吉林省牧业管理局资助项目(200902)
- 作品数：12 被引量：32H指数：4
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- 相关机构：延边大学延吉市畜牧防疫站东北农业大学更多>>
- 发文基金：吉林省牧业管理局资助项目吉林省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鹅细小病毒单克隆抗体的制备与鉴定被引量：7
- 2011年
- 为制备鹅细小病毒(goose parvovirus,GPV)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),利用浓缩的GPV免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆后获得一株抗GPV单克隆抗体杂交瘤细胞株4B4。经鉴定,其McAb的重链为IgG1亚型,轻链为κ链。ELISA和Western blotting试验结果表明,获得的4B4株McAb可特异性的识别GPV和GPV-VP3蛋白,表明4B4株McAb识别的表位可能位于GPV VP3蛋白的保守区域。为进一步鉴定GPV的表位和GPV诊断试剂的研究奠定了基础。
- 杜秋明鲁承高建伟赵文婧申峰勇孟其麟
- 关键词：鹅细小病毒单克隆抗体VP3蛋白
- 鹅细小病毒延边株VP1基因真核表达质粒构建及其在Vero细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 根据GenBank已发表的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列,设计并合成1对含有Xho I和BamH I酶切位点的特异性引物,以提取的GPV基因组DNA为模板,经PCR扩增得到了1 163 bp的目的片段,并将该片段克隆至pMD-18T simple载体中,再将其亚克隆至真核表达载体pVAX1中,构建重组表达质粒pVAX1-VP1。经PCR鉴定、酶切分析和序列测定比较,证实了重组质粒的正确性。通过脂质体法将pVAX1-VP1转染Vero细胞,经间接荧光抗体检测,在Vero细胞表面可见特异性荧光。经RT-PCR扩增得1 163 bp的目的片段。该研究为GPV核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 赵文婧鲁承杜秋明高建伟申峰勇张颖李闯袁娜房靖添
- 关键词：鹅细小病毒VP1基因真核表达
- 鹅细小病毒三种疫苗对Balb/c小鼠的免疫效果
- 2010年
- 为了研究鹅细小病毒灭活苗、亚单位疫苗、核酸疫苗3种疫苗对Balb/c小鼠的免疫效果,试验自制了这3种疫苗,对Balb/c小鼠进行3次免疫,应用间接ELISA方法测定体液免疫水平。结果表明:用小鹅瘟灭活苗、小鹅瘟VP3基因亚单位疫苗免疫Balb/c小鼠,在三免后第21天抗体的P/N值达到峰值,分别为8.21,3.56;小鹅瘟VP3基因核酸疫苗在三免后第28天,抗体的P/N值达到峰值,为2.09。说明这3种疫苗中小鹅瘟灭活苗对Balb/c小鼠的免疫效果最好。
- 杜秋明鲁承王暖成贾文影赵文婧申峰勇
- 关键词：鹅细小病毒疫苗免疫效果
- 鹅细小病毒单抗双夹心ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 为建立鹅细小病毒(GPV)检测方法,本研究以免抗GPV IgG为捕获抗体,抗GPV单克隆抗体为检测抗体,通过方阵试验确定了兔抗GPV IgG最适包被浓度为16 mg/L,抗GPV单克隆抗体最佳工作浓度为10.8 mg/L,酶标二抗最佳稀释倍数为1:4 000,建立了检测GPV单抗双夹心ELISA方法,对GPV检测灵敏度达0.312 mg/L。用该法对延边某养鹅场疑似发生小鹅瘟病的252只病死鹅进行检测,结果阳性率为75.79%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率达91.11%。本研究建立的单抗双夹心ELISA方法为GPV的检测和区域流行病学调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。
- 杜秋明鲁承王暖成贾文影赵文婧申峰勇
- 关键词：鹅细小病毒单抗双夹心ELISA
- 鹅细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：5
- 2010年
- 根据GenBank发表的鹅细小病毒(GPV)NS1基因序列设计合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测GPV核酸的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。检测结果表明,该方法线性关系良好,标准曲线的相关系数达到0.998;对初始模板的检出下限为30个拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;与鸭瘟病毒、犬细小病毒、新城疫病毒和鹅副粘病毒均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于2%。用建立的Real-time PCR检测13例GPV感染阳性病例,GPV阳性检出率为100%。表明建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于GPV的病原检测及定量分析。
- 高旭鲁承杜秋明Qiu-ming
- 关键词：鹅细小病毒实时荧光定量PCR检测方法GPV鹅副粘病毒阳性病例
- 小鹅瘟病毒VP3基因的原核表达被引量：2
- 2012年
- 根据GenBank已发表的小鹅瘟病毒B株基因序列,设计并合成1对特异性引物,经PCR扩增得到了1 457bp的目的片段,并将该片段克隆至pMD-18Tsimple载体中,再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-VP3。经0.1mmol/L IPTG诱导,目的蛋白在大肠杆菌中得到表达。Western-blot分析表明,该蛋白具有良好的反应原性。为开发相应的基因工程疫苗奠定了理论基础。
- 赵文婧鲁承黄京爱王暖成朴相哲
- 关键词：小鹅瘟病毒VP3基因
- 鹅细小病毒vp3基因PCR检测方法的建立及应用被引量：1
- 2012年
- 本试验根据GenBank上发表的鹅细小病毒B株基因序列,针对vp3基因设计并合成了一对特异性引物,建立GPV vp3基因的PCR诊断方法。结果表明,该方法扩增的产物与预期大小相符(约654bp),而其他相关病毒均为阴性反应,敏感度为12.4pg。对15份GPV疑似病例检出的阳性率为100%,而琼脂扩散试验(AGP)检出的阳性率为60%。证明建立的PCR方法特异性强、敏感性高,可用于临床病料的快速诊断。
- 张颖高旭鲁承赵文婧
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因PCR
- 鹅细小病毒vp2基因工程亚单位疫苗的免疫试验被引量：1
- 2012年
- 为研究鹅细小病毒(GPV)VP2蛋白基因工程亚单位疫苗对实验动物的免疫效果,本试验对GPV延边分离株的vp2基因进行原核表达,将Western-blot试验鉴定为阳性的表达蛋白进行乳化,免疫BALB/c小鼠,应用ELISA方法监测试验动物的体液免疫水平,以此评价该疫苗的免疫效果。结果表明,在三免后2d,重组蛋白佐剂组检测到的血清OD450nm值达0.687,而生理盐水阴性对照组为0.038,两者差异极显著(P<0.01),提示本研究制备的基因工程亚单位疫苗在试验动物体内产生了VP2抗体水平。
- 高旭张颖鲁承修占伍
- 关键词：鹅细小病毒基因工程亚单位疫苗免疫试验
- 小鼠抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 采用杂交瘤技术,用纯化的鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP3蛋白免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体(mAb),经间接ELISA方法筛选和有限稀释法进行3次亚克隆后获得一株抗鹅细小病毒VP3蛋白杂交瘤细胞株(4E5)。经鉴定,该mAb为IgG1亚型,轻链为κ链。Western blot试验结果表明,获得的4E5mAb可特异性地识别鹅细小病毒VP3蛋白。本试验成功制备了抗鹅细小病毒VP3蛋白单克隆抗体,为研究鹅细小病毒病诊断方法奠定了基础。
- 赵文婧鲁承杜秋明高旭高建伟申峰勇张颖袁娜房靖添
- 关键词：鹅细小病毒单克隆抗体VP3蛋白
- 鹅细小病毒强毒YBLJ分离株的分离鉴定与vp3基因的进化分析被引量：10
- 2011年
- 为分离鹅细小病毒(GPV),本研究将疑似GPV感染鹅的组织样品接种SPF鹅胚进行病毒分离和鉴定。结果显示,第4代病毒对12日龄鹅胚的平均致死时间为96 h,ELD50为10-4.6/0.5 mL,PCR和琼脂扩散试验均呈GPV阳性反应,负染电镜下可观察到直径20 nm～25 nm的圆形或六角形病毒粒子,病毒可以被GPV标准阳性血清完全中和,回归雏鹅后表现典型的GP临床症状和特征性病理变化,发病率和致死率均为100%。分离株GPV的vp3基因全长1 605 bp,编码534个氨基酸,与国内外有代表性11株GPV vp3基因的核苷酸同源性为94%～98%,氨基酸同源性为96%～99%。将该分离病毒命名为GPV YBLJ分离株。
- 高旭张颖鲁承
- 关键词：鹅细小病毒VP3基因
