云南省应用基础研究基金(2011FB048)
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 相关作者：董岩岩吴倩唐湘华李俊俊周峻沛更多>>
- 相关机构：云南师范大学聊城职业技术学院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程更多>>
- Penicillium sp.JF09酸性果胶酶的发酵条件、酶学性质及其在苹果汁澄清中的应用潜力研究被引量：4
- 2013年
- 对一株产酸性果胶酶的菌株Penicillium sp.JF09的发酵条件、酶学特性及其在苹果汁澄清中的应用潜力进行研究。该菌株发酵产果胶酶的培养基优化后,碳源为1.0%的柚子皮粉,氮源为0.5%的蛋白胨,起始pH值为5.5,发酵时间75~147h,产果胶酶酶活力为16.5U/mL,比活力为199.5U/mg。该果胶酶最适反应温度为60℃,在10~70℃范围内具有活性;最适反应pH值为5.0,酶在pH3.0~5.5范围内活性保持83%以上并在pH3.0~8.0范围内保持稳定;10mmol/L的Hg2＋、Pb2＋、Cu2＋、Fe2＋、Ag＋及SDS对该酶有不同程度的抑制作用,10mmol/L的Mg2＋、Mn2＋对该酶有略微的促进作用,不同浓度的Ca2＋对酶活力有较大影响（最适浓度为0.2mmol/L）。在低温和高温下（10~60℃）添加JF09果胶酶对鲜榨苹果汁都有显著澄清作用,反应1h后澄清率可达88.8%。
- 吴倩周峻沛唐湘华李俊俊董岩岩黄遵锡
- 关键词：发酵培养基优化酶学特性苹果汁澄清
- 黑颈鹤粪便分离菌Arthrobacter sp. GN14的α-半乳糖苷酶基因克隆、表达与酶学特性被引量：6
- 2012年
- 【目的】克隆高原唯一珍惜鹤类——黑颈鹤粪便分离菌Arthrobacter sp.GN14的α-半乳糖苷酶基因agaAGN14,并对该酶进行序列分析、系统发育分析和重组酶的酶学特性分析。【方法】利用简并PCR和GCTAIL-PCR方法获得agaAGN14全长,并对其氨基酸序列(AgaAGN14)进行比对和neighbor-joining系统发育树的构建。将agaAGN14重组到载体pET-28a(+)中并转化到Escherichia coli BL21(DE3)中异源表达。利用组氨酸标签纯化重组α-半乳糖苷酶rAgaAGN14并进行酶学性质分析。【结果】agaAGN14全长2109 bp,GC含量66.8%,编码702个氨基酸(77.5 kDa)。AgaAGN14与数据库中序列的最高一致性为53.7%,与其余胃肠道环境α-半乳糖苷酶的一致性<43%。系统发育分析将AgaAGN14聚于具有催化域KWD和SDXXDXXXR的α-半乳糖苷酶分支,与土壤微生物来源α-半乳糖苷酶距离相对较近,而与其余胃肠道环境α-半乳糖苷酶距离相对较远。rAgaAGN14可水解pNPG、棉籽糖、密二糖、水苏糖、菜粕和棉籽粕,表观最适pH为6.5,在pH 6.0-pH 9.0的范围内稳定并维持50%以上的酶活性。rAgaAGN14的表观最适温度为45℃,在10℃、20℃和37℃内稳定并分别具有约28%、30%和80%的酶活。在45℃pH 6.5条件下,rAgaAGN14对pNPG的Km、Vmax和kcat分别为0.41 mmol/L、18.28μmol/min/mg和25.36 s-1。rAgaAGN14受Ag+、Hg2+及SDS抑制,受K+、Ca2+、Mn2+、Fe3+、Ni2+、Cu2+和β-mercaptoethanol部分抑制,受Co2+、Pb2+、Zn2+、Mg2+、Na+和EDTA的影响较小。【结论】首次报道从黑颈鹤粪便中分离到Arthrobacter菌,并对该属细菌α-半乳糖苷酶进行序列分析、系统发育分析、异源表达和重组酶的酶学特性分析。rAgaAGN14序列较新颖,其酶学特性可能是同时适应黑颈鹤肠道环境和高原淡水湿地环境的结果。
- 周峻沛潘璐李俊俊唐湘华黄遵锡
- 关键词：黑颈鹤粪便ARTHROBACTER酶学特性
