国家重点实验室开放基金(SKLVBF200807)
- 作品数：10 被引量：30H指数：4
- 相关作者：倪宏波周玉龙姜海芳王春仁宫大庆更多>>
- 相关机构：黑龙江八一农垦大学中国农业科学院哈尔滨兽医研究所吉林农业大学更多>>
- 发文基金：国家重点实验室开放基金吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 重组猪IFN-α原核表达及其活性分析被引量：2
- 2009年
- 为了表达猪重组α干扰素(rIFN-α)并对它的生物学特性进行研究,本研究采用RT-PCR从猪脾淋巴细胞中扩增出猪IFN-α基因,以pPROExHTa为载体构建了表达重组质粒poIFN-α,转化宿主菌BL21,经IPTG诱导猪rIFN-α获得了表达,其分子量约22ku。该重组蛋白以包涵体形式存在,其表达量占总菌体蛋白7%。采用Ni-Ni金属螯合亲和层析方法纯化,其纯度达到80%以上,包涵体经复性后,在WISH/VSV系统上,采用细胞病变抑制法测定表明,其稀释度在小于1:103时才有抗病毒活性。本实验表达的猪rIFN-α具有一定的抗病毒活性,为研究具有广谱抗病毒效应的猪干扰素具有重要意义。
- 高明魏华
- 关键词：原核表达
- 牛无浆体病的研究进展被引量：7
- 2010年
- 牛无浆体病主要是由边缘无浆体经脾传播的专性寄生于红细胞内的血液传染病,给养牛业带来较大的经济损失。文章对该病的病原、流行病学、临床症状、病理变化,病原诊断与检测及疾病防治等方面做了较为详细的介绍,旨在为我国开展该病的研究提供理论参考。
- 倪宏波姜海芳周玉龙辛九庆
- 关键词：边缘无浆体病
- 边缘无浆体病动物模型的建立及其生理指标变化规律的研究被引量：1
- 2010年
- 建立边缘无浆体病的动物疾病模型。采用地塞米松注射液长期抑制实验动物的免疫力,通过犊牛颈静脉接种含有无浆体病原的牛血液,监测奶牛无浆体感染过程中其生理指标的变化趋势,以及在实验动物体内的消长规律,建立起无浆体人工感染动物模型。无浆体感染实验动物有5～7d的潜伏期,感染早期体温先升高后回复正常,呼吸先加快后回复正常水平,心率无明显变化。边缘无浆体感染过程中,红细胞出现大量变形和破碎,数量减少,白细胞呈现减少升高再减少的过程后,逐步恢复到正常水平,而血小板数量增加。因此,可用1月龄犊牛在免疫抑制情况下建立无浆体人工感染动物模型,揭示犊牛在感染边缘无浆体过程中其生理与血液指标的变化规律。
- 倪宏波宫大庆姜海芳王欣周玉龙郭爽王春仁
- 关键词：边缘无浆体奶牛动物模型
- 牛边缘无浆体膜表面蛋白的研究进展被引量：1
- 2010年
- 边缘无浆体(Anaplasma marginale,A.marginale)是一类专性寄生于脊椎动物红细胞的无固定形态的微生物。边缘无浆体具有6种主要的膜表面蛋白,统称为MSPs,包括MSP1a、MSP1b、MSP2、MSP3、MSP4和MSP5。文章主要就边缘无浆体膜表面蛋白的基因组组成及免疫学功能进行了综述,为边缘无浆体致病机理及新型疫苗研制等方面的研究提供理论参考。
- 倪宏波姜海芳钱爱东
- 关键词：边缘无浆体基因组免疫学功能
- 边缘无浆体的病原学与疫苗研究进展被引量：3
- 2009年
- 对牛边缘无浆体分类学、形态学及增殖等方面的病原学特点进行了综述,并介绍了牛边缘无浆体疫苗发展方面的国内外进展情况。
- 倪宏波周玉龙钱爱东
- 关键词：病原学疫苗
- 边缘无浆体膜表面蛋白1a(MSP1a)的克隆与原核表达
- 2010年
- 为了给牛边缘无浆体的诊断和基因工程疫苗的研制提供理论依据,试验以牛边缘无浆体基因组DNA为模板,采用PCR技术对其膜表面蛋白1a(MSP1a)基因进行扩增,将扩增产物转入克隆载体和表达载体中进行克隆和表达,用重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),利用免疫印迹分析鉴定MSP1a基因表达产物的免疫活性。结果表明:MSP1a基因PCR扩增产物与GenBank上的PR1株MSP1a基因的序列同源性达98.3%,编码氨基酸的同源性为98.7%;将该基因亚克隆入原核表达载体pET-28a中,构建了重组原核表达载体;将其转化到DH5α大肠杆菌中,用IPTG进行诱导表达,实现了融合表达,表达产物的分子质量为49 ku;经SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测,MSP1a基因在表达载体中得到高效表达,且表达产物具有免疫活性。
- 姜海芳倪宏波王春仁宫大庆邵光喜周玉龙崔玉东
- 关键词：边缘无浆体克隆原核表达
- 抗牛边缘无浆体MSP5单克隆抗体的制备被引量：4
- 2009年
- 为制备抗牛边缘无浆体膜表面蛋白(MSP5)单克隆抗体(MAb),以原核表达的重组MSP5蛋白(rMSP5)免疫BALB/c鼠,应用常规杂交瘤技术获得2株能稳定分泌特异性MAb的杂交瘤细胞株(1D8和2F3)。间接ELISA检测腹水效价分别为5.49×105和7.83×104,亚类鉴定其重链为分别为IgG2b和lgG2a,轻链均为κ型;ELISA叠加试验表明这2株MAb识别的抗原位点相同或相近;Western blot结果显示2株MAb均能与rMSP5发生反应。特异性抗MSP5的MAb的获得,为牛边缘无浆体检测奠定了基础。
- 倪宏波姜海芳周玉龙王春仁辛九庆宫大庆钱爱东
- 关键词：边缘无浆体单克隆抗体
- 从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5单克隆抗体识别的抗原表位被引量：4
- 2010年
- 目的从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5(Membrane surface protein5,MSP5)单克隆抗体识别的抗原表位。方法用MSP5单克隆抗体1D8作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并提取阳性克隆的单链DNA,进行测序分析。结果从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与MSP5单抗1D8特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为LING。竞争抑制试验表明,含特异序列的克隆能与MSP5重组蛋白抗原竞争。结论初步确定MSP5单克隆抗体1D8的抗原表位为线性表位,为进一步研究其在边缘无浆体诊断及新型疫苗研制中的作用奠定了基础。
- 倪宏波辛九庆姜海芳周玉龙王春仁宫大庆
- 关键词：噬菌体展示肽库边缘无浆体抗原表位淘洗
- 空肠弯曲杆菌及其致病机制研究进展被引量：8
- 2010年
- 倪宏波刘思国
- 关键词：空肠弯曲杆菌致病机制食源性疾病生物学特性人兽共患志贺氏菌
- 人工感染边缘无浆体对犊牛血清生化及血液流变学的影响被引量：1
- 2010年
- 为通过人工感染的方法建立牛边缘无浆体病动物模型,研究边缘无浆体(A.marginale)感染对犊牛血液主要生化指标和血液流变学指标的影响,本实验采用地塞米松注射液长期抑制一月龄犊牛的免疫力,经颈静脉接种含有A.marginale的血液,定期采血,测定其血液主要生化指标和血液流变学指标。结果表明,感染A.marginale后,血液主要生化指标与对照组相比,谷丙转氨酶(GPT)含量极显著升高(p<0.01),谷草转氨酶(GOT)含量显著升高(p<0.05),血糖(GLU)含量显著降低(p<0.05),总胆固醇(T-CHO)含量极显著降低(p<0.01),而碱性磷酸酶(ALP)、血铁(Fe)、尿素(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-HBD)和肌苷(Cr)含量均无显著性变化;血液流变学主要指标与对照组相比,全血还原高切比粘度和红细胞刚性指数(IR)极显著降低(p<0.01),全血中切比粘度、全血低切比粘度和全血还原低切比粘度显著降低(p<0.05),全血高切比粘度、血浆比黏度(ηp)、红细胞压积(PCV)和红细胞聚集指数(AI)均无显著性变化。
- 倪宏波宫大庆姜海芳周玉龙郭爽王春仁
- 关键词：犊牛边缘无浆体血清生化血液流变学
