北京市科技计划项目(H020920030390)
- 作品数：6 被引量：98H指数：4
- 相关作者：孙梅珍张亚卓王忠诚孙彦辉赵澎更多>>
- 相关机构：北京市神经外科科研究所首都医科大学北京市垂杨柳医院更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- shRNA表达载体特异性抑制人脑胶质瘤细胞BT325绿色荧光蛋白基因的表达被引量：1
- 2005年
- 目的探讨绿色荧光蛋白(GFP)特异性发夹结构RNA (shRNA)对人类胶质瘤BT325细胞系GFP基因表达的抑制作用。方法设计并合成针对GFP基因的shRNA序列,与报告基因质粒pEGFP-N1共转染,选择最佳转染比例,荧光显微镜下观察GFP表达的效率和对GFP的抑制效应。结果质粒pSIREN-RetroQ-RNAi经双酶切得到6 kb和100 bp条带,结合测序验证,与实验设计的shRNA长度相符。质粒DNA与XP-1转染比例为1∶2.5时GFP表达最强。BT325细胞干扰48 h时GFP表达显著减少。结论BT325细胞系中存在RNA干扰现象,且干扰效果特异、稳定;本实验为研究基因功能提供了新的策略。
- 赵澎张亚卓孙梅珍
- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达调控
- RNA干扰技术逆转神经胶质瘤细胞多药耐药性被引量：22
- 2006年
- 目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术逆转神经胶质瘤细胞多药耐药性。方法根据多药耐药基因1(MDR1)的碱基序列设计并合成短发夹RNA(shRNA),构建逆转录病毒质粒载体,用阳离子脂质体法体外转染BT325细胞株,以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达作为对照。采用定量PCR、Northernblot检测转染前后MDR1mRNA的表达,Westernblot检测蛋白表达;使用CCK8试剂盒对转染后的细胞进行化疗药物敏感性试验,评价RNAi对多药耐药性的逆转作用。结果成功构建RNAi质粒载体。共转染实验组RT PCR定量MDR1mRNA相对表达水平均有所下降(P<0.05);Northernblot表明,转染48h细胞干扰最强;Westernblot显示,siRNA各转染组P糖蛋白(P gp)的表达分别降低12.9%、30.3%和4.8%,在48h抑制最强;而药物敏感试验显示,转染siRNA后细胞对药物的敏感性明显增强。结论RNAi能够明显抑制神经胶质瘤细胞系MDR1mRNA和P gp蛋白的表达,进而对多药耐药性发挥明显的逆转作用,为基因治疗提供了一种新的手段。
- 赵澎胡微张亚卓孙梅珍何乐
- 关键词：神经胶质瘤RNA干扰多药耐药性
- MGMT在脑胶质瘤组织中的表达及其与患者生存期的关系被引量：46
- 2004年
- 背景与目的:目前的研究已经证实DNA修复酶——6-氧-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNAmethyltransferase,MGMT)在脑胶质瘤组织中的表达与肿瘤的耐药性有一定的关系,并且能够影响肿瘤的化疗效果。本研究通过分析MGMT在脑胶质瘤组织中的表达及其与患者生存期的关系,为基于耐药机制上的脑胶质瘤分子分类提供参考资料。方法:用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测311例脑胶质瘤石蜡标本中MGMT的表达情况,并对所有患者进行手术后的5年随访。结果:MGMT表达阳性者126例,占40.51%(126/311)。其中,星形细胞瘤中阳性率为50.41%(61/121),少枝胶质细胞瘤中为25.71%(18/70),少枝星形细胞瘤中为28.13%(18/64),胶质母细胞瘤中为51.79%(29/56);在Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤中,MGMT表达的阳性率为36.56%(68/186),而在Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中为46.40%(58/125),经χ2检验分析,两者之间有显著性差异(P<0.001);将MGMT的表达与患者生存期的关系绘制成Kaplan-Meier生存曲线,并进行log-rank分析,MGMT表达阳性者与阴性者之间的差异有显著性(P<0.05)。结论:MGMT在脑胶质瘤的异常表达与肿瘤的组织类型、病理级别有关,MGMT表达阳性患者的生存期明显低于表达阴性的患者。
- 孙彦辉张亚卓王忠诚孙梅珍赵东海
- 关键词：胶质瘤MGMT组织芯片生存期
- 脑胶质瘤标本库的初步建立及应用价值被引量：18
- 2006年
- 目的初步建立脑胶质瘤标本库,探讨其应用价值。方法对脑胶质瘤患者进行手术前采静脉血,提取的基因组DNA保存在4℃冰箱内。在肿瘤切除术中,获取部分新鲜肿瘤组织标本和正常脑组织标本,保存在液氮中。收集进行组织病理学检查后剩余的肿瘤组织,制作成石蜡标本保存。在患者术后1年开始对其进行随访。采用生物芯片技术,对与胶质瘤一些相关的分子生物学指标进行初步研究。结果全血中提取的基因组DNA和冻存的肿瘤组织标本中提取的总RNA其 OD260／280比值都在1．7-2．1之间,能够满足胶质瘤分子生物学研究的需要。结论初步建立的脑胶质瘤标本库能够为肿瘤的分子生物学研究提供标本和相关资料来源。
- 孙彦辉李庆国王忠诚张亚卓王红云孙梅珍
- 关键词：胶质瘤标本库生物芯片分子生物学
- DNA拓扑异构酶在人脑胶质瘤中的表达及与患者生存期的关系被引量：1
- 2004年
- 目的:通过分析DNA拓扑异构酶(DNAtopoisomerase,TopoⅡ)在脑胶质瘤的表达及与患者生存期的关系,为基于耐药机制上的脑胶质瘤分子分类奠定基础。方法:通过组织芯片技术和免疫组织化学方法分析了1997-01/1998-12北京天坛医院收治并接受手术治疗的原发性脑胶质瘤患者306例的石蜡标本中TopoⅡ的表达情况,并对所有患者进行了手术后的5年生存期随访。结果:TopoⅡ表达阳性者98例,占32.0%,其平均年龄和性别与表达阴性者进行比较,差异均无显著性意义(P>0.05)。在119例星形细胞瘤中TopoⅡ表达阳性率为25.2%,在69例少枝胶质细胞瘤中为26.1%,在64例少枝星形细胞瘤中为37.5%,在54例胶质母细胞瘤中为48.2%;在183例Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤中TopoⅡ的表达阳性率为23.0%,而在123例Ⅲ～Ⅳ级中阳性率为45.5%,经χ2检验分析,差异具有显著性意义(P<0.05)。将TopoⅡ不同表达患者的生存期绘制成Ka-plan-Meier生存曲线,并进行Log-ranktest分析,差异具有显著性意义(P<0.05)。结论:TopoⅡ在脑胶质瘤的表达与患者的年龄、性别无关,而与肿瘤的组织类型、恶性程度有关,其中以胶质母细胞瘤中的阳性表达率最高,并且与患者的生存期相关。
- 孙彦辉张亚卓王忠诚孙梅珍赵东海
- 关键词：神经胶质瘤组织细胞学制备技术存活率
- MDR1小干扰RNA调节人脑多形性胶质母细胞瘤细胞系BT325的药物敏感性被引量：11
- 2005年
- 背景与目的:胶质瘤的治疗一直是困扰着医学界的一大难题,在药物治疗过程中出现的多药耐药是化疗失败的重要原因。其中由MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是关键因素。本实验拟探讨MDR1小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)对人脑多形性胶质母细胞瘤耐药细胞BT325药物敏感性的调节作用。方法:以BT325细胞作为研究对象,设计3条67nt寡核苷酸序列并分为MDR1A组、MDR1B组和MDR1C组,经质粒扩增提取测序,转染于对数生长期的BT325细胞。嘌呤霉素筛选转染siRNA成功的细胞。RT-PCR检测转染前后MDR1mRNA水平。免疫组化和流式细胞仪分析P-gp的表达,对转染后的细胞进行药敏实验。结果:转染后的细胞呈指数倍生长。RT-PCR结果显示,转染MDR1siRNA后,BT325细胞MDRmRNA有不同程度的降低,其中MDR1A组、MDR1B组、MDR1C组分别为0.18±0.05、0.30±0.09和0.36±0.13,而对照组0.76±0.06(P<0.001)。流式细胞仪及免疫组化表明,正常细胞P-gp的表达率为85.73%,而转染组表达率下降至1.44%。药敏实验显示,阿霉素、长春新碱对转染MDR1siRNA的BT325细胞的IC50均有不同程度降低,且出现凋亡峰(P<0.05),MDR1A组、MDR1B组和MDR1C组G0/G1期细胞较正常组分别增加了13.55%、14.53%和1.46%(P<0.05)。结论:MDR1小干扰RNA可以在转录后水平对多药耐药进行调节,使MDR1基因表达下调,提高对药物的敏感性,诱导细胞凋亡。
- 赵澎张亚卓孙梅珍
- 关键词：脑肿瘤胶质母细胞瘤小干扰RNA多药耐药
