国家自然科学基金(31001002)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：代蓉石国庆万鹏程孟庆勇沈思军更多>>
- 相关机构：石河子大学新疆农垦科学院中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- PolⅡ型启动子K14实现组织特异RNAi被引量：3
- 2011年
- RNAi(RNA interference,RNAi)是继基因打靶技术后的一种高效的研究基因功能的方法。细胞学实验和小鼠模型的研究结果表明,PolⅡ型启动子可以实现组织特异的RNA干扰,从而为鉴定基因在特定组织中的功能及作用机理提供了一个强有力的研究方法。为了能将这种方法用于转基因绵羊生产,探讨基因与绵羊毛囊发育的关系及其作用机制等,文章利用PolⅡ型CMV启动子和毛囊组织特异表达的人角蛋白14(K14)基因的启动子驱动eGFP-shRNA融合转录本的生成,从而实现敲低目的基因的表达。体外基因表达沉默效率分析(pEGFP-C1-shRNA和psiCHECK-BMP4双质粒共转染Hela细胞)结果表明,6个干扰序列均能有效地抑制BMP4基因的表达,抑制效率达到60%以上;体内表达沉默分析(只转染pEGFP-K14-shRNA质粒转染小鼠皮肤细胞系JB6-C41)的实验结果与体外分析结果相似,除3#序列外,其余干扰序列对BMP4基因的抑制效率都在60%以上,其中5#序列的效率达到80%以上。siRNA诱导的目标基因沉默中mRNA和蛋白水平的下降显著正相关。结果表明,设计构建的由PolⅡ型启动子K14驱动eGFP-shRNA融合转录本的形成,从而实现RNAi的研究方法是可行的,利用这种方法可以实现在特定细胞中敲低目的基因的表达水平。为在大家畜特别是绵羊中应用RNAi的方法分析目的基因在毛囊发育、对不同类型毛囊生长发育的诱导和调节等作用机理的研究提供一个参考方法。
- 代蓉沈思军万鹏程石国庆孟庆勇刘守仁
- 关键词：RNAI转基因家畜
- 角蛋白启动子荧光素酶表达载体的构建及其表达活性分析被引量：2
- 2011年
- 角蛋白14(K14)和角蛋白5(K5)主要在毛囊基质和复层鳞状上皮基底层的角质细胞里表达。这两个启动子已被广泛应用于毛囊特异表达外源基因的转基因小鼠模型的研究中,为了能将其应用于转基因绵羊生产,探讨基因对绵羊毛囊发育的影响,从人基因组中克隆得到K14和K5启动子,利用不同的报告基因在细胞水平分析各启动子的表达活性。结果表明,这两个启动子在不同细胞系中都能驱动外源基因的表达,而且K14启动子在小鼠皮肤细胞系JB6-C41中的表达活性高于其他细胞。
- 代蓉孟庆勇沈思军石国庆刘守仁
- 关键词：启动子活性荧光素酶角蛋白
- 组织特异RNAi转基因小鼠模型的构建被引量：2
- 2011年
- RNAi是一种行之有效的基因沉默的新方法,被广泛地应用于基因功能的研究、疾病的治疗以及新型疫苗的研制等领域.本研究通过原核显微注射干扰载体的方法制备转基因小鼠.选用皮肤组织特异表达的人源角蛋白14(K14)基因启动子(2000bp)作为表达载体启动子,成功地驱动融合表达载体EGFP-shRNA进行干扰片段前体的转录,进而生成成熟的干扰片段,靶向小鼠BMP4基因使其发生沉默.所得到的转基因小鼠及其杂交后代经PCR和Southern杂交鉴定,结果表明外源基因准确无误地整合到小鼠基因组.Northern杂交结果证明,小干扰RNA在皮肤组织中有较高水平的表达,在肺和肠组织中有较低水平的表达.研究结果表明,利用PolⅡ型(K14)启动子驱动shRNA融合转录本的表达,在特定组织高表达siRNA,从而达到抑制特定组织目的基因表达的技术路线是可行的.同时为利用K14启动子进行毛囊相关基因干扰研究积累了基础数据,为制备组织特异抑制基因表达的转基因大家畜提供了一个参考方法.
- 代蓉沈思军甘尚权毛青青万鹏程郭洪孟庆勇刘守仁
- 关键词：RNAI转基因小鼠模型
- 阿勒泰羊与新疆细毛羊ASIP基因多态性与被毛颜色的相关性被引量：5
- 2014年
- 利用PCR—SSCP方法检测了阿勒泰羊和新疆细毛羊ASIP基因的多态性位点，并分析各SNPs位点与被毛毛色之间的关系。结果表明，阿勒泰羊ASIP基因外显子2（g.100—104bp）存在5碱基丢失（D5：AGGAA），外显子4（g．5172bp：T→A）存在非同义性突变（Ser→Cys）；新疆细毛羊中只发现ASIP基因外显子2（g．100-104bp）存在5碱基丢失（D5：AGGAA）；阿勒泰羊AMP基因2处SNPs与被毛毛色不相关（P〉0．05），而新疆细毛羊ASIP基因5碱基丢失与被毛毛色极显著相关（P〈0．01）。
- 孟浩浩许瑞霞石国庆马春萍张永胜周月娥万鹏程代蓉
- 关键词：新疆细毛羊阿勒泰羊SNPS毛色PCR-SSCP
