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反义寡聚脱氧核苷酸抑制脑胶质瘤多药耐药基因1的表达被引量：1: 2005年; 目的研究多药耐药基因1(M D R1)反义寡聚脱氧核苷酸对胶质瘤耐药细胞系C6/adr中M D R1表达的抑制作用。方法以胶质瘤细胞株C6/adr作为胶质瘤体外耐药模型,针对M D R1基因m R NA的A UG起始区-9～+6序列合成反义和相应的正义寡聚脱氧核苷酸,均经硫代磷酸化修饰。反义寡聚脱氧核苷酸(M D R1-AS)序列为5'-CTCCATCA CCAC CTC-3',正义寡聚脱氧核苷酸(M D R1-S)序列为5'-G AG GTG G TG ATG G AG-3'。在脂质体介导下M DR1-A S、M D R1-S转染C6/adr细胞,48h后利用形态学观察和噻唑蓝快速比色法检测M D R1-AS的细胞毒性作用;半定量R T-PCR检测M DR1-A S处理前后的M DR1m RN A的差异表达;流式细胞术分析P糖蛋白(P-gp)的阳性细胞率。结果M D R1-AS对C6/adr细胞无毒性作用;M D R1-AS处理后M D R1m RN A的差异表达由处理前的106%降至30.44%;P-gp阳性表达率亦由处理前的100%降至32.77%。结论M D R1反义寡聚脱氧核苷酸可有效抑制M D R1m R N A及P-gp的表达,从而为基因治疗耐药胶质瘤提供了实验依据,有望开发成为逆转胶质瘤耐药的反义药物。; 孔建新宋千刘延鹏王成伟张庆林; 关键词：胶质瘤反义寡聚脱氧核苷酸多药耐药

反义寡核苷酸抑制大鼠胶质瘤多药耐药细胞株中Pgp相关基因表达的实验研究: 2004年; 目的通过研究反义寡核苷酸对大鼠胶质瘤多药耐药细胞株C6/adr中Pgp相关基因表达的抑制作用,探讨寡核苷酸在细胞内的代谢过程.方法根据MDR-1基因序列合成反义寡核苷酸转染胶质瘤耐药细胞,应用RT-PCR、流式细胞仪等方法,分别在转染后6、12、24、48h对其进行MDR-1mRNA水平及Pgp含量的检测.结果流式细胞及RT-PCR结果显示转染后6h即可发现胶质瘤耐药细胞Pgp和MDR-1 mRNA减低,减低程度与转染后的检测时间相关,12～24h减低程度最为显著(P＜0.05),48h后恢复至转染前的水平.结论反义寡核苷酸抑制大鼠胶质瘤细胞的PgP表达和减低MDR-1 mRNA水平具有明显的细胞内的代谢过程,了解其作用的规律性有助于选择适宜的用药时机,更大限度地提高疗效.; 张健张庆林王成伟孔建新郭华刘福生陶荣杰马道新; 关键词：胶质瘤反义寡核苷酸多药耐药细胞株 MDR-1 相关基因表达

组胺诱导胶质瘤原代培养细胞凋亡的实验研究被引量：4: 2005年; 目的观察组胺诱导人脑胶质瘤原代培养细胞凋亡的作用,探讨组胺诱导人脑胶质瘤原代培养细胞凋亡与钙离子内流之间的关系。方法取手术中获得的新鲜脑胶质瘤组织,加入含10%小牛血清的1640培养液中培养;取生长良好的细胞分别加入含0.01mg/ml,0.05mg/ml和0.1mg/ml不同浓度组胺的培养液,进行细胞的原代培养。激光共聚焦显微镜检测细胞膜内游离钙离子浓度;流式细胞仪检测不同浓度组胺作用下细胞的凋亡率。结果加入含0.05mg/ml和0.1mg/ml组胺培养液的人脑胶质瘤原代培养细胞内游离钙离子浓度明显升高,诱导细胞凋亡,细胞凋亡的发生在一定范围内与加入的组胺呈剂量、时间依赖关系。结论组胺通过增加人脑胶质瘤原代培养细胞内游离钙离子浓度诱导细胞凋亡的发生。; 江玉泉李冰姜政徐卫萍刘福生张庆林; 关键词：组胺诱导细胞内游离钙离子浓度钙离子内流胶质瘤组织小牛血清凋亡率

胶质瘤多药耐药细胞株大鼠动物模型的建立及其生物学性质被引量：1: 2004年; 目的建立神经胶质瘤多药耐药细胞株C6/adr及其原始细胞株C6种植在S-D大鼠脑内的动物模型,对照研究其生物学性质。方法体外培养神经胶质瘤多药耐药细胞株C6/adr及其原始细胞株C6,在磁共振连续动态监测下,进行大鼠脑内接种,于接种当天、第3天以及接种后每周进行磁共振随访检查,并对同期大鼠进行组织活检,观察接种后肿瘤大小变化、荷瘤大鼠的生存期。结果体外培养的神经胶质瘤多药耐药细胞株接种大鼠4周以后出现明显的颅内压增高症状,磁共振阳性结果远早于症状的出现,能更准确地动态显示肿瘤在脑内的生长情况,接种后同期病理结果证实了磁共振影像学表现。C6和C6/adr细胞大鼠动物模型的生长特性相似,两者接种后同期的肿瘤大小、生存期无显著差异(P>0.05)。结论应用磁共振对大鼠动物模型进行动态监测,结合同期的病理切片,能够全面了解活体肿瘤的生长情况,并可确立大鼠脑内肿瘤生长的早、中、晚分期,为体内实验的进一步深入研究提供重要的工具和必要的基础。; 张健张庆林王成伟于骀飞郭华孔建新陶荣杰刘福生; 关键词：胶质瘤多药耐药磁共振

反义肽核酸逆转人神经母细胞瘤多药耐药性的实验研究: 2005年; 　目的　探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药性(MDR)的逆转作用。方法　以人MDR 1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK N SH。应用流式细胞术、RT-PCR、MTT等方法分别检测反义PNA的转染效率、转染前后细胞P 糖蛋白(P gp)、MDR 1基因mRNA的表达以及对化疗药物的敏感性。结果　荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,且呈浓度依赖性。两反义PNA均使SK N SH细胞P gp表达明显降低,阿霉素和长春新碱对细胞的半数抑制浓度值明显下降,MDR 1mRNA表达轻度降低。而PNA1转染对照组C6 /adr细胞后,上述变化不明显。结论　PNA DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取,特异序列的反义PNA可有效逆转神经母细胞瘤的MDR特性。; 郭华张庆林王成伟张健孔建新刘福生马道新卞继峰; 关键词：神经母细胞瘤逆转多药耐药性 P-GP MDR

MGMT反义RNA真核表达载体的构建与鉴定被引量：2: 2002年; 目的：探讨反义ＲＮＡ逆转胶质瘤细胞耐药的可能性，构建ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的真核表达载体。方法：以ＸｈｏⅠ和ＰｖｕⅡ双酶切质粒ｐＨＭ１４，回收１７８ｂｐ的片段，定向插入以ＨｐａⅠ和ＸｈｏⅠ双酶切ｐＬＸＳＮ所获得的线性化载体，构建针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ５＇端的反义表达载体ｐＬａＭＴ５ＳＮ；以ＥｃｏＲⅠ单酶切ｐＨＭ１４，回收７７９ｂｐ的片段，插入以ＥｃｏＲⅠ单酶切ｐＬＸＳＮ并经ＣＩＡＰ去磷酸化的线性载体，构建针对ＭＧＭＴｍＲＮＡ全长序列的反义表达载体ｐＬａＭＴＳＮ。结果：ｐＬａＭＴ５ＳＮ经ＨｉｎｄⅢ酶切可见３７０ｂｐ的片段；ｐＬａＭＴＳＮ经ＰＣＲ扩增证明目的片段反向插入ｐＬＸＳＮ，鉴定结果表明构建成功。结论：成功构建了两个ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ的真核表达载体，为研究ＭＧＭＴ反义ＲＮＡ逆转胶质瘤耐药细胞的耐药表型提供了良好的实验材料。; 金澎张庆林王成伟庞琦孔建新; 关键词：MGMT 反义RNA 真核表达载体逆转录病毒载体

反义肽核酸阻断人神经母细胞瘤多药耐药相关蛋白P-糖蛋白的表达被引量：5: 2005年; 目的探讨反义肽核酸(PNA)的细胞转染方法及其对体外培养的神经母细胞瘤多药耐药(MDR)相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法以人MDR-1基因mRNA为靶点设计合成两反义PNA序列,利用PNA-DNA杂交,阳离子脂质体介导转染神经母细胞瘤耐药细胞株SK-N-SH。采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和高效液相色谱等方法分别检测反义PNA的转染效率,转染前后细胞P-gp、MDR-1基因mRNA的表达及细胞内阿霉素(ADM)浓度。结果荧光标记的反义PNA转染肿瘤细胞后,细胞平均荧光强度显著增强,呈浓度依赖性。两反义PNA均使SK-N-SH细胞P-gp表达明显降低,MDR-1mRNA表达轻度降低,细胞内ADM聚集浓度明显增加。结论PNA-DNA杂交阳离子脂质体转染法可有效增加细胞对PNA的摄取,特异序列的反义PNA可在一定程度上阻断神经母细胞瘤MDR相关蛋白P-gp的表达。; 郭华张庆林张健王成伟孔建新刘福生马道新卞继峰; 关键词：神经母细胞瘤多药耐药性肽核酸反义

MGMT反义RNA对人脑胶质瘤耐药性的逆转被引量：1: 2003年; 目的探讨O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)反义RNA对人脑胶质瘤细胞MGMT表达的调节作用。方法将分别为针对MGMTmRNA5’端和全长序列的反义表达载体pLaMT5SN和pLaMTSN,分别导入U251/BCNU耐药细胞,经G418筛选产生稳定抗性克隆aMT5U和aMTU;分别将正义表达载体pLMTSN和空载体pLXSN导入U251/BCNU耐药细胞,经G418筛选产生稳定抗性克隆MTU和XU作为对照。观察转染后的U251/BCNU细胞对MGMT表达的调节作用及U251/BCNU细胞对BCNU敏感性的影响。结果经RT-PCR检测显示,pLaMT5SN和pLaMTSN可在一定程度上降低MGMTmRNA表达水平;MTT检测显示,aMT5U和aMTU细胞对BCNU的敏感性分别较未转染细胞提高7倍和2倍,表明pLaMT5SN和pLaMTSN可在一定程度上提高U251/BCNU细胞对BCNU的敏感性。结论MGMT反义RNA能够在一定程度上抑制脑胶质瘤细胞MGMT的表达水平,提高肿瘤细胞对亚硝基脲类药物的敏感性。; 张庆林金澎刘福生魏林王成伟孔建新; 关键词：神经胶质瘤鸟嘌呤药物耐受性

脑胶质瘤生物学特性的实验研究被引量：2: 2003年; 为探讨脑胶质瘤生物治疗的新方法,本研究从四个不同方面对脑胶质瘤的生物学特性进行了研究。结果表明,人脑胶质瘤存在IL-6的自分泌环路,打断该环路可抑制脑胶质瘤的生长;脑胶质瘤组织和脑胶质瘤细胞均存在明显的Th2类细胞因子优势表达,Th2向Th1方向逆转后可以抑制脑胶质瘤细胞的增殖;红霉素在逆转耐药中以100μg/ml疗效最佳;血管生长抑制因子(angiostatin)不仅能在体外抑制内皮细胞生长,而且在体内亦有明显的抑瘤作用。上述研究结果为脑胶质瘤的治疗提供了新的思路,将有望应用于临床,提高脑胶质瘤患者的治疗效果。; 李刚张庆林王洁贞刘福生胡永生王成伟李新钢庞琦; 关键词：脑胶质瘤生物学特性基因

高浓度谷氨酸诱导胶质瘤细胞凋亡及其机制被引量：2: 2007年; 目的研究高浓度谷氨酸对原代培养人脑胶质瘤细胞的凋亡诱导作用,进一步探讨其凋亡的可能机制。方法对新鲜的人脑胶质瘤进行体外原代培养,不同浓度的谷氨酸作用不同时间,形态学观察;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率;激光共聚焦显微镜检测细胞膜内游离钙离子的浓度变化。结果原代培养胶质瘤细胞的生长抑制率随谷氨酸浓度的增加呈递增趋势。25、50和100mmol/L谷氨酸作用胶质瘤细胞48h的凋亡率分别为9.65%、31.13%和20.35%。脑胶质瘤原代培养细胞内钙离子浓度在谷氨酸作用后明显升高,与对照组相比有显著性差异(P<0.01);但不同浓度组、24h和48h组之间钙离子的浓度无显著性差异(P>0.05)。结论高浓度的谷氨酸可诱导原代培养人脑胶质瘤细胞凋亡,凋亡率在一定范围内呈明显的剂量依赖性。钙离子在谷氨酸诱导的细胞凋亡中起重要作用。; 江玉泉姜政徐卫萍李新钢张庆林; 关键词：谷氨酸原代培养胶质瘤钙离子

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