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牛分支杆菌CFP-10的原核表达及其在牛结核病诊断中的应用被引量：3: 2007年; 低分子质量的蛋白抗原CFP-10是一种重要的牛分支杆菌早期分泌蛋白。为了检测该蛋白和其他几种抗原在牛结核病诊断中的临床应用,对CFP-10的基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达。PCR法扩增cfp-10基因片段,连接到pET-22b(+)原核表达载体中,再转入表达宿主E.coliBL21(DE3)PlysS菌株内,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化。分别以CFP-10、ESAT-6、MPT83、MPT70、牛PPD、CFP-10与ESAT-6混合蛋白,MPT83与MPT70混合蛋白为抗原,用间接ELISA法诊断牛结核病。结果表明,以CFP-10与ESAT-6混合蛋白作为抗原检测牛结核病的特异性和敏感性分别达到了100%和63.6%,均超过了其他单抗原或抗原组合,为以筛选合适抗原为基础的血清学诊断技术提供了有力的支持并创造了良好的应用前景。; 李超然别克.吐尔逊蔡宏朱玉贤; 关键词：牛结核病间接酶联免疫吸附试验 CFP-10 ESAT-6

佐剂DDA和MPL对提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的比较研究被引量：9: 2005年; 编码结核杆菌3种抗原Ag85B,MPT64,MPT83的基因片段插入真核表达载体作为组合疫苗免疫小鼠,DDA和MPL作为佐剂分别提高了此三价苗的免疫原性和免疫保护效果,且相比之下DDA优于MPL.添加DDA后,Ag85B,MPT64,MPT83抗原特异的IFN-γ含量分别为(265.37±79.2)U/ml,(185.31±58.3)U/ml,(108.13±54.4)U/ml,分别比非佐剂组的高16U/ml,45U/ml和2U/ml,与MPL组3种抗原特异性IFN-γ的含量无显著差异.IL-4的含量在各组中无显著差异.攻毒后细菌计数结果显示,添加佐剂的三价苗组小鼠的肺脏和脾脏的载菌量分别比空载体组降低了2￣3个数量级,且佐剂DDA组显著优于佐剂MPL组和未加佐剂组.病理切片结果与载菌量数据相一致,添加佐剂组,特别是DDA组小鼠肺部淋巴细胞相对减少,巨噬细胞增多.因此,DDA作为佐剂能显著提高核酸疫苗的免疫效率,佐剂MPL不能提高结核杆菌多价核酸疫苗的免疫效率.; 余大海蔡宏朱玉贤; 关键词：结核分支杆菌佐剂 DDA MPL 免疫效果

结核分枝杆菌四价DNA疫苗免疫原性和保护效率研究被引量：10: 2005年; 对结核杆菌四价DNA疫苗的免疫应答和保护效果进行了评价.用编码结核分枝杆菌Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3等4种抗原蛋白的基因分别构建的单价DNA疫苗混合成四价苗免疫小鼠.3次免疫后21天,四种抗原特异性抗体滴度分别达到1:6 400、1:51 200、1:6 400、1:6 400.四种蛋白质均能诱导脾脏细胞产生较高水平的抗原特异性IFN-γ,浓度分别为10 582.14 ng/L、13 635.97 ng/L、14 213.15 ng/L和9 657.35 ng/L.三次免疫后经静脉强毒攻击,四价苗组小鼠肺脏和脾脏的载菌数分别减少到阴性组的1/650和1/130.对肺组织的病理形态特征观察表明,空载体免疫的小鼠肺部严重损伤,肺实质干酪样坏死,坏死结节占肺实质的70%～80%,而四价苗免疫的小鼠,肺组织结构正常,肺泡轮廓清晰.研究首次证实,Ag85B、MPT64、MPT70和PstS-3 4种结核杆菌抗原蛋白编码基因组成的四价DNA疫苗,具有很高的免疫应答水平和保护效率.; 顾田园蔡宏田霞余大海朱玉贤; 关键词：结核分枝杆菌抗原蛋白免疫原性

DDA提高结核杆菌组合DNA疫苗免疫效果的研究被引量：2: 2006年; 将编码结核杆菌的三种抗原Ag85B，MPT64，MPT83的基因片段分别插入到真核表达载体中，混合后作为组合疫苗免疫小鼠，DDA作为佐剂提高了三价疫苗的免疫原性和免疫保护效果。添加DDA后Ag85B，MPT64，MPT83抗原特异的IFN-γ的含量分别为（265．37±79．2）U／ml，（185．31±58．3）U／ml，（108．13±54．4）U／ml，分别比非佐剂组高16U／ml，45U／ml，2U／ml。IL-4的含量在各组中相差不多，仅为纳克级。攻毒后细菌计数结果显示，肺脏和脾脏的载菌量在添加佐剂的三价组中降低了三个数量级，都达到了未加佐剂组相应脏器的一半菌量。病理切片显示结果与载菌量一致，添加佐剂组肺部淋巴细胞相对较少，巨噬细胞增多。因此，DDA作为佐剂提高了组合疫苗的免疫效果。; 余大海田霞蔡宏朱玉贤; 关键词：结核分支杆菌免疫效果

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国家高技术研究发展计划(2002AA206411)