重庆市自然科学基金(2006BB5116)
- 作品数：7 被引量：21H指数：3
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学西南医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金重庆市医学重点学科建设基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。
- 司英健张曦陈幸华刘耀高蕾高力彭贤贵光丽霞王庆余
- 关键词：连接蛋白43同源重组重组腺病毒载体
- Ad-vcam-1-gfp重组腺病毒转染人脐血源基质细胞的实验研究被引量：1
- 2008年
- 本研究探讨血管细胞黏附分子(vcam-1)修饰的人脐血源基质细胞(human umbilical cord blood derived strom cells,CBDSC)在造血调控中的作用。采用DNA重组技术,将目的基因vcam-1克隆至含有报告基因gfp的穿梭质粒;在BJ5183细胞中与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体转染人脐血源基质细胞并进行鉴定。结果表明:vcam-1基因与pAdTrack-CMV载体成功连接,经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2kb左右条带,经PCR法扩增后电泳可见1个600bp左右条带,证明pAdTrack-CMV-vcam-1重组质粒构建成功。pAdTrack-CMV-vcam-1质粒与pAdeasy-l质粒同源重组后,产物经PACⅠ酶切后电泳可观察到2个大小约为31kb、4kb左右条带,与预期结果相符。腺病毒载体转染人脐血源基质细胞后免疫化学、RT-PCR、荧光显微镜等方法均检测到目的基因vcam-1的表达。结论:构建ad-vcam-1-gfp重组腺病毒载体可成功转染人脐血源基质细胞并使其vcam-1表达增高。
- 张曦司英健陈幸华刘耀高力高蕾彭贤贵王庆余
- 关键词：GFP重组腺病毒载体
- 腺病毒介导Cx43基因修饰对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响
- 2007年
- 目的观察急性白血病骨髓基质细胞(acute leukemia bone marrow stromal cells,ALBMSCs)经腺病毒介导的间隙连接蛋白43(Cx43)基因修饰后Cx43基因表达的变化以及对细胞间隙连接通讯(GJIC)功能的影响。方法用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染ALBMSCs,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达并计算转染效率,RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测ABMSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况,通过染料传输实验观察细胞间隙连接通讯功能的变化。结果荧光显微镜下观察可见ALBMSCs在转染Ad-Cx43-GFP后24h即有绿色荧光表达,计数绿色荧光细胞的百分率得出转染效率为(82.7±2.16)%;RT-PCR法、Westernblot法和免疫细胞化学法检测显示转染Ad-Cx43-GFP后ALBM-SCsCx43基因及蛋白表达较转染前增强(P<0·01);转染Ad-Cx43-GFP后ALBMSCs GJIC功能较转染前增强(P<0·01)。结论腺病毒介导Cx43基因修饰ALBMSCs后可上调其Cx43基因的表达并增强GJIC功能。
- 司英健张曦刘耀童燕敏陈幸华高力高蕾彭贤贵光丽霞王庆余
- 关键词：CX43GJIC重组腺病毒急性白血病骨髓基质细胞GFP
- 人脐血源基质细胞移植促进裸鼠造血损伤修复的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的观察人脐血源基质细胞(hUCBSCs)移植对裸鼠造血损伤的修复效果。方法6.5Gy辐照裸鼠后,分别从尾静脉输入1×105个人脐血源基质细胞及生理盐水,分别于移植+1、+3、+5、+7、+10、+14、+21d观察裸鼠血象、骨髓象以及不同时相点CFU-F、CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg动态变化。结果HUCBSCs移植组裸鼠在血象、骨髓象恢复时间、不同时相点骨髓CFU-F、CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg等方面与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论HUCBSCs移植具有促进裸鼠造血损伤修复的作用。
- 张曦陈幸华司英健刘耀高蕾高力张诚彭贤贵王庆余
- 关键词：人脐血源基质细胞造血损伤
- 激光共聚焦扫瞄显微镜检测急性白血病骨髓基质细胞Cx43表达被引量：1
- 2007年
- 目的观察急性白血病骨髓基质细胞上connexin43蛋白的表达以及GJIC功能。方法体外培养正常及急性白血病骨髓基质细胞,采用激光共聚焦扫瞄显微镜观察二者Cx43表达的变化;采用荧光漂白恢复技术比较二者之间GJIC功能的差异。结果正常及急性白血病骨髓基质细胞上Cx43表达的像素密度分别为(81.04±8.84)%和(34.10±17.91)%,两组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较正常骨髓基质细胞明显减弱。
- 刘耀张曦陈幸华司英健彭贤贵李忠俊曾东风高蕾高力王庆余
- 关键词：急性白血病骨髓基质细胞GJIC
- FOXO3a在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与临床病理特征的相关性被引量：4
- 2019年
- 目的探讨叉头转录因子(Forkhead box O3,FOXO3a)在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与临床病理特征的相关性。方法选取2014年1月～2017年6月我院妇科收治的87例上皮性卵巢肿瘤患者,按照不同的病理类型分为两组,其中良性上皮卵巢肿瘤组织47例为良性组,恶性上皮卵巢肿瘤组织40例为恶性组,选取同期45例正常卵巢上皮组织作为正常组,采用实时定量荧光PCR(Real-Time PCR)法测定FOXO3a、凋亡蛋白Bim在不同恶性程度的肿瘤以及正常上皮卵巢组织中的mRNA表达情况,采用免疫组化检测FOXO3a以及凋亡蛋白Bim、P-AKT蛋白在不同组织中的表达情况。结果 FOXO3a在mRNA中表达情况组间比较差异无统计学意义(P>0.05);上皮组织恶性程度越高,Bim的相对表达量就越低,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);FOXO3a和Bim及p-AKT蛋白表达在正常组、良性组、恶性组中的表达依次降低,且组间比较差异均有统计学意义(P<0.05),p-AKT蛋白在正常组、良性组、恶性组中的表达依次升高,且组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);FOXO3a与患者年龄、FIGO分期、组织学类型、淋巴结转移无关(P>0.05),与组织分化程度相关(P<0.05);卵巢上皮组织中FOXO3a与Bim蛋白表达水平呈负相关(P<0.05),FOXO3a与p-AKT表达水平呈正相关(P<0.05)。结论 FOXO3a在上皮性卵巢癌中的表达与卵巢组织恶性程度的发展相关,FOXO3a的功能再次活化有望成为肿瘤靶向治疗的重要方法。
- 陈莉萍曹婷李素芬罗莉杨鹰
- 关键词：FOXO3A上皮性卵巢癌恶性程度病理特征
- Hsp90α及SCC在宫颈癌早期诊断及预后监测中的价值被引量：9
- 2020年
- 目的探讨血浆热休克蛋白90α(heat shock protein 90α,Hsp90α)及鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma antigen,SCC)在宫颈癌早期诊断以及预后监测中的价值。方法选取2015年4月~2017年6月我院肿瘤科收治的96例宫颈癌患者作为宫颈癌组,选取同期50例子宫上皮内瘤变患者作为子宫上皮内瘤变组,50例正常健康女性作为正常对照组。宫颈癌组取术前3天、术后3天、术后1周的EDTA-K2抗凝血液标本和促凝血液标本分别2ml,子宫上皮内瘤变组及正常对照组均采取EDTA-K2抗凝血液标本2ml,离心后于-80℃冰箱保存,用化学发光法测定SCC水平,用酶联免疫法测定Hsp90α水平,采用受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC曲线)评估SCC、Hsp90α水平对宫颈癌早期诊断的价值以及在不同肿瘤临床分期、分化程度、是否转移、肿瘤大小等情况下Hsp90α、SCC水平对患者预后价值评估。结果宫颈癌组患者Hsp90α和SCC水平均高于子宫上皮内瘤变组和正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌中血浆SCC的诊断符合率显著低于Hsp90α,差异有统计学意义(P<0.05),Hsp90α阳性率高于SCC阳性率,比较差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌治疗后Hsp90α和SCC水平均有所下降,且与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。随访1年中,8例出现宫颈癌复发,Hsp90α检测水平明显高于与未复发患者,差异有统计学意义(P<0.05);Hsp90α与肿瘤临床分期、分化程度、是否转移、肿瘤大小有关(P<0.05),SCC与肿瘤临床分期有关(P<0.05)。结论血浆Hsp90α和血清SCC水平均可作为宫颈癌的预测指标,但Hsp90α预测效果优于血清SCC水平,血浆Hsp90α可作为宫颈癌的可靠诊断指标,能够作为术后治疗效果评估指标,与肿瘤分期、分级、是否转移有关,两者联合检测可降低误诊率。
- 陈莉萍曹婷李素芬罗莉杨鹰
- 关键词：宫颈癌鳞状细胞癌疗效评估
