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排序方式：

旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的克隆与分析被引量：5: 2008年; 以旋毛虫感染猪血清为抗体探针，对旋毛虫3日龄成虫cDNA文库进行免疫筛选，将获得的阳性克隆进行测序，用分子生物学软件对所得cDNA序列进行了分析。序列分析结果显示，阳性克隆Zh68cDNA全长为1372bp，含有1个1287bp的完整的开放阅读框架，编码由429个氨基酸组成的多肽，理论分子质量为47．5ku，等电点为8．45。SMART分析表明，1～18位氨基酸为信号肽序列，37～277位氨基酸为典型的丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶类结构域，其中His88、Asp142、Ser233为催化中心的3个主要氨基酸残基，78～80位氨基酸为N-糖基化位点（NCS），另外还有6个保守的Cys形成二硫键。BLASTn同源性分析表明，与其他生物丝氨酸蛋白酶的基因序列无明显的同源性，为1个新的cDNA分子。BLASTp蛋白质同源性分析表明，与丝氨酸蛋白酶的同源性为30％左右。Southern—blot杂交表明，此基因在旋毛虫基因组中属于多基因家族，具有基因多态性。cDNA的PCR结果表明，此基因在旋毛虫肌幼虫、新生幼虫及成虫期均有表达。; 李莲瑞付宝权卢强韩文瑜刘明远; 关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因克隆

旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选: 目的获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因方法以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA 文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序及分析.结果从4.5×10旋毛虫新生幼虫cDNA 文库重组子中共获得158个阳性...; 吴秀萍付宝权刘明远张亚兰原丽红李莲瑞P.Boireau; 关键词：旋毛虫 CDNA文库免疫筛选; 文献传递

旋毛虫肌幼虫p43cDNA的克隆及鉴定被引量：9: 2005年; 目的克隆旋毛虫肌幼虫p43cDNA并对其表达的融合蛋白酶活性进行鉴定与分析。方法用PCR技术从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因,克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希菌NovaBlue,序列测定后克隆到原核表达载体pET28a并转入表达菌DE3中。经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后提取包涵体并复性,通过降解双链λDNA测定其融合蛋白脱氧核糖核酸酶II(DNase II)活性。结果成功克隆到p43 cDNA序列,该cDNA序列与美国发表的存在两个核苷酸的变异,分别为第210位的C变为T,第604位的A变为G。基于3名研究者从旋毛虫T.spiralis美国分离株获得的序列相同、6名国内研究者(含本课题组)从T.spiralis中国分离株获得的序列也相同,由此可以确定这两个核苷酸的变异为T.spiralis中国分离株特异性和特征性单核苷酸多态性(SNP)标记。p43重组蛋白能够降解双链λDNA,表明其有DNase II酶活性。结论成功克隆到p43cDNA,T.spiralis中国分离株的p43cDNA具有两个SNP标记,其表达的重组蛋白具有DNase II酶活性。; 郭恒李莲瑞刘明远吴秀萍孙树民付宝权高长玲卢强陈启军P.Boireau; 关键词：旋毛虫克隆

旋毛虫肌幼虫p53cDNA的克隆及鉴定被引量：5: 2007年; 根据GenBank中旋毛虫53000抗原基因的序列设计引物,用PCR技术直接从旋毛虫肌幼虫cDNA文库中扩增靶基因p53 cDNA,将其克隆到pMD-18T载体,转化至大肠埃希氏菌NovaBlue后测序分析,结果表明,克隆到1176bp的p53 cDNA,共编码391个氨基酸。序列分析表明,p53 cDNA序列与GenBank中的旋毛虫p53基因序列相比共有12个核苷酸发生改变,二者的同源性为98%,所编码蛋白质氨基酸序列的同源性为98%。将其克隆到原核表达载体pET28a并转化至表达菌BL21star(DE3),经IPTG诱导表达后获得约48000的重组蛋白。Western blotting检测证实,p53重组蛋白可以被旋毛虫感染猪血清识别,具有很好的抗原性。; 孙树民吴秀萍王学林付宝权卢强李莲瑞郭恒P.Boireau陈启军刘明远; 关键词：旋毛虫 P53 CDNA 克隆抗原性

旋毛虫新生幼虫脱氧核糖核酸酶Ⅱ基因家族的筛选和分析被引量：3: 2009年; 利用旋毛虫新生幼虫期特异性基因N5cDNA作为探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行筛选,并将阳性克隆全部送测序公司测序。对测序结果进行序列分析后,根据信号肽不同分为15种基因。NCBI BLAST检索表明,其中有13种基因均为旋毛虫未知基因序列,并且氨基酸序列最前面均包含有1个信号肽,属于分泌性蛋白。InterProScan检索表明,15种氨基酸序列均编码脱氧核糖核酸酶Ⅱ（DNaseⅡ）,均含有DNaseⅡ的保守序列。通过互联网将编码蛋白序列输入CLUSTAL W数据库,检索结果表明,这些编码的脱氧核糖核酸酶Ⅱ蛋白质同源性高达85%-98%。; 李莲瑞吴秀萍付宝权卢强王学林刘明远; 关键词：旋毛虫

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国际科学基金(B3525-1)