国家重点基础研究发展计划(2006CB101903)
- 作品数：8 被引量：62H指数：6
- 相关作者：王锡锋于嘉林韩成贵李大伟吴蓓蕾更多>>
- 相关机构：中国农业科学院植物保护研究所中国农业大学北京农学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家转基因植物研究与产业化专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 水稻矮缩病毒外壳蛋白P9具有体内转录激活活性被引量：12
- 2007年
- 将RDV微核心蛋白基因S9克隆到酵母表达载体pGBKT7中,转入AH109酵母细胞,转化子可以在SD/Trp-His-Ade-多营养缺陷固体培养基上正常生长,证明RDV P9在酵母中具有转录激活活性,运用β-半乳糖苷酶的活性分析对重组质粒转化子的转录激活程度做了定量分析,发现与正对照相比,转化pGBK-S9的酵母菌中β-半乳糖苷酶活性可达到正对照的40%以上。构建了含有gusA报告基因的植物表达载体用来分析P9在植物中的转录激活活性,实验结果表明,融合GAL4 DB的P9蛋白可以在植物体内激活报告基因的表达,Western印迹法分析表明了P9蛋白在酵母和植物中均可以表达。证明了在植物体内RDV P9蛋白同样能够激活基因的转录,暗示该蛋白可能在病毒的侵染和复制过程中参与调控病毒或寄主基因的转录表达。
- 尹哲吉栩吴云锋李毅
- 关键词：水稻矮缩病毒转录激活活性
- 甜瓜蚜传黄化病毒侵染性cDNA克隆的构建
- 本文以双元载体pCass-RZ为载体，结合PCR和酶切的方法，获得双35S启动子下的MABYV全长cDNA克隆，经酶切鉴定和测序验证，命名为pCaMA。质粒转化农杆菌菌株C58CI，以农杆菌浸润的方法接种适龄本生烟(Ni...
- 向海英尚巧霞董书维韩成贵李大伟于嘉林
- 关键词：植物病害基因克隆分子检测
- 大麦黄矮病毒-GAV在燕麦植株体内运动规律的初步研究被引量：12
- 2009年
- 利用RT-PCR方法研究了大麦黄矮病毒-GAV在燕麦植株内的移动规律。先将介体麦二叉蚜(Schizaphis graminum)在BYDV-GAV新鲜病叶上饲毒,再将获毒蚜虫放置到二叶期的健康燕麦植株接种48h,随后分期提取接种植株的第1～6片叶和根组织的总RNA,利用特异引物扩增BYDV-GAV的外壳蛋白(CP)基因以检测病毒在燕麦植株内的复制和移动。结果表明,在接种5d后,接种叶片(第2片叶)呈现阳性,接种7d后,植株新生的第4片叶被侵染,接种9d后,部分的第3片叶呈现阳性,至接种16d,几乎所有的叶片均呈现阳性。仅在接种的第5、7和9d收集的根组织呈现阳性,而所有的第1片叶均为阴性,可能是由于这些组织内病毒含量太低所致。本研究初步揭示了BYDV-GAV长距离运动的规律并且发现该病毒在燕麦根部从接种到系统发病都没有进行大量增殖,为今后进一步研究病毒运动机制选取适当的植物材料提供了基本信息。
- 王亚南周锟王锡锋周广和
- 关键词：燕麦RT-PCR
- 莴苣花叶病毒北京分离物基因组3'末端序列分析被引量：1
- 2007年
- 笔者通过RT-PCR方法对LMV北京分离物(LMV-BJ)基因组3'端1620nt的核苷酸片段进行了克隆和序列分析(GenBank登录号为EF423619)。所获片段含有NIb基因3'端的574nt,编码NIb C-端190个氨基酸;完整的CP基因,全长为834nt,编码一个由277个氨基酸组成的分子量约为30kDa的结构蛋白;3'非编码区含有209nt。通过序列分析软件将LMV-BJ与已经报道的法国分离物O(X97704)、法国分离物E(X97705),美国分离物(X65652),巴西分离物(AJ278854)和余杭分离物(AJ306288)基因组3'末端和CP基因的核苷酸序列与氨基酸序列分别进行了比较。
- 尚巧霞向海英韩成贵李大伟于嘉林
- 关键词：CDNA克隆和序列分析
- 陕西韩城严重发生的小麦矮缩病病原鉴定与原因分析被引量：11
- 2008年
- 2007年在陕西韩城发现一种新的小麦病毒病害,症状表现为严重矮缩、黄化、条斑和分蘖增多等,发病面积约0.07万hm2,病田减产达50%,严重地块甚至绝收。本研究通过对采集自我国陕西韩城的7个样品进行PCR鉴定、全基因组序列测定及比较,证实陕西韩城样品确是小麦矮缩病毒(WDV)侵染所致,并对发病原因及其流行趋势进行了分析。这是小麦矮缩病在我国麦田大发生的首次报道。
- 王江飞柳树宾吴蓓蕾谢家建王锡锋
- 关键词：分子鉴定
- 植物病毒基因沉默抑制因子研究进展被引量：1
- 2007年
- RNAi是近年来发现的一种重要的基因沉默现象,可以介入植物的整体防御体系,在植物细胞中产生一种不确定的流动信号,使远距离组织的特异RNA序列得到降解。为利于病毒的侵染,植物、动物和昆虫的病毒同时也编码一种蛋白来对抗RNAi,这类蛋白可以抑制RNA沉默的各个步骤,称为RNAi抑制因子,本文对几个研究较清楚的植物病毒抑制因子,从其发现到主要特点、作用机制等方面进行了阐述,并且依据其特点及前景进行归类与展望。
- 吴蓓蕾王锡锋
- 关键词：RNAI植物病毒
- 卫星DNA沉默载体的改良及其改变矮牵牛叶色和花色的研究被引量：7
- 2006年
- 利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)机制可以从基因组序列入手来进行植物基因功能研究,这是一种反向遗传学方法.本室曾成功利用中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)的卫星DNA构建了基因沉默的载体.本研究对该载体进行了改良,在本氏烟上对Su基因的沉默测试表明,改良后的载体与原载体诱导沉默的效率没有差别,但是改良后的载体构建沉默克隆的过程得以简化.进一步用改良后的沉默载体分别抑制矮牵牛内源基因Su和CHS基因的表达.含Su基因的沉默载体接种矮牵牛大约2周后,矮牵牛沿叶脉开始黄化;含CHS基因的沉默载体接种矮牵牛约1个月后,新开的牵牛花上出现花色的褪变,并由单色花变成了杂色花.
- 陶小荣钱亚娟周雪平
- 关键词：双生病毒卫星DNADNAΒ矮牵牛CHS
- 南瓜蚜传黄化病毒湖北和云南分离物的部分序列分析被引量：6
- 2008年
- 本研究从带有黄化症状的南瓜叶片中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增得到来自湖北和云南的南瓜蚜传黄化病毒（CABYV）2个分离物的1375nt特异性核苷酸片段。分别将PCR产物插入到克隆载体pMD19-T并转化大肠杆菌DH5α,对筛选到的阳性克隆进行了序列测定和分析（GenBank登录号为EF488996和EF488997）。所获片段含有部分复制酶基因576nt,非编码区199nt和完整的CP基因600nt,编码一个由199个氨基酸组成的分子量约为22kDa的结构蛋白。湖北和云南分离物与法国分离物、意大利分离物、西班牙分离物、北京分离物和上海分离物的CP基因核苷酸序列和推测氨基酸序列的同源性分别为93.1%-98.5%和91.4%-98.5%。
- 尚巧霞向海英韩成贵李大伟于嘉林
- 关键词：基因组片段RT-PCR
- 水稻黑条矮缩病毒基因组片段6编码一种非结构蛋白被引量：12
- 2007年
- 水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV）是引起我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病的病原。引起玉米粗缩病的RBSDV湖北分离物10条基因组dsRNA全序列已被确定，其中基因组片段6（S6）全长序列为2645bp，只含有一个阅码框（82—2460nt），编码一个分子量约为89．6kDa的蛋白（P6）。为进一步研究该蛋白的生物学功能，在大肠杆菌中表达了RBSDV基因组片段6编码的P6蛋白并制备了相应的抗血清。Western blotting分析显示，P6抗血清不与纯化的RBSDV粒子蛋白发生反应，而在被RBSDV感染的玉米叶片和带毒的传播介体——灰飞虱中可检测到P6。此结果表明，RBSDV—S6编码的蛋白是一种非结构蛋白。
- 方守国王朝辉韩成贵李大伟于嘉林
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒原核表达非结构蛋白
- 甜瓜蚜传黄化病毒基因沉默抑制子的鉴定
- 本文利用农杆菌注射的方法，以野生型本生烟(Nicotiana benthamiana WT)和转GFP的本生烟(N.benthamiana line 16c)(由Dr.David Baulcombe提供)为材料，利用双元...
- 韩艳红向海英李源源韩成贵李大伟于嘉林
- 关键词：基因沉默分子鉴定
