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45S rDNA在不同倍性沙田柚染色体上的荧光原位杂交分析被引量：10: 2007年; 应用荧光原位杂交技术进行45S rDNA在不同倍性沙田柚中期染色体上的定位研究。结果表明:不同材料的NOR位点表现出明显的多态性和杂合性,即二倍体具4个45S rDNA位点,四倍体单株t1和t2则分别具有10个和8个位点。位点在染色体上的位置包括短臂末端、着丝粒区域、着丝粒至短臂区域、着丝粒至长臂区域、长臂末端共5种不同类型。不同材料中包含的位置类型不完全相同。不同位置类型的位点数也不相同,以着丝粒及着丝粒至短臂区域的类型位点数最多,其次是短臂末端。同源四倍体和相应的二倍体相比,出现了DNA水平的变异。对用于荧光原位杂交的柑橘染色体制片方法和rDNA在染色体上的分布位置、同源四倍体和相应二倍体的遗传差异分析、重复序列的染色体原位杂交用于染色体识别和物种演化研究等进行了讨论。; 向素琼汪卫星梁国鲁; 关键词：沙田柚染色体倍性

RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：9: 2009年; 目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测干扰的有效性。光镜及HE染色观察细胞形态的改变,黏附试验、划痕试验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。结果酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性siRNA表达载体的BIU-87细胞RI蛋白的表达水平明显降低,对照组未发生明显改变;转染干扰质粒的细胞堆叠严重,细胞黏附能力显著降低,迁移和侵袭能力显著提高,细胞骨架微丝聚集,伸展出片状伪足。结论已成功构建RI基因siRNA干扰质粒,其可显著提高膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力,说明RI可作为抑制肿瘤迁移和侵袭的有效靶点。; 欧阳溪陈俊霞何晓燕褚颖豪夏俊; 关键词：核糖核酸酶抑制因子 RNA干扰膀胱癌细胞迁移

重组人核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒的构建及表达被引量：1: 2010年; 目的构建携带全长人核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease inhibitor,RI)基因的重组腺相关病毒,并在膀胱癌细胞T24中表达。方法 Trizol法提取人脐静脉内皮细胞ECV30总RNA,经RT-PCR扩增RI基因,克隆至pUCm-T质粒中,再亚克隆至pAAV-IRES-hrGFP载体,构建pAAV-IRES-hrGFP-RI重组质粒,与pAAV-RC和pAAV-Helper质粒共转染HEK293细胞,包装并扩增腺相关病毒RI-AAV,检测其感染性滴度,并转染T24细胞,采用RT-PCR检测RI基因mRNA的转录水平,Westernblot检测RI蛋白的表达水平。结果重组质粒pAAV-IRES-hrGFP-RI经酶切及测序鉴定构建正确;重组腺相关病毒RI-AAV的感染性滴度为1.1×1010U/ml;RI-AAV转染的T24细胞RI基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平较未转染组及空病毒转染组均显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论已成功构建人RI基因重组腺相关病毒,为进一步研究RI对膀胱癌细胞的侵袭和转移的作用奠定了基础。; 褚颖豪欧阳溪何晓燕陈俊霞高娟朱军; 关键词：核糖核酸酶抑制因子腺相关病毒膀胱肿瘤

45S rDNA在不同倍性沙田柚染色体上的荧光原位杂交分析: 应用荧光原位杂交技术进行45S rDNA在不同倍性沙田柚中期染色体上的定位研究表明:不同材料的NOR位点表现出了明显的多态性和杂合性,即沙田柚二倍体具4个位点,沙田柚四倍体2个不同单株t1和t2分别具有10个和8个45S...; 向素琼汪卫星梁国鲁; 关键词：沙田柚多倍体荧光原位杂交; 文献传递

沙田柚多倍体的获得与基因组原位杂交(GISH)分析被引量：21: 2008年; 【目的】沙田柚是中国特有的柚类名优品种,但种子多,一般100粒左右。为创新三倍体无核品种积累育种材料,本研究通过实生筛选获得不同倍性沙田柚新种质,同时运用基因组原位杂交(GISH)技术分析天然与人工四倍体新种质的染色体组组成。【方法】随机采集沙田柚自然授粉果实,萌发种子检测其染色体数目获得倍性变异植株;以2x母株gDNA为探针,同获得的4x植株中期染色体杂交进行GISH分析。【结果】从6000粒沙田柚种子中共获得三倍体5株,四倍体9株;对沙田柚天然与人工四倍体新种质的基因组原位杂交(GISH)分析表明,天然四倍体中有7株为异源四倍体,2株为同源四倍体,秋水仙碱诱导获得的人工四倍体4株均为同源四倍体;初步观察显示;与二倍体相比,四倍体植株生长缓慢,树冠较小,枝短而密生,叶片浓绿,宽度变宽,叶形指数减小,叶片厚度增加明显。【结论】多倍体单胚柚新种质的获得为进一步选育无核品种奠定了基础,同时GISH分析证实了沙田柚雌性未减数配子的存在。; 向素琼梁国鲁李晓林汪卫星郭启高何桥陈瑶; 关键词：沙田柚多倍体基因组原位杂交

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重庆市教育委员会科学技术研究项目(KJ060313)