浙江省医药卫生科学研究基金(2005A055)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：周美霞谢鑫友张钧马春芳乐志安更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属邵逸夫医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- NNMT基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2006年
- 目的利用pGEX-4T-2表达系统表达制备尼克酰胺N-甲基转移酶(NNMT)抗原。方法根据NCBI核苷酸数据库编码为gi:12652950人NNMTcDNA序列,设计合成编码NNMT的DNA引物,并分别在5'端和3'端设计BamHI和XhoI位点,利用RT-PCR从人肝组织中克隆NNMT基因,经T-A克隆、亚克隆至pGEX-4T-2表达载体,重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR(DE3),经异丙基-β-D-硫代乳糖苷诱导表达,Glu-tathioneSepharose4B亲和层析制备融合蛋白(GST-NNMT)。通过DNA测序来证实质粒pGEX-4T-2DNNMT的正确性,SDS-PAGE电泳以及Western-blot判断GST-NNMT蛋白的准确性。结果限制性内切酶和DNA测序结果表明,编码NNMT蛋白的DNA序列准确插入到pGEX-4T-2多克隆位点,成功构建表达质粒pGEX-4T-2DNNMT。菌液超声破碎后,融合蛋白主要存在于裂解上清液中,表达量约占菌体总蛋白表达量的20%,每升菌液可表达融合蛋白约4.5mg。Western-blot证实制备的蛋白为GST-NNMT。结论成功地利用基因重组技术制备了NNMT,为制备抗NNMT单克隆抗体和ELISA试剂盒打下基础。
- 马春芳张钧谢鑫友周美霞
- 关键词：抗原融合蛋白表达
- 尼克酰胺-N-甲基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
- 2008年
- 尼克酰胺N-甲基化酶（nicotinamide N—methytransferase，NNMT）是S-腺苷-L一蛋氨酸依赖的胞质酶。其主要的生物学作用是参与生物转化，催化一些吡啶衍生物，如吡啶、喹林、β-咔林等的甲基化。这种酶存在人体内多种组织中，其中在肝脏组织中表达量最大，而在其他组织，如。肾脏、肺、骨骼肌、心脏、脑组织仅有微量表达。
- 杨肃文张钧周美霞乐志安谢鑫友
- 关键词：甲基转移酶尼克酰胺单克隆抗体肝脏组织甲基化酶
