国家自然科学基金(30571128)
- 作品数：12 被引量：54H指数：6
- 相关作者：何水林林明徐波曹蕾王育娜更多>>
- 相关机构：福建农林大学井冈山大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 辣椒Rop cDNA分离及其序列分析被引量：3
- 2008年
- 从cDNA文库中分离获得1个cDNA阳性克隆,测序和序列分析结果表明,其长度为1 141 bp,含有1个长度为197 aa的开放读码框架,与烟草等植物的Rop有较高的同源性,该cDNA是从UV处理的辣椒cDNA文库中分离获得的,可能与辣椒适应UV辐射胁迫有关。该cDNA的分离为进一步研究其在辣椒适应UV辐射防御反应的分子机理研究奠定了重要的基础。
- 官德义陈雄邱爱莲林明王育娜曹蕾黄木坤王梅何水林
- 关键词：PCR
- 辣椒疫霉作用下叶绿素a/b结合蛋白的表达被引量：4
- 2008年
- 从基于cDNA-AFLP分析的辣椒应答疫霉侵染的表达谱中找到1个特异表达基因的序列;利用这个序列设计引物,采用基于PCR技术的96孔文库筛选方法,从疫霉处理的辣椒cDNA文库中筛选出这个应答辣椒疫霉侵染的候选基因的全长cDNA;经生物信息学分析,推测这个长度为1022 bp的候选基因为辣椒叶绿素a/b结合蛋白(chlorophyll a/b binding protein,cab)基因;并利用荧光定量PCR法检测cab在疫霉侵染下的表达情况。
- 林明贺俐徐波官德义牟少亮何水林
- 关键词：辣椒辣椒疫霉CDNA-AFLP实时荧光定量PCR
- 辣椒组织培养再生体系的建立与应用被引量：6
- 2006年
- 综述了辣椒再生体系的建立及其转基因等方面的研究进展,以期为进一步建立辣椒高效组织培养再生体系以及开展其在基因工程中的应用研究提供依据。
- 邱萃何水林
- 关键词：辣椒转基因
- 紫外线照射辣椒叶片cDNA文库构建及部分防御信号基因cDNA的检测
- 2008年
- 对抗病的朝天椒地方品种,以紫外线(UV)处理叶片并提取叶片总RNA,采用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了一个cDNA文库.该文库含有2.6×106个独立的噬菌斑克隆,扩增后滴度达到1.5×109pfu.μL-1,随机挑取的噬菌斑PCR检测发现重组率达90.0%.在搜索、拼接与植物WRKY、bZIP、AP2和E2等重要调节基因同源的辣椒表达序列标签(ESTs),获得重叠群的基础上,分别设计上述基因ESTs重叠群特异性引物,以cDNA文库为模板进行PCR扩增.结果表明,部分上述基因cDNA存在于文库中.因此,本研究所构建的文库可用于进一步分离响应UV的重要调节基因cDNA的分离.
- 官德义赖燕林明王育娜曹蕾何水林
- 关键词：辣椒CDNA文库紫外线
- 辣椒CaROPGEF1 cDNA的分离及其结构和表达的初步分析
- 2010年
- ROP是植物特有的一类Rho相关GTPases,在植物体内通过GTP结合形式与GDP结合形式的切换而对生长发育和适应环境起调节作用.由GTP结合形式向GDP结合形式的转换主要依赖于鸟苷酸交换因子(guanine nucleotide exchangefactor,GEF).本文以锁定于GDP结合形式的辣椒DN-CaROP1突变体为诱饵,采用ProQuestTM酵母双杂交体系,从辣椒幼苗cDNA文库中分离了辣椒GEF阳性克隆,其推导的氨基酸序列与其他植物中发现的GEF具有较高的同源性,并含典型的植物ROPGEF保守域DUF315及N端与C端的高度变化域,将之命名为CaROPGEF1;RT-PCR分析表明,CaROPGEF1在辣椒多种组织中均有表达;进一步酵母双杂交分析表明,CaROPGEF1可与GDP结合态的ROP结合,而不能与GTP结合态的ROP结合.上述结果暗示CaROPGEF1调节的ROP从DN态向CA态的转化在辣椒植株中频繁发生,可能参与辣椒ROP介导的生长、发育和对环境适应的调控.
- 邱爱连蔡汉阳刘林林朱万里赖燕何水林张健
- 关键词：辣椒ROP酵母双杂交
- 辣椒抗菌蛋白cDNA的分离与表达的初步分析
- 2007年
- 本研究从经辣椒疫霉侵染处理的辣椒叶片cDNA文库中分离获得了一个辣椒抗菌蛋白cDNA阳性克隆,其长度为255bp,含有长度为85个氨基酸的开放读码框架,与其它植物抗菌蛋白或几丁质酶有不同程度的同源性,推测为辣椒抗菌蛋白,命名为CansLTPS.cDNA-AFLP分析表明,CansLTPS的转录受UV-B照射和辣椒疫霉侵染的诱导,外源脱落酸(ABA)、乙烯(ETH)、水杨酸(SA)等可不同程度的诱导CansLTPS基因的转录,而MeJA处理对CansLTPS基因的转录表达影响不大,表明CansLTPS基因可应答生物和非生物逆境胁迫,其上游可能涉及ABA、ETH、SA等介入的信号传递途径.
- 邱敏曹蕾贺俐王育娜徐波许先松赖燕林明何水林
- 关键词：辣椒抗菌蛋白CDNA克隆基因表达
- 水稻叶片cDNA-AFLP选择性扩增反应体系的优化被引量：11
- 2008年
- 在水稻Oryza sativa叶片响应稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis取食后的cDNA-AFLP试验中,对25μL体系中预扩增和选择性扩增的引物浓度、dNTP浓度、镁离子浓度及TaqDNA聚合酶用量4种反应条件影响因子进行不同梯度的优化研究。结果表明,PCR选择性扩增反应时,总反应液25μL体系中引物浓度为0.2μmol/L、dNTP浓度为0.2mmol/L、镁离子浓度为2.0mmol/L、TaqDNA聚合酶用量为13.336n kat/25μL时,可得到更多鲜明可辨的TDFs。
- 曹蕾林明王育娜许先松赖燕徐波何水林
- 关键词：水稻CDNA-AFLP
- 聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的改进及其在cDNA-AFLP分析中的应用被引量：9
- 2007年
- 利用电解质梯度变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统对稻纵卷叶螟取食的水稻叶片进行cDNA-AFLP分析,结果表明产生的cDNA条带比普通变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统大约增加30%,解决了传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳在同一块胶板中大片段DNA条带堆积而小片段DNA条带间距过大,且读带数量有限的问题..
- 曹蕾徐波朱万里张国华黄木坤应辰哲何水林
- 关键词：聚丙烯酰胺凝胶电泳CDNA-AFLP
- Gateway技术构建酵母双杂分析用辣椒cDNA文库被引量：10
- 2010年
- 构建cDNA文库是利用酵母双杂交技术开展特定cDNA分离的重要基础工作。利用Gateway技术,在成功提取辣椒总RNA并分离mRNA的基础上,合成了3种读码框的双链cDNA,通过BP反应构建其相应的入门文库,再通过LR反应将cDNA迅速且定向地重组到酵母双杂分析用目的载体pDESTTM22上,构建成高质量目的文库。经检测入门文库和目的文库滴度均达到(4.0～5.0)×106cfu/mL,文库总容量为(2.4～3.0)×107cfu,平均插入片段大小为1250bp,其质量完全满足于进一步利用酵母双杂体系分析目的基因互作蛋白cDNA。
- 邱爱连刘林林蔡汉阳朱万里黄木坤陈雄何水林张健
- 关键词：辣椒GATEWAY
- 紫外线辐射的葡萄幼果cDNA文库的构建被引量：6
- 2007年
- 以紫外线辐射的葡萄幼果为材料提取总RNA,用SMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建cDNA文库,初始文库含有1.5×106个独立的单克隆,扩增后滴度达到1.2×108pfu.mL-1.随机挑取噬菌斑进行PCR检测,发现重组率在92.9%以上.
- 夏信明刘金仙林明王育娜何水林
- 关键词：葡萄幼果CDNA文库紫外线辐射
