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排序方式：

韧皮部特异启动子驱动密码子优化的抗菌肽D基因的植物表达载体构建被引量：9: 2005年; 根据177个GenBank中登录的柑橘编码蛋白密码子用法的分析结果,优化并重新设计和合成了含柑橘偏爱密码子、对柑橘黄龙病有杀灭作用的柞蚕抗菌肽D基因(命名为CAPD),克隆入pUC19克隆载体并经测序验证后,获得了含新抗病基因的重组质粒pUC19-CAPD。用限制性内切酶BamHI和SacI双酶切pUC19-CAPD克隆载体和pBI121植物表达载体的质粒DNA,回收pUC19-CAPD克隆载体中的CAPD基因小片段和pBI121植物表达载体中去掉GUS报告基因的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由CaMV35S组成型启动子(35SP)驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ05);用限制性内切酶BamHI和HindIII双酶切含笋瓜韧皮部特异启动子(PSP)的pUCm-PSP克隆载体和pHZ05植物表达载体的质粒DNA,分别回收pUCm-PSP克隆载体中的PSP小片段和pHZ05植物表达载体中去掉CAPD目的基因上游35SP的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动CAPD目的基因的新植物表达载体(命名为pHZ06)。利用细胞感受态法直接将2个由不同启动子驱动的含CAPD目的基因的新重组植物表达载体分别导入根癌农杆菌LBA4404、GV3101、EHA105和发根农杆菌Ri15834等4个农杆菌菌株中,为利用农杆菌介导的遗传转化技术培育抵抗由韧皮部传导的毁灭性和检疫性病害柑橘黄龙病的新种质奠定了基础。; 胡桂兵张上隆徐昌杰林顺权; 关键词：柑橘密码子优化抗菌肽D基因植物表达载体

笋瓜韧皮部特异性启动子的克隆分析及新型植物表达载体构建被引量：6: 2005年; 根据已报道具韧皮部组织特异性的笋瓜韧皮部蛋白2(PP2)基因序列设计引物,以山西本地种笋瓜叶片基因组DNA为模板,用PCR法扩增得到了长度为966bp的PP2基因启动子片段,克隆入pUCm-T载体后,经鉴定获得了新的重组质粒pUCm-PSP,测序和序列分析表明与两个已报道的片段分别有95%和99%的同源性,推测具有相似的启动子功能。分别用限制性内切酶PstI和BglII双酶切重组质粒pUCm-PSP和由CaMV35S组成型启动子驱动GFP报告基因的双元植物表达载体pCAMBIA1302,分别回收pUCm-PSP重组质粒中的PSP小片段和pCAMBIA1302植物表达载体中去掉GFP报告基因上游CaMV35S组成型启动子的大片段,经连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动报告基因GFP的新型植物表达载体pHZ03。利用细胞感受态法将新植物表达载体分别导入根癌农杆菌EHA105、GV3101、LBA4404和发根农杆菌Ri15834中,为进一步研究其表达功能奠定了基础。; 胡桂兵张上隆徐昌杰林顺权; 关键词：笋瓜植物表达载体

果树转基因研究进展与产业化展望被引量：29: 2003年; 综合有关文献归纳了15年来果树转基因研究成果,其中包括:(1)已实现转基因的果树种类,目前世界和我国的大宗水果苹果、柑橘、梨、桃、葡萄、香蕉、猕猴桃和草莓等均已成功实现遗传转化;(2)通过转基因改变的农艺学性状类型,如抗病虫、抗逆、提高果实贮藏性能、缩短童期和改善果实品质等;(3)对几个重要的遗传转化研究实例作了具体介绍。同时还阐述了转基因果树产业化现状和大田试验现状,探讨了转基因果树产业化进程滞后的原因和发展前景以及促进果树产业化发展可采取的一些策略。; 杨莉徐昌杰陈昆松; 关键词：果树转基因

一种植物表达载体的构建及其在金柑上的瞬时表达被引量：6: 2008年; 以植物表达载体pCambia1301的带内含子的GUS(iGUS)基因替换植物表达载体pBI121中的GUS基因,构建了以pBI121为基础载体并含有iGUS的植物表达载体pLZ13。农杆菌染色表明,pCamiba1301和pLZ13两载体中的iGUS基因均不会导致GUS染色反应。以金柑不同组织为材料,通过农杆菌介导开展瞬时表达研究,结果表明,pLZ13和pCambia1301两载体的iGUS在CaMV35S启动子调控下的表达没有差异,证明构建的pLZ13是一种同时适于瞬时表达和转基因研究的植物表达载体。; 张岚岚刘小花陈昆松徐昌杰; 关键词：金柑启动子转基因植物表达载体

韧皮部特异性启动子的克隆及含绿色荧光蛋白报告基因新植物表达载体的构建被引量：6: 2005年; 用PCR方法扩增得到了长度为966 bp的笋瓜韧皮部蛋白2基因启动子片段,克隆入pUCm-T载体后,获得了新的重组质粒pUCm-PSP.分别用限制性内切酶酶切重组质粒和pCAMB IA1302植物表达载体,经回收、连接、转化和鉴定后,构建了由PSP驱动绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的新型植物表达载体pHZ03.利用细胞感受态法将新植物表达载体分别导入根癌农杆菌EHA105、GV3101、LBA4404和发根农杆菌R i15834中.; 胡桂兵张上隆徐昌杰林顺权; 关键词：笋瓜植物表达载体

金柑遗传体系的建立及应用: 以金柑为材料,建立了其再生和遗传转化体系,获得了20余棵转基因植株。建立了三种转基因检测体系:多重PCR、T—DNA侧翼序列分析和Southern杂交,分别适于抗性芽或植株的早期、中期和后期转基因鉴定。应用所建立的转基因...; 杨莉徐昌杰陈昆松; 关键词：转基因检测; 文献传递

不同种类柑橘的密码子用法分析被引量：12: 2006年; 采用高频密码子分析法,对甜橙C itrus sinensis、温州蜜柑C.unshiu、葡萄柚C.paradisi和柠檬C.lim on等4种柑橘的蛋白质编码基因序列(codon DNA sequence,CDS)进行了分析,计算出了柑橘同义密码子相对使用频率(rela-tive frequency of synonymous codon,RFSC),确定出了4种柑橘的高频率密码子,发现不同种类柑橘偏爱密码子稍有差别.; 胡桂兵张上隆徐昌杰林顺权; 关键词：柑橘密码子用法密码子偏爱性

一种有效纯化低拷贝质粒DNA的改良硅藻土法被引量：3: 2005年; 碱法制备的低拷贝质粒因含有大量杂质而无法获得有效的测序结果。为此,以纯λDNA为样品,对硅藻土纯化DNA的方法进行了优化,表明硅藻土悬液的最佳用量是20μl/μgλDNA,回收率达77.31%。应用此改良硅藻土法纯化一长为14953bp的低拷贝质粒pLZ14,所得质粒纯度达23.87%,比未纯化前提高了11.06倍。经纯化的pLZ14质粒测序信号强、无误认碱基,而未经纯化的质粒测序时信号弱、错误普遍存在。; 余宏傲张岚岚徐昌杰; 关键词：硅藻土盐酸胍质粒 DNA纯化

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浙江省自然科学基金(301291)

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