2个正向的重复。比对结果分析显示,在22种杆状病毒中,alk-exo基因间核苷酸序列和氨基酸序列的同源性不高,变异较大。同时,利用MEGA软件包中的UMEGA算法建立了基于alk-exo基因的分子进化系统树,表明通过杆状病毒的进化可以反映宿主昆虫的进化,杆状病毒与其宿主昆虫之间存在共进化关系。; 王崇龙薛仁宇曹广力沈卫德贡成良; 关键词：杆状病毒家蚕核型多角体病毒

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